基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS雀嘴茶醇提液的成分及活性研究

基于超高效液相色谱串联四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱快速分析雀嘴茶醇提液的成分,对其体外抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性进行研究。结果表明:从雀嘴茶醇提液中鉴定出1 321个代谢物,其中有1 085个代谢物包括11个超类匹配到人类代谢数据库中,含量较高的活性代谢物,包括新甘草苷、扁蓄苷、醋硝香豆素、槲皮素-3-O-葡萄糖苷桂皮鞣质B1等苯丙素类和芳香聚酮类、咖啡因等有机杂环化合物类、阿糖腺苷等核苷酸及其衍生物以及1-咖啡酰-β-D-葡萄糖、3-O-阿魏酰奎尼酸、绿原酸、2-O-咖啡酰熊果苷等咖啡酰类。雀嘴茶醇提液的DPPH·清除率可达93.56%,ABTS^(+)·清除率可达99.04%,OH·清除率可达94.82%,总还原能力随着醇提液中总多酚浓度的增加而升高且效果极为接近阳性对照抗坏血酸;对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的抑制率分别可达81.50%和58.58%。

基于UHPLC-Q-Orbitrap-MS比较不同产地黄芪饮片的成分差异

目的探究黄芪的3个重要产地(山西浑源与朔州、甘肃渭源与岷县、陕西子洲)所产黄芪饮片的成分差异,为其基原鉴定与质量研究提供参考依据。方法用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术(UHPLC-Q-Orbitrap-MS)测定3个不同产地黄芪饮片的化学成分。以变量投影重要性(VIP)>1、P<0.05为标准,筛选获得其显著差异成分,用SIMCA软件对所得化合物及差异化合物进行聚类分析、偏最小二乘法判别分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)。结果4-羟基肉桂酸、胱氨酸、刺芒柄花素等21个化合物在甘肃、陕西、山西3个产地黄芪之间存在显著差异,其中甘肃与山西产地的黄芪差异性成分有1个,山西与陕西产地的黄芪差异成分有11个,甘肃与陕西产地的黄芪差异成分有18个。结论基于UHPLC-QOrbitrap-MS液质联用技术及聚类分析、PLS-DA等成分分析方法所得21个差异性成分,可为不同产地及品种黄芪饮片的来源鉴定及质量控制提供理论依据。

基于UHPLC-Q-Orbitrap/MS鉴定当归四逆颗粒化学成分

本研究运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UHPLC-Q-Orbitrap/MS)技术快速鉴定当归四逆颗粒的化学成分。采用SUPELCO C18色谱柱(100 mm×4.6 mm×2.7μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,正、负离子模式下采集数据。根据精确质荷比和二级质谱碎片离子信息,结合相关文献快速鉴定当归四逆颗粒的成分,并对化合物的药味来源进行归属。结果表明,在正、负离子模式下,分别从当归四逆颗粒鉴定出34、38种化合物,其中包括20种黄酮类、15种有机酸类、11种皂苷类、9种萜类、5种苯酞类、1种苯丙素类、1种醛类、1种核苷类、1种木脂素类及8种其他类化合物。本研究可为阐释当归四逆颗粒的药效物质基础提供依据。

基于UHPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS技术对陕产附子中生物碱类成分的快速辨识

目的采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS)对陕产附子中的生物碱类成分进行分析和鉴定。方法采用Waters Acquity UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液进行梯度洗脱。使用电喷雾离子源(ESI),正离子模式扫描,扫描范围m/z 100~1500。结果通过二级高分辨质谱分析结合对照品及相关文献,共鉴定出228个生物碱类成分,包括C_(18)类21种、C_(19)类145种[双酯型生物碱(DDAs)42种、单酯型生物碱(MDAs)47种、醇胺型生物碱(ADAs)42种、脂类(Lipo-As)14种]、C_(20)类27种以及其他35种,其中28个化合物为首次从附子或该植物中鉴定出。结论对附子生物碱类成分进行了较为全面系统的解析,为后续药效物质基础研究及应用开发奠定基础。

