基于UHPLC-Q Exactive Orbitrap/MS结合多元统计方法分析不同基原淫羊藿化学成分的差异

目的:建立超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用(UHPLC-Q Exactive Orbitrap/MS)结合多元统计分析技术对5种不同基原淫羊藿化学成分差异分析的方法。方法:对5种基原30批淫羊藿样品的UHPLC-Q Exactive Orbitrap/MS全扫描数据进行多元统计分析。利用SIMCA软件进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)。结果:5种基原淫羊藿的化学成分具有差异性,根据相关参考文献及谱图信息,共鉴定出27种化学成分。所建立的OPLS-DA模型具有良好的数据描述能力和预测能力。柔毛淫羊藿化学成分具有显著性差异,而朝鲜淫羊藿与箭叶淫羊藿,淫羊藿与巫山淫羊藿之间的化学成分及含量具有相似性。经过筛选与分析,确定8种差异化学成分。结论:建立的方法可分析出5种基原淫羊藿化学成分的差异性,操作简便,方法准确,可为不同基原淫羊藿的质量控制及开发应用提供理论依据。

参仙升脉口服液化学成分的UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS快速分析

目的探究参仙升脉口服液的化学物质基础。方法利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)对参仙升脉口服液的化学成分进行整体、系统辨识。采用Thermo Accucore aQ C_(18)色谱柱(150 mm×2.1 mm,2.6μm),流动相0.1%甲酸水溶液(A)-甲醇(B)梯度洗脱,洗脱程序为0-13 min,5%-60%B;13-27 min,60%-95%B;27-30 min,95%B,流速0.3 mL·min^(-1),柱温30°C;质谱分析离子化方式为加热电喷雾离子化(H-ESI),扫描模式为正、负离子切换,扫描范围m/z 120-1800,碰撞能量30 eV、50 eV、70 eV。结果共鉴定出160个化学成分,包括29个黄酮类成分,24个有机酸类成分,21个生物碱类成分,19个萜类成分,15个苯丙素类成分,12个皂苷类成分和40个其他类成分;其中6个化学成分(芦丁、补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂酚)经对照品比对确认。结论该研究借助UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS技术实现了参仙升脉口服液化学成分准确、快速、系统的分析和鉴定,为其化学物质基础的阐明和质量控制提供了重要依据。

UHPLC-Q Exactive高分辨质谱联用法分析淫羊藿中的化学成分

目的采用UHPLC-Q Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术鉴定分析淫羊藿药材成分。方法采用Thermo Hypersil GLOD C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱,体积分数0.1%甲酸水溶液-乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为40℃,电喷雾正、负离子模式扫描。结果共分析和鉴定出79个化合物,包括黄酮类、生物碱类、有机酸类和木脂素类化合物,其中16个化合物经与对照品比对鉴定。鉴定的黄酮类包括46个异戊烯基黄酮醇类化合物,异戊烯基黄酮醇类负离子模式二级特征碎片为m/z 367、351、513、353和323。初步鉴定化合物41、54、76、65和69为新的异戊烯基黄酮。结论淫羊藿中异戊烯基黄酮醇类多具有淫羊藿素或8-异戊烯基山奈酚苷元母核结构,该结果为淫羊藿成分的系统分析提供了数据支持。

UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析头痛宁胶囊的体内分布特征

目的解析头痛宁胶囊在大鼠体内的分布特征。方法采用UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析大鼠灌胃头痛宁胶囊后不同时间点血浆、不同组织及排泄物中的原形成分分布特征。结果从给药后15、30、60、90、120 min的大鼠血浆样品中分别检出39、44、42、41、38种头痛宁胶囊的原形成分,由此可见,给药30 min后的入血原形成分最多;从心、肝、脾、肺、肾、脑、粪便、尿液中分别检测到7、9、20、4、11、8、21、21种原形成分。这些成分类型主要为黄酮、有机酸、酚及二苯乙烯苷类化合物,包括升麻素、升麻素苷、白藜芦醇、溶血磷脂酰胆碱、天麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、落新妇苷和2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷等成分。结论本法为后续头痛宁胶囊的药效物质基础研究及药效标志物的筛选提供了重要依据。

基于UHPLC-Q ExactiveOrbitrap-MS法的山楂不同部位化学成分分析

利用UHPLC-Q ExactiveOrbitrap-MS技术检测山楂叶、山楂肉、山楂核化学成分,考察山楂不同部位化学成分差异。色谱使用Waters ACQUITYUPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水和甲醇为流动相进行梯度洗脱;质谱采用ESI离子化方式,正负离子切换模式采集。结果在山楂叶、山楂肉、山楂核中共鉴定了19种化学成分,其中山楂叶中黄酮类成分较多,山楂肉中有机酸类成分较多,而山楂核中指认的成分较少,一定程度上阐明了其不同入药部位发挥不同活性的药效物质基础。

