紫金锭提取物的UHPLC/QTOF-MS分析

目的应用UHPLC/QTOF-MS对紫金锭提取物中的化学成分进行鉴定。方法色谱分离采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(100mm×2.1mm,3.5μm),0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱。质谱分析采用电喷雾离子源,负离子模式检测。结果通过二级质谱裂解分析以及文献信息比对,从紫金锭中鉴定出了没食子酸、间二没食子酸、没食子酸甲酯、七叶内酯、柚皮苷、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖、1,4-二4-(葡萄糖氧)苄基-2-异丁基苹果酸酯、淫羊藿糖甙、Sarcogenin,大豆苷元、乌索酸等11个化合物。结论本法为紫金锭的化学成分鉴定提供快速和准确方法。

腊梅花中黄酮类化合物的UHPLC/QTOF-MS分析

目的采用液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术UHPLC/QTOF-MS对腊梅花乙醇提取物中的黄酮类化合物进行分析鉴定。方法色谱分离采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱。质谱分析采用电喷雾离子源,正离子模式检测。结果通过二级质谱裂解分析以及参考文献,从腊梅花中鉴定出了绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素-3'-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-半乳糖苷、紫云英苷、槲皮苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素等1个多酚类和9个黄酮类化合物。结论本法为腊梅花黄酮类化合物的分析鉴定提供快速和准确方法。

基于UHPLC-QTOF-MS的兰州百合植物化学成分鉴定

为探究地理标志产品兰州百合(Lilium davidii var.unicolor)的植物化学成分,以甘肃省五个主要产区(兰州市榆中县、兰州市七里河区、定西市临洮县、定西市渭源县、临夏市永靖县)的兰州百合鳞茎为研究对象,基于超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱法的非靶向代谢组学技术鉴定其植物化学成分。结果表明,在兰州百合鳞茎中初步鉴定出62种植物化学成分,包含谷胱甘肽等22种氨基酸、多肽及其衍生物,溶血磷脂酰胆碱等9种油脂和磷脂类,鼠李糖等7种糖类,阿魏酸、咖啡酸等7种酚酸类,山奈酚等4种黄酮类,核黄素、维生素C等4种天然维生素,阿魏酰腐胺等3种酚胺类,大丁苷等2种香豆素类,葫芦巴碱等2种生物碱,萜类组分松香酸和三萜皂苷类组分刺五加苷E。本研究丰富了兰州百合植物化学成分的现有数据,为兰州百合的研究与利用提供了科学依据。

基于Random Forest和UHPLC-QTOF-MS^(E)对不同来源龟甲基原的鉴定

目的:基于超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS^(E))分析并经数字量化处理,结合随机森林(Random Forest,RF)算法构建数据辨识模型,以实现中华草龟、巴西龟、台湾龟、鳄鱼龟、鳖甲基原的数字化鉴定。方法:经样品预处理后,对不同来源、不同批次的龟甲进行UPLC-QTOF-MS^(E)分析,并以混合样品为基准进行峰位校正、提取并经量化处理,获取反映多肽离子信息的精确质量数-保留时间数据对(Exact Mass Retention Time,EMRT)。然后基于信息增益率的特征筛选获取重要多肽离子信息,结合随机森林(RF)算法进行数据建模,同时基于内部交叉验证中的准确率(Acc)、精确率(P)、曲线下面积(AUC)等参数进行模型评价。最后基于最优模型进行龟甲基原的鉴定验证分析。结果:基于信息增益率的特征筛选,得到71个特征多肽信息,建立的RF模型具有优秀的辨识效果,准确率、精确率以及AUC均大于0.950且外部鉴定验证的正确率为100.0%。结论:基于UHPLC-QTOF-MS^(E)分析,并结合RF算法能够高效准确地实现不同来源龟甲基原的数字化鉴定,可为龟甲的质量控制及基原考证提供参考和帮助。