基于UHPLC-QE-MS方法结合网络药理学探讨炆何首乌抗衰老的作用机制

目的探讨炆何首乌抗衰老的作用机制。方法通过超高效液相色谱-质谱联用(UHPLC-QE-MS)技术,鉴定生、炆何首乌活性成分;利用相关数据库筛选出炆何首乌的主要活性成分及作用靶点,并借助注释、可视化和综合发现数据库(DAVID)开展京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析以及基因本体论(GO)功能分析。结果共得到炆何首乌有效成分82个,其中抗衰老相关疾病靶点共40个;得到丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、表皮生长因子受体(EGFR)、缺氧诱导因子1亚基α(HIF1A)3个核心靶点,主要富集在癌症的蛋白聚糖、癌症的形成途径等信号通路上。结论推测炆何首乌主要通过细胞凋亡过程的负调控、基因表达的负调控等途径,发挥抗衰老作用。

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS的PD-1抑制剂治疗的晚期肺腺癌患者血清代谢组学研究

目的:探索晚期肺腺癌患者化疗联合免疫治疗前后的差异代谢物及代谢通路,为评估预后寻找生物指标。方法:利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,对14例晚期肺腺癌患者在第1次使用化疗联合PD-1抑制剂治疗前3 d的血清以及治疗2周期后的血清进行代谢组学分析。通过对采集得到的图谱进行峰识别和匹配等相关处理,应用主成分和正交偏最小二乘法-判别分析对代谢组学的数据进行分析,筛选出重要变量性投影>1和P<0.05的差异代谢物,并筛选代谢通路。结果:治疗前后血清代谢物质有明显差异,治疗后患者血清代谢物中谷氨酰丝氨酸、脯氨酸、犬尿氨酸、脱氢抗坏血酸、N-硬脂酰鞘磷脂、5-羟基吲哚乙酸水平升高;色氨酸、亮氨酰脯氨酸、柠檬酸、硬脂酸、吲哚丙烯酸、丙酰肉碱、吲哚、3-甲基吲哚水平降低。色氨酸代谢通路是治疗前后的差异代谢通路。结论:犬尿氨酸/色氨酸比值可能作为评估PD-1抑制剂治疗的晚期肺腺癌患者预后的生物指标。

UHPLC-Q-Orbitrap HRMS法测定盐酸二甲双胍及其片剂中遗传毒性杂质的含量

目的:采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)建立一种快速测定盐酸二甲双胍及其片剂中遗传毒性杂质(杂质C)的定量分析方法。方法:使用Waters ACQUITY UPLC^■ BEH Shield RP18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,以10 mM甲酸铵溶液-乙腈(90∶10)为流动相,流速为0.2 mL·min^-1,正离子(ESI+)模式下平行反应监测(PRM)方式检测。结果:所建方法的专属性、重复性、稳定性均良好。杂质C的浓度在0.6256~3.9102 ng·mL^-1范围内线性关系良好(r=0.9997),原料的平均回收率为87.6%,片剂的平均回收率为86.4%。6批次样品中的杂质C含量为3.5~11.0μg·g^-1。结论:该方法简便快捷,准确可靠,适合盐酸二甲双胍及片剂中杂质C的快速检测,也为研究其他药物中类似杂质的检测提供参考。

基于UHPLC-LTQ-Orbitrap高分辨质谱的黄花菜中化学成分快速鉴定及裂解途径分析

采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱(UHPLC-LTQ-Orbitrap)高分辨质谱法分析黄花菜中的化学成分。在负离子模式下,采用Hypersil Gold AQ RP-C18色谱柱(100 mm×3.0 mm,1.9μm),以0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液为流动相梯度洗脱,流速0.3 mL/min;用LTQ-Orbitrap高分辨质谱解析多级质谱数据,并对成分进行定性分析。根据液相保留时间、紫外吸收、精确分子质量数据、多级质谱碎片离子和相关文献报道,从黄花菜中共鉴定出27个组分。其中,酚酸类化合物12个,黄酮醇类15个及其它类1个。本方法可高效、快速、灵敏、全面地分析黄花菜的化学成分,可实现酚酸及黄酮类不同化合物的鉴别,为探讨黄花菜的药效物质基础和类似化合物的结构鉴定提供理论依据。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS技术结合化学计量学方法的不同干燥处理杜仲叶成分分析