基于UHPLC-Q Exactive HRMS的轮状病毒肠炎湿热证患儿粪便代谢组学特征研究

目的从代谢组学角度探讨轮状病毒肠炎湿热证患儿的粪便代谢组学特征。方法收集20例轮状病毒肠炎湿热证患儿(RV湿热证组)和20例健康儿童(健康组)的粪便样本,采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive HRMS)技术采集粪便代谢指纹谱,结合正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)的模式识别方法进行数据分析,寻找差异性内源性代谢物。结果OPLS-DA模式识别可有效区分RV湿热证组与健康组,且模型可靠性高。筛选并鉴定出11种差异性代谢物,涉及咖啡因代谢、烟酸盐和烟酰胺代谢、卟啉和叶绿素代谢、不饱和脂肪酸代谢、花生四烯酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、嘧啶代谢、色氨酸代谢,以及甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢等9条代谢通路。结论轮状病毒肠炎湿热证患儿与健康儿童间存在差异性代谢产物,这些代谢化合物的异常表达可能是轮状病毒肠炎湿热证的重要发病机制,也是潜在的干预靶点。

基于UHPLC-Q Exactive轨道肼高分辨质谱分析八珍方化学成分

目的通过UHPLC-Q Exactive轨道肼高分辨质谱技术分析八珍方中化学成分。方法采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液(正离子模式)/5 mmol/L乙酸铵水溶液(负离子模式)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.5 mL/min,质谱使用ESI离子源,正、负离子模式扫描采集数据。结果通过正、负离子质谱信息及元素组成分析,并结合相关文献和二级碎片裂解规律,鉴定出八珍方中91种化学成分,包括炔苷类、酚酸类、黄酮类、三萜类、生物碱类、内酯类、环肽类等化学成分,其中33个成分经与对照品比对而准确鉴定。结论利用UHPLC-Q Exactive轨道肼高分辨质谱技术,分析了八珍方中化学成分,为八珍方的质量评价和临床应用提供了可靠的科学依据。

高粱泡叶化学成分的UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析

目的采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)对高粱泡叶的化学成分进行快速识别和鉴定。方法选择高粱泡叶的80%乙醇提取液作为供试品溶液,采用ACE Ultracore2.5 SuperC18(100 mm×2.1 mm,0.5μm)色谱柱(2.1 mm×150 mm,2.6μm),流动相乙腈(C)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱,流速0.3 mL/min,柱温40℃;质谱分析采用加热电喷雾离子源(HESI),正、负离子模式扫描,扫描范围100~1500 m/z。结果共鉴定出了61个成分,包括游离氨基酸、酚酸类、黄酮类、有机酸类、糖苷类及其他类。结论该方法可系统、准确、快速地对高粱泡叶中化学成分进行定性分析,可为高粱泡叶药效物质研究及质量评价提供重要依据。

基于UHPLC-Q Exactive Orbitrap HRMS的如意珍宝丸体内外成分分析

目的:基于超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q Exactive Orbitrap HRMS)对如意珍宝丸所含化学成分及其入血、入脑成分进行定性研究。方法:采用UHPLC-Q Exactive Orbitrap HRMS鉴定如意珍宝丸的化学成分。12只雄性SD大鼠随机分为空白组与如意珍宝丸组,如意珍宝丸组按生药量1.8 g·kg^(-1)进行如意珍宝丸混悬液灌胃,空白组灌胃等体积纯水。灌胃1.5 h后取血浆与脑脊液,采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~15 min,97%~80%A;15~30 min,80%~60%A;30~40 min,60%~30%A;40~45 min,30%~5%A),电喷雾离子源(ESI),扫描范围m/z 100~1500,并结合文献和对照品的相应信息,分别完成在正、负离子模式下对样品进行入血与入脑成分的定性分析。结果:从如意珍宝丸80%甲醇溶液中鉴定出126种化合物,血浆中检测到14种原型成分,脑脊液中检测到7种原型成分,并分析了芹菜素、芹菜素-7-O葡萄糖醛酸苷、高良姜素、甘草苷、胡椒碱、甘草酸、丁香酚、没食子酸和胆酸的裂解规律。结论:该研究实现了如意珍宝丸中多类别体外化学成分、入血及入脑成分的快速表征与鉴定,为该品种药效物质基础与质量控制研究提供了参考。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS技术结合化学计量学方法的不同干燥处理杜仲叶成分分析

