葡糖醛酸基转移酶与消化道肿瘤研究进展

葡糖醛酸基转移酶(UGT)是二相解毒反应中重要的代谢酶。UGT与肿瘤的研究也逐渐增加。化学致癌是引起新生物转化的重要机制之一,与食管、胃、肝、结肠肿瘤的发病密切相关。现将UGT与消化道肿瘤的关系作一简要概述。

人葡糖醛酸基转移酶介导的黄酮Ⅱ相代谢研究进展

人葡糖醛酸基转移酶(UGT)同工酶在黄酮类化合物Ⅱ相代谢反应中呈重要的作用。本综述总结了近年来国内外学者对黄酮类化合物Ⅱ相代谢中UGT的研究情况,包括各同工酶间的底物差异,结构-代谢活性关系,基因多态性的影响以及黄酮对UGT调控的研究。结果表明,人UGT1A1,1A3,1A8,1A9,1A10和2B15主要参与了广泛黄酮类化合物的葡醛酸结合反应,而UGT1A5,1A7和2B7对黄酮代谢的作用有待于进一步研究证明,UGT的基因多态性、结构-代谢关系、调控机制为生物黄酮的合理利用以及此类化合物的合理药物设计提供了重要的参考依据。

胆红素和胆汁酸调节葡萄糖醛酸基转移酶的表达

目的 :探讨胆红素和胆汁酸是否通过调节尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶 (UGT)的表达来加速自身的代谢。方法 :应用原始鼠肝细胞培养和Northen斑迹杂交技术 ,观察胆红素和胆汁酸处理肝细胞前后UGT同工酶mRNA的变化。结果 :用胆红素处理肝细胞 2 4h ,UGT1A1和UGT1A5mRNA的表达显著增加 ,分别为对照组的 16 3%和 133%。当肝细胞暴露于胆酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、猪脱氧胆酸和石胆酸时 ,UGT2B1mRNA的表达水平明显增高 ,分别为对照组的 15 4 %、16 0 %、138%、15 3%和 149%。猪脱氧胆酸亦增加UGT2B3mRNA的表达。结论 :胆红素和胆汁酸可调节UGT的表达 ,这种调节可能会在清除病理性增高的胆红素和胆汁酸中起代偿作用。

胆红素-尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶A1基因多态性在Gilbert综合征发病机制中的作用

Gilbert综合征属于先天性非溶血性黄疸,是一种胆红素代谢障碍性疾病。胆红素-尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)缺乏或活性降低是Gilbert综合征发病的重要原因。UGT1A1是UGT的同工酶,也是肝脏结合胆红素的关键酶。UGT1A1基因突变,导致UGT结构异常,从而导致胆红素结合功能减弱或丧失。介绍了UGT1A1及其基因多态性在Gilbert综合征发病机制及诊断价值等方面的进展。

RP-HPLC法测定人尿苷二磷酸葡醛酸转移酶UGT1A3转基因细胞中槲皮素

目的:建立反相高效液相色谱法测定人重组UGT1A3转基因细胞中槲皮素,并研究该酶对槲皮素的相关代谢及动力学参数测定。方法:Bac-to-Bac系统表达的人UGT1A3重组酶细胞破碎液与槲皮素共孵育之后,以乙腈沉淀蛋白,采用木犀草素为内标,以Phenomenex Luna C18柱为分析柱,甲醇(A)-0.1%甲酸溶液(B)为流动相梯度洗脱:0~25 min(30∶70-80∶20,A∶B),>25~25.5min(80∶20),>25.5~27 min(80∶20-30∶70),>27~30 min(30∶70);流速1.0 ml/min,紫外检测波长为368 nm。结果:槲皮素在5~200μmol/L内线性关系良好(r=0.9999),检测限为1.25μmol/L(S/N≥3),定量限为5μmol/L(S/N>10,RSD=6.99%),方法回收率达99.1%~103.5%,日内、日间RSD分别<2.5%和<8%。另测得UGT1A3催化槲皮素的Km为(62.95±13.16)μmol/L,Vmax为(284.50±24.35)nmol.min-1.g-1,清除率Vmax/Km为4.52 ml.min-1.g...