采用基于液质联用的非靶向代谢组学技术结合化学计量学数据自动解析软件AntDAS-LCHRMS分析了4种不同干燥处理(冻干、热泵烘干、电热烘干、晒干)杜仲叶样本中的化合物。杜仲叶样本数据由超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS)分别在正、负离子模式下进行采集,经AntDAS-LCHRMS软件解析,共鉴定出71种差异性化合物,经标准品验证确定40种化合物,包括环烯醚萜类、有机酸类、黄酮类、氨基酸类、核苷类、维生素类等9类物质。其中,正、负离子模式下均可识别并验证的化合物有车叶草苷、绿原酸、芦丁、异槲皮苷、车叶草苷酸、京尼平苷等25种化合物。层次聚类分析(HCA)及主成分分析(PCA)结果均显示,相同处理的杜仲叶样本各自聚成一类,不同处理的杜仲叶样本可明显区分。热图分析进一步揭示了不同干燥处理杜仲叶样本中差异性化合物的含量变化。晒干处理样本中苯丙氨酸及色氨酸等氨基酸类物质的水平较高;冻干及热泵烘干处理样本中有机酸类、环烯醚萜类、糖类等含量较高;电热烘干样本中核苷类、黄酮类物质的含量较高;黄酮类物质在冻干、热泵烘干及晒干样本中差异较小。研究结果为不同干燥处理杜仲叶的成分分析、品质评价及其开发应用提供了科学依据,也可为其他复杂药用植物体系的化学成分分析提供参考。

UHPLC-LTQ-Orbitrap HRMS法结合特征裂解途径分析鉴定薄荷水提物中4种类群化学成分

采用超高效液相色谱-线性离子阱-串联静电轨道阱高分辨质谱(UHPLC-LTQ-Orbitrap HRMS)法对薄荷水提物中4种类群化学成分进行分析鉴定。选取Acquity UPLC~BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm×1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,流速0.30mL/min,梯度洗脱分析。根据高分辨质谱提供的准分子离子峰和碎片离子信息,获取目标化合物的相对分子质量和结构信息,并结合保留时间、对照品分析、参考文献数据和ClogP值等相关信息,鉴定了85种化学成分,包括38种黄酮、16种酚酸、7种苯丙素和24种萜类。结果表明,采用UHPLC-LTQ-Orbitrap HRMS技术能够提高中药化学成分的分析效率,该方法可为合理开发薄荷的药用和食用价值奠定化学基础。

基于UHPLC-Q-Orbitrap技术的神曲发酵前后化学成分差异研究

目的比较神曲发酵前后化学成分的差异,揭示神曲发酵过程中成分变化规律。方法利用UHPLC-Q-Orbitrap技术,分别对神曲发酵前后的化学成分进行分析,以各化合物的相对峰面积为变量进行统计分析,比较发酵前后化学成分差异。结果从发酵前和发酵后的神曲样品中分别鉴定出54个和44个化学成分,包括有机酸、黄酮、氨基酸等。通过统计分析发酵前后各化学成分的差异,在发酵后神曲中脯氨酸、酪氨酸、亮氨酸等氨基酸成分显著增加,苦杏仁苷、野黑樱苷、绿原酸、隐绿原酸等11个成分未检测到。结论建立了一种快速全面表征神曲中化学成分的方法,并比较了神曲发酵前后化学成分的差异,有助于揭示神曲的发酵机制。

UHPLC-Q-Orbitrap HRMS鉴定墨旱莲中的化学成分

目的:应用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)对墨旱莲的化学成分进行快速分析鉴别。方法:以60%甲醇作为提取剂制备供试液,采用Accucore^(TM)C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.9μm)色谱柱分离,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 mL/min,柱温25℃。质谱使用加热电喷雾离子化源(H-ESI),正、负离子模式下采集数据,通过运用Mass Frontier 7.0软件,并结合Chem Spider数据库和相关文献信息进行数据分析。结果:基于准确分子量和碎片离子信息的特征质量数据,从墨旱莲中初步鉴定出53个化学成分,其中黄酮类成分11种,香豆素类成分3种,萜类成分8种,氨基酸类成分9种,生物碱类成分3种,脂肪酸类成分5种,酚酸类成分8种。结论:该实验应用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS对墨旱莲的化学成分进行较为全面的分析,并初步归纳各类化学成分的质谱裂解特点,为墨旱莲的质量控制和作用机制研究提供参考依据。

