重叠延伸PCR法构建UGRP1基因启动子的点突变表达载体

背景与目的:构建UGRP1基因启动子的定点突变表达载体。材料与方法:以插入UGRP1基因正常启动子的质粒pGL3-UGRP1(-112G)为模板,用重叠延伸PCR定点诱变技术,对-112位点的碱基进行定点突变,并构建定点突变表达载体。结果:DNA测序表明,UGRP1基因启动子-112处的碱基已由G突变为A,成功实现定点诱变。结论:重叠延伸PCR定点诱变技术高效、简便。pGL3-UGRP(-112A)的成功构建,为进一步研究-112G/A多态性对该基因转录活性的影响奠定了基础。

子宫球蛋白相关蛋白1基因多态性与新疆哈萨克族Graves病相关性研究

目的探讨子宫球蛋白相关蛋白1（UGRP1）基因的部分单核苷酸多态性（SNP）与新疆哈萨克族Graves病有无相关性，从分子水平探讨新疆哈萨克族Graves病的发病机制。方法以170例散发Graves病患者（病例组）及186例健康对照者（对照组）作为研究对象，采用外周血白细胞抽提DNA，设计引物，多重聚合酶链式反应扩增，虾碱酶纯化，片段延伸，在基因芯片上点样，用MassARRAY Analyzer进行SNP分柝。结果①在UGRP1基因的5’端和3’端、启动子区、外显子区、内含子区共发现33个多态位点。②，1．3C／A、I1-2，＋271T／-、I1．5-rs6859391C／G、rs4705204G／T位点的基因型和等位基因频率在病例组和对照组中差异有统计学意义（P〈0．05），可能与新疆哈萨克族Graves病有相关性。其余29个位点无统计学意义（P〉0．05），可能与哈萨克族Graves病不相关。③由-1664A／T、-1301～-1303AAA／-、-718G／A、-623—622AG／T、-112G／A、＋222C／A、＋271T／-、＋3337G／A位点组成的各单倍型在病例组和对照组中差异均无统计学意义，与Graves病发病不相关。结论UGRP1基因的（I1．3）C／A、I1-2，＋271T／-、I1．5-rs6859391C／G、rs4705204G／T位点与新疆哈萨克族Graves病可能相关。初步表明UGRP1基因可作为新疆哈萨克族Graves病的一个致病易感基因。