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A6基因多态性对丙戊酸钠代谢的影响

目的探讨尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A6(UGTlA6)基因多态性对丙戊酸钠血药浓度的影响。方法选择单药服用丙戊酸钠且无肝肾功能异常的癫痫患者67例,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分析患者的 UGT1A6基因552位点的多态性;同时应用荧光偏振免疫法(FPIA)测定患者丙戊酸钠的血药浓度。结果 67例患者中 UGT1A6的552位点基因型为 A/A,A/C 及 C/C 的例数分别40(59.7%)、24(35.8%)及3(4.5%)。A/A 组标准血药浓度均值(4.32±0.21)μg·kg·ml^(-1)·mg^(-1)和 A/C 组(3.43±0.30)μg·kg·ml^(-1)·mg^(-1)比较差异有统计学意义;含有 C 等位基因的 A/C 及 C/C 作为一组[标准血药浓度均值(3.40±0.28)μg·kg·ml^(-1)·mg^(-1)]与 A/A 组比较,其标准血药浓度均值差异具有统计学意义。结论 UGT1A6是丙戊酸钠的代谢酶,UGT1A6基因多态性可影响丙戊酸钠的代谢,UGT1A6基因552位点含有 C 等位基因的患者应用丙戊酸钠应较常规增加用药剂量。

UGT1A基因亚族在结肠粘膜及肝组织中的表达

目的:从mRNA水平及蛋白质水平分析葡萄糖醛酸转移酶UGT1A基因位点在结肠粘膜及肝组织中的表达。方法:结肠癌病例组25例,正常人肠道粘膜20例、正常肝组织12例。用逆转录聚合酶链反应分析结肠癌组、正常人肠道粘膜、肝组织中UGT1AmRNA的表达;用免疫印迹检测各组UGT1A蛋白的表达;用间接免疫荧光技术分析UGT1A蛋白的荧光定位及表达强度。结果:结肠癌组织中UGT1AmRNA表达低于其周围正常粘膜,而后者低于正常人肠粘膜的表达量,正常人群结肠粘膜中,UGT1AmRNA表达总体低于肝组织,P<0.01。结肠癌组、正常人结肠粘膜组织呈现个体差异性表达,而肝脏组织的表达较均质;结肠癌组织、癌周正常粘膜及正常人肠道粘膜中,UGT1A各同工型的表达例数均不相同。UGT1A1、1A3、1A4、1A6、1A9mRNA表达水平在癌组织低于周围正常粘膜,P<0.01,而UGT1A8、1A10在癌组织中mRNA表达量高于周围正常粘膜,P<0.01。肝组织中12例全部均质表达UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A6、UGT1A9;UGT1A蛋白灰度比值在结肠癌组织显著低于其周围正常组织,后者又低于正常人肠粘膜,P<0.01。各组内蛋白表达的深浅度亦各不相同,而肝组织的蛋白表达较均质;UGT1A蛋白在结肠定位于粘膜层的上皮细胞,在肝小叶中可见整个肝小叶均质的荧光定位。两种组织的单个细胞内荧光强度等同可比,但单个癌细胞的荧光强度低于正常粘膜上皮细胞。结论:UGT1A基因位点的多态表达不仅存在于结肠癌组织及周围的正常组织,亦存在于正常人群肠粘膜,而肝脏呈均质性表达;结肠粘膜上皮UGT1A基因位点在转录水平及蛋白水平均存在着差异性,不同个体对致癌物的易感性不同可能是这种差异表达的结果。

妊娠引起的药动学变化

妊娠使人体的生理发生变化,从而影响代谢酶活性和肾排泄能力,使药物的血浆浓度发生改变,因此需要调整药物剂量。本文从药物的吸收、分布、代谢和排泄4个方面概述了因妊娠而引起的药动学改变。