基于UHPLC-QTOF-MS的薜荔水提物的化学成分分析及Beas-2b细胞抗衰老活性

采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间-质谱(UHPLC-QTOF-MS)技术对薜荔果、茎、叶中化学成分进行分析,并对其缓解由香烟烟雾提取物诱导的肺部细胞衰老能力进行研究。以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.2μL·min^(-1);采用电喷雾电离原(ESI),正负离子扫描模式进行数据采集,通过Msdial进行数据库比对和参考已报道文献对薜荔果、茎和叶3种部位的水提物进行化学成分表征。建立香烟烟雾提取物诱导人支气管上皮细胞Beas-2b衰老模型,测定薜荔果、茎、叶3种水提物对细胞活性及细胞衰老的影响。结果成功鉴定出薜荔果、茎、叶水提物中的33种化学成分,发现薜荔3种水提物在适宜质量浓度范围内对Beas-2b细胞无明显毒性,50μg·mL^(-1)的薜荔茎和叶水提物对细胞衰老有一定缓解作用。结果表明UHPLC-QTOF-MS法灵敏度高,分析快速,结果可靠,能够全面快速分析和鉴定薜荔不同部位水提物中的化学成分,薜荔具有潜在的抗细胞衰老能力。

温阳化浊退黄方治疗慢加急性肝衰竭的作用机制:基于UHPLC-QTOF-MS和网络药理学方法

目的运用UHPLC-QTOF-MS和网络药理学探讨温阳化浊退黄方治疗慢加急性肝衰竭(Acute-on-chronic liver failure,ACLF)的作用机制,并通过实验验证筛选出的靶点。方法利用UHPLCQTOF-MS分析温阳化浊退黄方的活性成分,利用网络药理学方法筛选温阳化浊退黄方活性成分对应的靶点和ACLF靶点,构建蛋白互作网络(PPI)筛选核心靶点,对靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,利用Cytoscape构建活性成分-靶点-通路网络图,通过动物模型实验验证温阳化浊退黄方治疗ACLF的作用机制。结果UHPLC-QTOF-MS共鉴定出123个化合物,经TCMSP筛选得到12种活性成分,TCMSP和Swiss target Prediction数据库取交集共获得181个温阳化浊退黄方预测靶点;得到ACLF靶点2019个;温阳化浊退黄方和ACLF共有靶点99个。KEGG通路分析筛选了147条相关信号通路,显示PI3K/Akt信号通路、VEGF信号通路、乙型肝炎、细胞凋亡、MAPK信号通路等可能在温阳化浊退黄方治疗ACLF的过程中起关键作用。动物实验结果显示,温阳化浊退黄方能够缓解ACLF大鼠肝损伤,下调AKT1、MTOR和RAF1关键靶蛋白在ACLF大鼠肝脏中的表达,验证了网络药理学的预测结果。结论温阳化浊退黄方通过多成分、多靶点、多通路协同作用治疗ACLF,为后续研究提供参考依据。

UHPLC-QTOF-MSMS比较两种不同基原火炭母的化学成分

为评价不同基原火炭母药材的质量差异,本文采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用(UHPLC-QTOF-MSMS)技术研究火炭母原变种和硬毛火炭母(变种)的化学成分。结果表明:酚酸类、黄酮类成分是火炭母原变种及硬毛火炭母的主要成分;通过与标准品对照,没食子酸、绿原酸、鞣花酸和槲皮苷等4个成分被准确鉴定;其余21个峰通过一级质谱精确质荷比和二级质谱碎片、结合数据库匹配及参考文献等进行结构鉴定。这一分析方法快捷方便,可快速区别火炭母原变种和硬毛火炭母中的化学成分,为全面研究火炭母药材的质量标准和品质评价等提供科学依据。

UHPLC-QTOF-MS高效检测CL-20合成过程的杂质

为了快速准确检测和分析六硝基六氮杂异伍兹烷(CL-20)合成过程中产生的中间体和杂质,控制CL-20纯度或品质,保证其感度及爆轰性能,采用核磁共振(NMR)和超高高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS)技术快速、高效分析检测了CL-20典型合成工艺过程中组分及杂质。结果表明,六苄基六氮杂异伍兹烷(HBIW)中的杂质为1,3-二苄基咪唑,四乙酰基二苄基六氮杂异伍兹烷(TADB)中的杂质为低酰基化的三乙酰基三苄基六氮杂异伍兹烷(TATB),四乙酰基六氮杂异伍兹烷(TAIW)中的杂质为未完全反应的TADB,CL-20中的杂质为未完全硝化的一乙酰基五硝基六氮杂异伍兹烷(MPIW)和二乙酰基四硝基六氮杂异伍兹烷(DATN)。

