Sau MurA的表征及依布硒啉对Sau MurA和金黄色葡萄球菌的抑制作用

目的 对金黄色葡萄球菌UDP-N-乙酰葡糖胺烯醇丙酮转移酶(Staphylococcus aureus UDP-N-acetylglucosamine enolpyruvyl transferase,Sau MurA)酶学特性和活性位点进行表征,探究依布硒啉对Sau MurA和金黄色葡萄球菌的抑制作用。方法 构建Sau MurA表达系统,利用亲和层析方法纯化MurA蛋白,通过孔雀石绿检测法对其活性进行鉴定,并对其酶学特性进行分析;利用定点突变方法对MurA的6个特定氨基酸位点进行突变,构建突变蛋白表达体系,确定MurA活性位点。利用依布硒啉对Sau MurA和金黄色葡萄球菌及其成熟生物膜进行处理,探究依布硒啉的抑制作用。结果 确定了Sau MurA具有UDP-N-乙酰葡糖胺烯醇丙酮转移酶活性,在37℃和pH=7.5时表现出最大活性。UDP-N-乙酰葡萄糖胺(UDP-N-Acetyl-glucosamine enolpyruvyl transferase, UNAG)的Km为(0.238±0.043)mM,磷酸烯醇式丙酮酸(phosphoenolpyruvate, PEP)的Km为(0.531±0.046) mM。6个Sau MurA突变蛋白均无活性。依布硒啉对Sau MurA和金黄色葡萄球菌均有抑制作用,半抑制浓度(IC_(50))和最小抑制浓度(MIC)分别是4.9μM,4.28μg/mL。当药物浓度为4×MIC,明显抑制细菌的生长。对于成熟生物膜的抑制作用,16×MIC依布硒啉的抑制率约为80%,相同浓度下的利福平抑制率约为40%。结论 Sau MurA在37℃和pH=7.5时表现出最大活性,具有较低的底物亲和力。确定K22,N23,C119,R124,D308,R400是Sau MurA重要的活性位点。依布硒啉抑制Sau MurA的活性和金黄色葡萄球菌的生长,并有效地去除金黄色葡萄球菌的成熟生物膜。

以细菌中烯醇式丙酮酸转移酶为作用靶点的新天然抑制剂(英文)

肽聚糖是细菌细胞壁的重要成分,烯醇式丙酮酸转移酶(EPT)是调节肽聚糖合成初始阶段的关键酶。通过活性筛选,发现了三个对EPT有抑制活性的天然产物(化合物1～3),它们皆为EPT的新抑制剂。体外抗真菌实验发现,化合物2和3对光滑念珠菌具有较好的生长抑制作用。另外,化合物3还具有一定的肿瘤细胞毒活性。

磷霉素细菌耐药机制研究进展

多重耐药菌和泛耐药菌的不断出现,给临床抗感染治疗带来严峻挑战。磷霉素作为传统药物之一,具有能与多种抗菌药物联合使用并呈现协同杀菌作用的特点,目前主要用于治疗尿路感染,以及联合治疗多重耐药菌引起的感染。磷霉素在临床的大量使用,导致其耐药率逐年增加,限制了磷霉素在抗感染治疗中的应用。目前,磷霉素的细菌耐药机制主要包括磷霉素靶酶突变及过表达、磷霉素摄取减少、磷霉素修饰酶表达、外排泵机制和磷霉素异质性耐药等。未来对其耐药机制进行深入研究,将对保护磷霉素的敏感性、减缓其耐药性的发生具有重要意义。