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术的补骨脂素在大鼠体内代谢产物的鉴定及代谢途径的分析

目的采用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术对补骨脂素在大鼠体内的代谢产物进行鉴定分析。方法将SD大鼠单次灌胃给予补骨脂素羧甲基纤维素钠混悬液后,收集其不同时间点的血浆以及24 h内的尿液、粪便。样品前处理后,采用Waters Acquity UPLCBEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);以体积分数0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱。在电喷雾离子源(ESI源)正、负离子模式下分析生物样本。结果基于精确分子质量、碎片离子信息及对照品的特征性裂解规律,共分析鉴定出15个代谢产物。结果表明水合、还原、氧化及谷氨酰胺结合是补骨脂素在大鼠体内的主要代谢途径。结论通过液质联用技术探究了补骨脂素在大鼠体内的代谢产物及其代谢途径,为其药效学及毒理学研究提供了重要的理论依据,同时也为药物代谢鉴定提供一种综合研究方法。

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS的不同年限陈皮入血成分分析

本研究拟应用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术对不同年限广陈皮进行入血成分鉴定研究。课题组采用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术,以及Compound Discover 3.0软件进行分析,比较广陈皮提取液、给药血浆、空白血浆的图谱差异,将分子量、二级碎片信息、参考文献以及对照品信息进行结合,找出口服广陈皮药液后吸收入血的原型成分和代谢产物。结果显示2、4、8年广陈皮鉴定出成分分别为34、24和15个,2年广陈皮黄酮类入血成分含量高于4、8年广陈皮。UHPLC-Q-Orbitrap HRMS能快速、精确、全面地分析广陈皮给药后的血中移行成分,为后期广陈皮的药效物质基础规律研究提供参考,为陈久者良科学内涵的研究提供新思路。

UHPLC-Q-Orbitrap-MS/MS法分析5种紫金牛属植物的黄酮类成分

目的分析5种紫金牛属药用植物(细罗伞、九管血、朱砂根、月月红和雪下红)的黄酮类成分。方法采用超高效液相色谱(UHPLC)技术分离5种紫金牛属植物的黄酮类成分,在高分辨质谱仪(Q-Orbitrap-MS/MS)正、负离子模式下采集碎片离子信息,应用CD2.1软件(Thermo Fisher)完成数据初步整理后进行数据库(mzCloud,mzVault,ChemSpider)检索比对。结果从5种紫金牛属植物中共鉴定出38种黄酮类成分,细罗伞、九管血、朱砂根、月月红和雪下红分别鉴定出37、34、29、36和30种黄酮类化合物,有26种黄酮类成分为5种紫金牛属植物的共有成分。结论该鉴定方法精确、可靠、高效,能快速鉴定出紫金牛属植物的黄酮类成分,为紫金牛属药用植物的药效物质基础和开发利用研究提供科学依据。

基于UHPLC-LTQ-Orbitrap MS^(n)的苦碟子醇提物不同洗脱部位化学成分分析

目的利用超高效液相色谱-线性离子阱-串联静电场轨道阱质谱(UHPLC-LTQ-Orbitrap MSn)对苦碟子药材醇提物不同洗脱部位的化学成分进行分析鉴定。方法采用Acquity UHPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈(A)-0.1%甲酸-水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,在负离子模式下,分别对苦碟子药材醇提物经大孔吸附树脂分离的30%、50%、70%和95%乙醇洗脱部位进行数据采集。根据高分辨质谱提供的准分子离子峰和多级质谱碎片,获取目标化合物的精确分子量和结构信息,并结合保留时间、ClogP值、对照品分析、参考文献等相关数据对化合物进行鉴别。结果分别在30%、50%、70%和95%乙醇洗脱部位中鉴定出36、56、33和15个化合物,包括核苷类、黄酮类、有机酸类、倍半萜内酯类、三萜类、苯丙素类等共80个化学成分,其中5个为共有成分,分别为木犀草素、芹菜素、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷和七叶内酯。结论该研究较为全面地表征了苦碟子药材醇提物的化学成分基础,并分析了其不同洗脱部位化学成分的差异,为进一步阐明苦碟子的药效物质基础提供了科学依据。

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术的白术内酯I在大鼠体内代谢产物的鉴定及代谢途径分析

目的采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)鉴定白术内酯I在大鼠体内的代谢产物,并探讨其可能的代谢途径。方法SD大鼠单次灌胃给予白术内酯I后,收集大鼠血浆、尿液、粪便样品。以体积分数0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱。在电喷雾电离源(ESI源)正、负离子模式下分析大鼠生物样本。根据质谱提供的准分子离子峰、碎片离子及准确相对分子质量,鉴定白术内酯I体内代谢产物。结果共鉴定出大鼠体内代谢产物30个,其中血浆样品中5个,尿液样品中17个,粪便样品中16个。氧化、水合、脱饱和、硫酸化、葡萄糖醛酸化、甘氨酸结合、半胱氨酸结合等是白术内酯I体内主要的代谢途径。结论首次阐明了白术内酯I在大鼠体内的代谢产物及代谢途径,为其进一步的药效学评价和开发利用提供参考,此外也为单体药物代谢产物鉴定提供了一种综合研究方法。