基于UHPLC-QTOF-MS/MS技术分析玳玳花的化痰活性成分

目的:利用超高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS/MS)技术快速分析玳玳花的化痰的活性成分。方法:以酚红排出量筛选玳玳花不同提取部位祛痰的作用,岛津ARC-C18色谱柱(3.0 mm×100 mm,1.7μm),联合质谱分析有效部分的化学成分。结果:玳玳花乙醇提取物具有显著的化痰作用,提取物中初步鉴定了32个化合物,主要为黄酮类和有机酸类。结论:建立了一种基于化痰活性结合UHPLC-QTOF-MS/MS分析鉴定玳玳花的化学成分的快速方法。

基于UHPLC-QTOF-MS/MS的岭南山竹子果皮化学成分研究

目的:通过超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS/MS)对岭南山竹子(Garcinia oblongifolia)果皮的化学成分进行研究。方法:将新鲜的岭南山竹子果皮用70%乙醇回流提取,减压回收溶剂,冷冻干燥得到提取物后,重新溶解到50%甲醇水溶液,经0.22μm微孔滤器过滤进入UHPLC-QTOF-MS/MS分析。采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱分离,以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,并在全扫描模式进行飞行时间质谱鉴定。结果:通过对高分辨一级和二级质谱数据进行解析,结合参考文献数据并与数据库进行比对,共鉴定了13个化合物,主要为苯甲酮类化合物。结论:该研究结果为科学研发岭南山竹子提供了一定的科学依据。

基于UHPLC-QTOF-MS辨识经典藏药玛诺系汤三味颗粒药效物质基础研究

目的:基于UHPLC-QTOF-MS法辨识藏药玛诺系汤三味颗粒中的药效物质基础。方法:玛诺系汤三味颗粒的甲醇:水(80∶20)提取液,用ZORBAX RRHD Eclipse Plus C_(18)色谱柱(3.0 mm×100 mm);流动相0.1%甲酸水-甲醇,梯度洗脱;体积流量0.4 mL/min;进样量2μL;柱温40℃;质谱采用双喷雾(ESI)离子源,在正、负离子模式下采集数据,通过保留时间、精确分子离子峰和二级质谱裂解碎片,按分子量、同位素分布和保留时间辨识化合物。结果:共鉴定128个化合物,能够准确识别的成分包括木香烃内酯、木质素、宽筋藤苷B、鞣花酸等40多种。结论:该方法高效、准确、稳定、重复性好,可以快速辨识藏药复方制剂的药效成分,为藏药复方质控指标确定提供参考。

UHPLC-QTOF-MS联合网络药理学及分子对接探讨青阳参总苷治疗社会挫败的物质基础及作用机制

目的运用UHPLC-QTOF-MS和网络药理学-分子对接技术,探讨青阳参总苷治疗社会挫败的物质基础和潜在的作用机制。方法首先,采用UHPLC-QTOF-MS鉴定青阳参总苷化学成分。其次,运用Pubchem下载青阳参总苷化学成分2D结构后,利用Swiss Target Prediction数据库预测其靶点;从TTD、GeneCards、CTD数据库获取社会挫败相关治疗靶点;通过Venny平台获取两者的交集靶点;采用Cytoscape构建“药物-活性成分-靶点-疾病”网络;运用String数据库构建蛋白互作(PPI)网络后,结合Cytoscape分析得交集靶点排名;使用DAVID数据库对交集靶点进行基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。利用AutoDock vina软件进行分子对接验证。最后,构建社会挫败小鼠模型,采用ELISA法检测小鼠血清5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)含量,HE染色观察小鼠海马组织神经细胞病理变化。结果从青阳参总苷共鉴定152个化学成分。预测及筛选得到丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、单胺氧化酶A(MAOA)、多巴胺受体D3(DRD3)等26个青阳参总苷治疗社会挫败潜在作用靶点,对应85个青阳参总苷活性成分;富集分析得到45个GO注释条目(P<0.01)、11条KEGG信号通路。分子对接发现青阳参苷元、白桦脂酸、绿原酸等20个活性成分与AKT1、DRD4、DRD2、DRD3等10个核心靶蛋白均可自发结合。动物实验表明,与正常对照组相比,模型对照组小鼠血清中5-HT、DA含量均明显降低(P<0.05);小鼠海马组织神经细胞排列疏松,有明显的细胞丢失。与模型对照组相比,青阳参总苷各剂量组小鼠血清中5-HT、DA含量均显著升高(P<0.05,P<0.01);青阳参总苷中、高剂量组小鼠海马组织神经细胞间隙减小,且排列较为整齐。结论青阳参总苷对社会挫败具有治疗作用。主要药效物质为青阳参苷元、白桦脂酸、绿原酸等,可通过多靶点、多通路发挥抗社会挫败作用。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS技术结合化学计量学方法的不同干燥处理杜仲叶成分分析

