原发性肝内胆管结石患者肝细胞中UDP-GT mRNA原位分子杂交

目的:观察原发性肝内胆管结石患者肝细胞内匍萄糖醛酸转移酶(UDP-GT)活性变化和该酶mRNA表达.方法:①用UDP-葡萄糖醛酸和2-氨基酚为底物,测定肝组织均浆UDP-GT活性.②地高辛标记cDNA探针与肝组织石蜡切片进行原位杂交,图像分析仪进行灰度测定,观察mRNA的表达.结果:患者组27%的患者UDP-GT活性降低,而正常对照组仅有14%的人降低;UDP-GT mRNA的表达虽有降低趋势,但统计学分析差异不显著.结论:原发性肝内胆管结石部分患者肝细胞内UDP-GT活性降低.

UGT75B1、UGT71B6、UGT71C5酶活性及酶反应动力学分析

运用PCR扩增获得了属于尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶(UGT)家族UGT75B1、UGT71B6、UGT71C5的cDNA序列,构建了三种基因的GST融合表达载体,使用大肠杆菌对三种基因进行原核表达,从裂解液上清中获得具有活性的目的蛋白.分别以ABA、对氨基苯甲酸作为反应底物,通过高效液相色谱法,测定三种蛋白的酶活力.结果发现除了UGT75B1对对氨基苯甲酸表现出很高的活性以外,另外两种蛋白仅表现出了低水平的活性.三种蛋白对ABA都表现出了活性,UGT71B6具有最高的酶活力.对UGT75B1、UGT71B6、UGT71C5三种蛋白对ABA的作用进行了体外酶反应动力学分析,测定出它们的Km值分别为:0.73、0.43和0.45mM.以上结果说明UGT75B1对对氨基苯甲酸的活性明显高于ABA,对氨基苯甲酸是其专一底物.UGT71B6和UGT71C5对ABA都有较高的活性,两者Km值差距不大.