肝硬化对肝脏UGTmRNA表达的影响

目的:探讨肝硬化及肝纤维化对尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(UGT)表达水平的影响。方法:应用RT-PCR和Southern杂交技术,观察肝硬化患者肝脏组织中UGT同工酶mRNA表达水平的差异,及肝纤维化对UGT表达水平的影响。结果:肝硬化组UGT2B15、UGT1A6的mRNA水平高于对照组分别为227%和166%;肝纤维化对UGT2B15RNA的表达有显著的影响,4级肝纤维化患者UGT2B15mRNA水平为0级肝纤维化的172%、1级的208%、2级的243%。3级肝纤维化患者UGT2B7mRNA水平为0级肝纤维化的192%、1级的208%、2级的156%。结论:肝硬化可影响肝脏葡萄糖醛酸转移酶同工酶的表达水平;肝纤维化对UGT mRNA的表达有显著的影响。

肝炎和肝硬化对肝脏UGTmRNA表达的影响

目的:探讨肝炎和肝硬化疾病对尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(UGT)表达水平的影响。方法:应用RT-PCR和Southern杂交技术,观察肝硬化和肝炎患者肝脏组织中UGT同工酶mRNA表达水平的差异,以及炎症和纤维化程度对UGT表达水平的影响。结果:与对照组比较,肝硬化组和肝炎组UGT2B15的mRNA的水平增高为210%和227%(P<0.05),UGT1A6的mRNA的水平增高为155%和166%(P>0.05)鸦纤维化对UGT2B15RNA的表达有显著的影响,与0级纤维化相比较,4、1、2级纤维化患者UGT2B15mRNA水平分别为172%、208%和243%,三级间差异有统计学意义(P<0.01);3、1、2级纤维化患者UGT2B7mRNA水平分别为192%、208%和156%,三者间差异无统计学意义(P>0.05)。炎症程度对大多数UGT同工酶的表达无明显影响。结论:肝炎和肝硬化可影响肝脏UGT同工酶的表达水平;纤维化对UGTmRNA的表达有显著的影响,炎症程度对大多数UGT同工酶的表达无明显影响。

UGT1 A1基因启动子区多态性与伊立替康化疗不良反应关系的研究？

目的研究尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGT1A1）基因启动子区多态性与伊立替康化疗不良反应之间的关系。方法选取本院以伊立替康为基础的化疗方案的恶性肿瘤患者212例,观察记录化疗期间患者出现不良反应（中性粒细胞减少和迟发性腹泻）的情况,并抽取外周血检测 UGT1 A1基因启动子区的多态性,统计分析 UGT1 A1基因启动子区多态性与伊立替康化疗期间不良反应的关系。结果212例患者中,181例（85.4%）基因型为 UGT1A1（6/6）,31例（14.6%）基因型为 UGT1A1（6/7）,未检测到 UGT1A1（7/7）基因型。以上两组患者发生Ⅲ~Ⅳ级中性粒细胞减少者分别为24例（13.3%）和6例（19.4%）,两者相比较差异无显著性（P=0.368）,发生Ⅲ度和Ⅳ度腹泻者分别为19例（10.5%）和9例（29%）,两者相比较差异有显著性（P =0.005）。结论与 UGT1A1（6/6）基因型相比,UGT1A1（6/7）基因型可明显增加恶性肿瘤患者在伊立替康化疗时发生Ⅲ~Ⅳ度腹泻的风险,但不会增加患者Ⅲ~Ⅳ级中性粒细胞减少的风险。临床检测 UGT1 A1基因启动子区多态性可以预测伊立替康化疗不良反应的发生。