采用基于液质联用的非靶向代谢组学技术结合化学计量学数据自动解析软件AntDAS-LCHRMS分析了4种不同干燥处理(冻干、热泵烘干、电热烘干、晒干)杜仲叶样本中的化合物。杜仲叶样本数据由超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS)分别在正、负离子模式下进行采集,经AntDAS-LCHRMS软件解析,共鉴定出71种差异性化合物,经标准品验证确定40种化合物,包括环烯醚萜类、有机酸类、黄酮类、氨基酸类、核苷类、维生素类等9类物质。其中,正、负离子模式下均可识别并验证的化合物有车叶草苷、绿原酸、芦丁、异槲皮苷、车叶草苷酸、京尼平苷等25种化合物。层次聚类分析(HCA)及主成分分析(PCA)结果均显示,相同处理的杜仲叶样本各自聚成一类,不同处理的杜仲叶样本可明显区分。热图分析进一步揭示了不同干燥处理杜仲叶样本中差异性化合物的含量变化。晒干处理样本中苯丙氨酸及色氨酸等氨基酸类物质的水平较高;冻干及热泵烘干处理样本中有机酸类、环烯醚萜类、糖类等含量较高;电热烘干样本中核苷类、黄酮类物质的含量较高;黄酮类物质在冻干、热泵烘干及晒干样本中差异较小。研究结果为不同干燥处理杜仲叶的成分分析、品质评价及其开发应用提供了科学依据,也可为其他复杂药用植物体系的化学成分分析提供参考。

基于阀切换UHPLC-IC联用技术的实验教学探索

具有阀切换的超高效液相色谱-离子色谱联用(UHPLC-IC)技术适用于同时分析含有机物和无机阴离子的样品,该联用技术简化了前处理的过程,消除了复杂基体,对无机阴离子进行富集,实现有机物和无机阴离子的同时分析,提高了色谱分析效率。将阀切换UHPLC-IC联用技术引入到本科生仪器分析实验课堂中,加深了学生对新型分析技术独特优势的理解,提高了本科生解决复杂实际问题的能力,拓宽和提升了仪器分析实验的教学内涵,有利于创新性和综合性人才的培养。

UHPLC-MS/MS法测定耕地周围地表水中5种除草剂含量

实验研究建立了超高压液相色谱-三重四级杆串联质谱法测定耕地周围地表水中2,4-二氯苯氧乙酸、灭草松、草铵膦、α-萘乙酸、马来酰肼除草剂含量的分析方法。随机采集耕地周围地表水样品,预处理后,取上述水样500 mL,调节酸度为中性,取HLB固相萃取柱,活化完毕后,设定程序,将上述水样以12 mL·min^(-1)的流量过柱,最后用16 mL甲醇洗脱,收集洗脱液;洗脱液于氮吹至近干,加甲醇1 mL定容,涡旋混匀,质谱分析采用多反应监测模式,定性、定量检测。2,4-二氯苯氧乙酸、灭草松、草铵膦、α-萘乙酸、马来酰肼质量浓度在0.004~4.0μg·mL^(-1)范围内呈良好的线性关系,检测限分别为0.21μg·L^(-1)、0.23μg·L^(-1)、0.14μg·L^(-1)、0.25μg·L^(-1)、0.15μg·L^(-1);三水平回收率范围在85.4%~96.6%;2,4-二氯苯氧乙酸、灭草松、草铵膦、α-萘乙酸、马来酰肼重复性RSD分别为3.4%,4.0%,3.2%,2.9%,3.6%,方法重复性良好。实验结果表明,此方法具有快速、准确等特点,方法可以用于耕地周围地表水中2,4-二氯苯氧乙酸、灭草松、草铵膦、α-萘乙酸、马来酰肼等除草剂的监测。

基于UHPLC-Orbitrap HRMS的盐酸二甲双胍及其片剂中N-亚硝基二甲胺的测定

建立了测定盐酸二甲双胍及其片剂中N-亚硝基二甲胺(NDMA)的超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Orbitrap HRMS)。采用Waters XSelect CSH C18色谱柱(150 mm×3.0 mm,2.5μm),以0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸甲醇溶液为流动相,梯度洗脱;大气压化学电离源(APCI),正离子模式,产物离子扫描。结果显示NDMA在1~100 ng/mL范围内线性关系良好,检测限和定量限分别为0.3 ng/mL和0.9 ng/mL,原料药和片剂的平均加标回收率分别为101.4%和98.5%。本方法专属性好、灵敏度和准确度高,适用于盐酸二甲双胍及其片剂中痕量遗传毒性杂质NDMA的检查与控制。

