焦磷酸测序技术检测UGT1A3和UGT2B7在中国汉族人群中的基因多态性

目的建立焦磷酸测序技术(pyrosequencing)研究二相代谢酶UGT1A3和UGT2B7基因多态性在中国汉族人群中的分布。方法应用带生物素标记扩增引物并经PCR扩增和Beads分离,制备UGT1A3和UGT2B7焦磷酸测序单倍摸板。在PYroMarkID焦磷酸测序上进行焦磷酸测序,检测233血样的DNA标本的17个SNP位点,以确定血样DNA标本的的基因型。结果 233例血样的DNA标本中,UGT1A3等位基因有9种表型,分别为UGT1A3*1*1、UGT1A3*1*2、UGT1A3*1*3、UGT1A3*1*4、UGT1A3*1*5、UGT1A3*2*3、UGT1A3*2*4、UGT1A3*3*3和UGT1A3*3*5。UGT2B7-1和UGT2B7-2各有3种基因型,分别为G/G型、G/T型、T/T和C/C型、C/T型、T/T型。结论我国汉族人群中UGT1A3和UGT2B7基因突变较高。

UGT1A3基因多态性与高血压肿瘤等疾病关系的研究

目的研究UGT1A3基因多态性分布与高血压、肿瘤等疾病的关系。方法用焦磷酸测序法对UGT1A3单核苷酸多态性位点进行基因分型,研究UGT1A3基因多态性分布与高血压病、肿瘤和糖尿病的关系。结果高血压病和糖尿病患者组的UGT1A3突变基因频率与健康受试者组比较无显著性差异;肿瘤患者组UGT1A3-1、UGT1A3-2、UGT1A3-3和UGT1A3-4突变基因频率显著高于健康受试者组。提示UGT1A3-1、UGT1A3-2、UGT1A3-3和UGT1A3-4基因突变可能是肿瘤的易感基因。结论携带UGT1A3-1、UGT1A3-2、UGT1A3-3和UGT1A3-4突变基因者可能易患肿瘤;UGT1A3基因突变与高血压病和糖尿病无关。

人UGT1A3催化黄酮类化合物葡醛酸结合反应定量构效关系研究

目的建立人UGT1A3催化黄酮类化合物定量构效关系,考察不同结构参数对葡醛酸结合反应的影响。方法采用半经验量子化学计算法MOPAC-AM1及逐步回归方法对11个黄酮类化合物的结构参数和UGT1A3催化葡醛酸反应的Km值进行定量构效关系研究。结果所建立的QSMR模型(pKm=-2.207 07+0.002 56HOF+3.212 90 QC5)具有较好的拟合性。结论分子生成热(HOF)和5位C上的静电荷这两个结构参数是影响其葡醛酸结合活性的主要结构因素。

人UGT1A3重组酶催化芹菜素葡醛酸结合反应

目的旨在了解人UGT1A3重组酶与芹菜素的有关代谢及其酶动力学参数,并阐述不同有机溶剂对酶动力学参数测定的影响。方法采用Bac-to-Bac系统表达人UGT1A3重组酶与芹菜素37℃共孵育,用HPLC法测定孵育液中剩余底物浓度,利用Lineweaver Burk法计算酶动力学参数,并进一步进行代谢物的确认。同时考察了用不同有机溶剂溶解底物对酶动力学参数测定的影响。结果采用Bac-to-Bac系统表达人UGT1A3重组酶,测得其催化芹菜素的Km为(28.88±2.47)μmol.L-1,Vmax为(224.19±21.11)nmol.m in-1.g-1,Vmax/Km为(7.75±0.29)mL.m in-1.g-1。不同有机溶剂对酶动力学参数测定无显著影响。结论芹菜素可被人UGT1A3重组酶催化,进行葡醛酸结合反应。