P364L突变降低UGT1A1酶对非结合胆红素的催化活性

目的研究尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶1A1的P364L突变型(c.1091 C>T)对催化非结合胆红素葡糖醛酸化的影响。方法构建含有UGT1A1编码序列的野生型和P364L突变型质粒,转染HEK293细胞,表达野生型与突变型蛋白;Western blot验证野生型和P364L突变型蛋白表达情况;超声裂解细胞提取表达蛋白;设计两组反应,野生型为对照组,P364L突变型为实验组,分别催化非结合胆红素反应,HPLC定量检测两组中非结合胆红素浓度变化情况。结果对照组中非结合胆红素的浓度随着时间的延长呈逐渐下降的趋势,而结合胆红素的浓度随时间延长逐渐升高;实验组中非结合胆红素浓度下降程度远小于对照组,未见明显的结合胆红素峰值;反应30 min时计算酶的活性P364L突变型为野生型的14.2%。结论突变酶UGT1A1-P364L催化非结合胆红素能力较野生型明显降低。

小鼠胚胎干细胞衍生的肝组织微粒体Ⅱ相代谢酶表征

目的:观察小鼠胚胎干细胞定向分化肝组织过程中,肝组织微粒体Ⅱ相代谢酶尿苷-5'-二磷酸葡醛酰转移酶(UGT)1a1、1a6和微粒体谷胱甘肽S-转移酶1(mGST1)的表达及其催化活性。方法:利用拟胚体固有的三胚层结构,直接由中胚层心肌细胞产生成纤维细胞生长因子,自发诱导内胚层细胞发育,并由同步分化的内皮细胞支持肝细胞发育形成肝样组织。在不同分化阶段,基于mRNA表达情况,以Western blot法检测UGT1a1、UGT1a6和mGST1表达特征。至分化终点(第18天)以心肌细胞搏动区域附近表达肝特异性标记物白蛋白确定为肝细胞。超声法碎裂细胞,超速离心制备肝细胞微粒体,以HPLC检测UGTs代谢活性,以色谱法测定并计算mGST1酶催化活性。结果:至分化终点,小鼠胚胎干细胞衍生的肝组织表达UGT1a1、UGT1a6和mGST1,并具有UGT1a1、UGT1a6和mGST1的催化功能。其中分化第18天肝组织GST1催化活性为7.65 nmol·min-1·mg-1。结论:小鼠胚胎干细胞分化的肝组织具UGT1a1、UGT1a6和mGST1代谢功能,可望成为肝脏病理生理和药物Ⅱ相代谢研究的体外模型。

pcDNA3.1-UDPGT1A9表达质粒的构建及其转基因细胞系的建立

目的 为建立能稳定表达人葡糖醛酸转移酶UDPGT1A9蛋白的CHL UDPGT1A9转基因细胞系 ,并鉴定其对药物的葡糖醛酸缀合活性。方法 利用基因亚克隆技术 ,将UDPGT1A9cDNA从pREP9 UDPGT1A9构建到哺乳动物表达载体pcDNA3.1中 ,形成真核细胞表达重组子pcDNA3.1 UDPGT1A9,再转染于中国仓鼠肺细胞 (CHL细胞 )中 ,通过G4 18筛选阳性克隆 ,建立稳定表达UDPGT1A9的CHL UDPGT1A9转基因细胞系 ,并以山萘酚为底物 ,采用HPLC方法对其代谢活性进行鉴定。结果 建立了CHL UDPGT1A9转基因细胞系 ,通过HPLC分析其对山萘酚代谢活性为 (1.0 2± 0 .11) μmol·min- 1·g- 1蛋白 ,而对照CHL细胞对底物无明显代谢。结论构建完成的转基因细胞系能稳定表达人体葡萄糖醛酸转移酶UDPGT1A9。

吉伯特综合征的诊疗与药学监护

目的分析吉伯特综合征的诊疗过程与药学监护重点,为药师参与临床合理用药提供参考依据。方法分析1例吉伯特综合征病人的诊疗过程及药学监护过程,指出吉伯特综合征的诊疗标准以及尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)1A1基因多态性对药物的代谢的影响,讨论临床药师在该诊疗过程中的价值。结果吉伯特综合征发病机制与UGT1A1基因突变相关,检测UGT1A1突变基因是吉伯特综合征诊断的金标准,药师应以基因检测方法为依托,参与到病人的诊断、治疗以及出院随访的全过程,体现药师在促进合理用药,避免药物的滥用方面的价值。结论药师在帮助吉伯特综合征病人确诊及对病人进行药学监护的过程中,促进了合理用药。