基于UHPLC-MS技术的NSCLC血浆生物学标志物的筛选及鉴定研究

目的研究UHPLC-MS技术的NSCLC血浆生物学标志物的筛选及鉴定。方法本研究纳入符合非小细胞肺癌临床诊断标准的60例NSCLC患者,随机分为两组,接受靶向治疗(TACE)的非小细胞肺癌患者为鉴别诊断组,未接受靶向治疗的NSCLC患者为正常对照组。结果在60例NSCLC患者中,通过LC-MS/MS技术共检测到552个生物标志物。在其中17个生物标志物中,有8个出现在已知的EGFR突变患者中,另7个出现在ALK融合患者中,6个出现在HER2突变患者中。此外,NSCLC患者血浆中含有丰富的非编码RNA(miRNA),包括58个miRNA和23个mRNA。结论本研究中,采用LC-MS/MS技术对NSCLC患者血浆进行分析,可快速、高效地获得血浆样品中的生物学标志物。这些标志物可以作为NSCLC诊断的潜在生物学标志物,并且可以用于预测肿瘤进展和不良预后。

UHPLC Q-Exactive Plus Orbitrap HRMS法鉴定隔山消提取物在功能性消化不良大鼠体内代谢产物

目的建立UHPLC Q-Exactive Plus Orbitrap HRMS法鉴定隔山消提取物在功能性消化不良大鼠体内代谢产物。方法建立功能性消化不良大鼠模型。分析采用Hypersi 1 GOLD C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9μm);流动相水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;正负离子扫描。结果共鉴定出4种原型成分(白首乌二苯酮、去酰基萝藦苷元、青阳参苷元、丁香酸)及其110种代谢产物,其中粪便、尿液共有代谢产物12种,尿液特有代谢产物56种,粪便特有代谢产物42种。原型成分代谢途径包括Ⅰ相代谢(氧化、还原等)、Ⅱ相代谢(硫酸化、葡萄糖醛酸化等)及Ⅰ相、Ⅱ相复合反应。结论该方法高效全面,可为进一步寻找隔山消潜在活性代谢产物奠定基础。

基于UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术的百蕊颗粒入血成分研究

采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF-MS/MS)技术辨析百蕊颗粒灌胃大鼠后的原型成分和代谢产物,并研究其主要体内代谢过程。大鼠口服给药百蕊颗粒后,采用UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术采集血清样本数据,正、负离子模式下同时扫描,结合前期体外化学成分质谱数据以及提取各化学成分的精确质荷比等信息对百蕊颗粒在大鼠体内的原型成分和代谢产物进行辨识研究。结果在大鼠体内中共检测到20个原型成分和10个代谢产物,其中原型成分包括生物碱类化合物6个,黄酮类化合物4个,有机酸类3个等其他化合物,主要代谢途径包括还原反应和水解反应、硫酸化反应和葡萄糖醛酸结合反应。该研究为揭示百蕊颗粒药效物质基础奠定了基础,也为其中成药的开发与利用提供应用价值。

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS雀嘴茶醇提液的成分及活性研究

基于超高效液相色谱串联四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱快速分析雀嘴茶醇提液的成分,对其体外抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性进行研究。结果表明:从雀嘴茶醇提液中鉴定出1 321个代谢物,其中有1 085个代谢物包括11个超类匹配到人类代谢数据库中,含量较高的活性代谢物,包括新甘草苷、扁蓄苷、醋硝香豆素、槲皮素-3-O-葡萄糖苷桂皮鞣质B1等苯丙素类和芳香聚酮类、咖啡因等有机杂环化合物类、阿糖腺苷等核苷酸及其衍生物以及1-咖啡酰-β-D-葡萄糖、3-O-阿魏酰奎尼酸、绿原酸、2-O-咖啡酰熊果苷等咖啡酰类。雀嘴茶醇提液的DPPH·清除率可达93.56%,ABTS^(+)·清除率可达99.04%,OH·清除率可达94.82%,总还原能力随着醇提液中总多酚浓度的增加而升高且效果极为接近阳性对照抗坏血酸;对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的抑制率分别可达81.50%和58.58%。