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS鉴定蔓荆子化学成分

目的:使用超高效液相色谱-四极杆/静电轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)建立一种快速鉴定蔓荆子化学成分的方法,阐明蔓荆子的化学组成。方法:采用ACQUITY^(Ⓒ)UPLC^(Ⓒ)HSS T3柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱(0~5 min,5%~45%B;5~20 min,45%~75%B;20~25 min,75%~100%B),流速为0.3 mL/min,质谱分析在Thermo Fisher Q-Orbitrap MS系统下正、负离子模式同时扫描,扫描范围m/z 100~1500。结果:运用Xcalibur 4.2分析软件,根据一级质谱信息和二级质谱信息结合文献参考数据及对照品确认,共鉴定出56个化学成分,包括萜类、黄酮类和酚酸类。结论:该方法有效可靠,可用于蔓荆子化学成分的鉴定,为蔓荆子的药效物质基础、资源开发利用及质量评价标准提供科学依据。

基于UHPLC-Q-Orbitrap MS/MS的扶正抗癌Ⅱ方药效物质基础及其干预结肠癌作用机制的网络药理学研究

目的探讨扶正抗癌Ⅱ方(FZKAⅡ方)干预结肠癌的药效物质基础及作用机制。方法采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道肼高分辨串联质谱(UHPLC-Q-Orbitrap MS/MS)法检测得到FZKAⅡ方水提液的质谱总离子流图,通过自建的数据库、对照品的裂解规律、特征碎片离子、文献报道和Compound Discover 3.2软件的分析对化合物进行鉴定。通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库和Swiss ADME平台筛选FZKAⅡ方的化学成分,Swiss TargetPrediction,PharmMapper数据库收集成分靶点,DisGeNET,GeneCards,OMIM数据库收集疾病靶点;利用String 11.5数据库筛选FZKAⅡ方干预结肠癌的关键靶点;利用Omicshare平台进行GO富集分析和KEGG通路富集分析,预测其潜在的作用机制。采用AutoDock Vina v4.2.6软件对核心成分与关键靶点进行分子对接,并利用PyMOL 2.4.1软件对分子对接结果进行可视化。结果鉴定出FZKAⅡ方化学成分128个,其干预结肠癌的主要活性成分有槲皮素、芹菜素、木犀草素、山柰酚、染料木素,核心靶点有SRC、糖原合成酶激酶3B(GSK3B)、细胞色素P4501B1(CYP1B1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、蛋白酪氨酸激酶2(PTK2),其作用机制可能与癌症通路,癌症中的MicroRNAs、蛋白聚糖,人类巨细胞病毒感染等信号通路有关。分子对接结果显示,核心成分和关键靶点的结合活性均小于-7 kcal/mol。结论FZKAⅡ方通过多成分、多途径、多靶点治疗结肠癌,该方法为指导临床用药提供了理论依据。

基于UHPLC-Q-Orbitrap MS技术的龙眼叶乙酸乙酯部位体内代谢研究

目的 采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap MS)技术研究龙眼叶乙酸乙酯在大鼠体内的代谢产物。方法 大鼠灌胃给予龙眼叶乙酸乙酯部位后,收集其尿液、血浆以及粪便样品。样品前处理后,采用Waters HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.8μm);流动相为0.1%-甲酸水溶液(A)和含0.1%甲酸的100%甲醇(B),梯度洗脱。在正、负离子模式下采集样品数据分析。结果 从大鼠尿液、血清及粪便样品中共鉴定出包括原型成分在内的44个代谢产物,其中分别从尿液、血清及粪便样品中检测到10、20、26个。主要代谢途径有硫酸化、氧化、葡萄糖醛酸化等。结论 通过液质联用技术分析了龙眼叶乙酸乙酯部位在大鼠体内的代谢产物,为龙眼叶药效物质基础的阐明提供了一定的参考依据。