甜菜色素合成关键基因的克隆及不同光质对其表达的影响

甜菜色素是红甜菜的次生代谢产物。为了研究这些含氮次生代谢产物合成过程中UDP-葡糖基转移酶基因(UGT)及酪氨酸酶基因(TYR)的功能及对不同光质的响应、表达机制,初步克隆了UGT、TYR基因并进行了相关生物信息学分析,测定其启动子序列。分析表明:UGT、TYR基因启动子序列中共有的主要元件为TATA-box和CAAT-box;调控有机酸的顺式作用元件W-box(TT⁃GACC)和ABRE;光响应元件ACE和G-Box等。由此推测甜菜UGT、TYR基因的表达对不同光质和有机酸类化学调节物质较为敏感。通过红光(RL)、绿光(GL)和蓝光(BL)不同光质处理发现,3种光均会对甜菜幼苗的生长产生抑制作用,RL处理的抑制作用最明显,GL与BL处理的抑制作用无显著差异。在BL处理下,甜菜幼苗色素含量明显上升,UGT和TYR基因的表达量均表现明显上调;在GL处理下,TYR基因的表达量表现明显上调,而UGT基因表现为先下调、后上调的特点;在RL处理下,TYR基因表达量表现为显著上调,而UGT基因表现为先上调后下调,中间平稳,后期上调的特点,甜菜幼苗色素含量明显下降。

遗传性疾病

0228898 来自17号染色体的额外标记染色体导致了17p10-p12三体:分子分析与表型描术/Stankiewicz P//Clin Genet.-2001,60(5).-336～420 哈医图 0228899

中国北方汉族癫痫患者UGT1A4基因分布特点及其多态性与拉莫三嗪血药浓度的关系

目的研究尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGT）1A470C〉A（P24T）和142T〉G（IA8V）基因多态性在拉莫三嗪单药治疗的中国北方汉族癫痫患者中的分布特点及UGT1A470C〉A和142T〉G各基因型的突变频率与拉莫三嗪血药浓度的关系。方法收集2011年6月至2012年9月吉林大学第一医院和吉林大学中13联谊医院正规、单一服用拉莫三嗪的癫痫患者106例，应用高效液相色谱串联质谱电喷雾检测法检测拉莫三嗪的血药浓度，应用直接测序法对拉莫三嗪代谢酶UGTIA4P24T和UGT1A4L48V进行基因型分析，并与其他人群的相关研究进行了对比分析。结果所有患者UGT1A4（70C〉A）基因型均为70CC，无突变；而UGT1A4（142T〉G）TT、TG、GG基因型频率分别为77．36％、20．75％、1．89％。UGT1A4142T〉G基因多态性的分布特点与其他亚洲人群（13本、韩国）相比，差异无统计学意义，与白种人相比（约旦、西班牙等），差异有统计学意义。根据UGT1A4（142T〉G）基因型分为A组（142TG＋142GG）和B组（142TY），B组患者的拉莫三嗪标准化血药浓度的平均值[（4．503±1．470）μg／ml]较A组[（2．325±0．599）μg／ml]高，差异有统计学意义（Z=-6．357，P〈0．01）。发现2例UGT1A4127delA基因型患者的拉莫三嗪标准化血药浓度极高，其中1例患者（10．15μg/ml）因出现严重皮疹而停药。结论中国北方汉族癫痫患者UGT1A4基因存在多态性，其中UGT1A4142T〉G、127delA基因多态性可影响拉莫三嗪的血药浓度，是拉莫三嗪血药浓度存在个体差异的重要因素。