采用基于液质联用的非靶向代谢组学技术结合化学计量学数据自动解析软件AntDAS-LCHRMS分析了4种不同干燥处理(冻干、热泵烘干、电热烘干、晒干)杜仲叶样本中的化合物。杜仲叶样本数据由超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS)分别在正、负离子模式下进行采集,经AntDAS-LCHRMS软件解析,共鉴定出71种差异性化合物,经标准品验证确定40种化合物,包括环烯醚萜类、有机酸类、黄酮类、氨基酸类、核苷类、维生素类等9类物质。其中,正、负离子模式下均可识别并验证的化合物有车叶草苷、绿原酸、芦丁、异槲皮苷、车叶草苷酸、京尼平苷等25种化合物。层次聚类分析(HCA)及主成分分析(PCA)结果均显示,相同处理的杜仲叶样本各自聚成一类,不同处理的杜仲叶样本可明显区分。热图分析进一步揭示了不同干燥处理杜仲叶样本中差异性化合物的含量变化。晒干处理样本中苯丙氨酸及色氨酸等氨基酸类物质的水平较高;冻干及热泵烘干处理样本中有机酸类、环烯醚萜类、糖类等含量较高;电热烘干样本中核苷类、黄酮类物质的含量较高;黄酮类物质在冻干、热泵烘干及晒干样本中差异较小。研究结果为不同干燥处理杜仲叶的成分分析、品质评价及其开发应用提供了科学依据,也可为其他复杂药用植物体系的化学成分分析提供参考。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS的芪龙壮儿口服液指纹图谱研究

目的:建立芪龙壮儿口服液UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS正、负离子两种检测模式下的指纹图谱,为该制剂的质量控制提供参考和依据。方法:采用Thermo Accucore aQ RP18(2.1 mm×150 mm,2.6μm)色谱柱进行色谱分离,加热电喷雾离子源正、负离子同时检测。根据一级准分子离子精确质荷比、二级质谱碎片离子信息、文献报道和对照品比对鉴定共有峰成分。结果:构建了芪龙壮儿口服液正、负离子模式下的指纹图谱共有模式并分别确认了24(正离子模式)和17(负离子模式)个共有指纹峰。10批芪龙壮儿口服液指纹图谱与对照指纹图谱的相似度分别大于0.986(正离子模式)和0.968(负离子模式)。在正离子模式下鉴定了15个共有峰,其中9个共有峰采用对照品确认;负离子模式下鉴定了12个共有峰,其中9个共有峰采用对照品确认。结论:所建立的芪龙壮儿口服液正、负离子两种模式下的指纹图谱,结合共有峰的高分辨质谱定性分析,从正、负两个维度较为全面地表征了该制剂的化学成分指纹特征,为芪龙壮儿口服液的质量评价提供了依据和方法。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术的静宁方入脑、入肠及粪便成分分析

目的基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术对静宁方给药后的大鼠入脑、入肠及粪便中的成分进行分析和鉴定。方法采用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS,以0.1%甲酸-乙腈(A)和0.1%甲酸-水(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 mL·min^(-1),进样量5μL,加热电喷雾离子化源(HESI),正、负离子扫描。结合对照品比对、文献报道、数据库比对等方式对成分进行分析鉴定。结果共鉴定出42种成分,其中脑、回肠、结肠、粪便中分别鉴定出9、33、20、27种成分。结论本实验初步阐明静宁方入脑、入肠及粪便成分,为阐明其药效物质基础及作用机制提供了依据。

秦岭岩白菜根茎化学成分的UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析

目的:采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)对秦岭岩白菜药材的化学成分进行快速识别和鉴定。方法:选择秦岭岩白菜的75%甲醇提取液作为供试品溶液,采用Thermo Accucore aQ RP18色谱柱(2.1 mm×150 mm,2.6μm),流动相甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~40 min,5%~95%A;40~45 min,95%A),流速0.3 mL·min-1,柱温30℃;质谱分析采用加热电喷雾离子源(HESI),正、负离子模式扫描,扫描范围m/z 80~1 200。结果:共鉴定出了66个成分,包括游离氨基酸2个、岩白菜素类7个、黄酮类15个、有机酸类15个、糖苷类25个及其他类2个。结论:该方法可系统、准确、快速地对秦岭岩白菜药材中化学成分进行定性分析,其中8个成分(琥珀酸、熊果苷、没食子酸、原儿茶酸、岩白菜素、儿茶素、绿原酸和咖啡酸)与对照品比对而准确鉴定,51个成分为首次在秦岭岩白菜中发现,28个成分为首次从岩白菜属植物中发现,可为秦岭岩白菜药效物质研究及质量评价提供重要依据。

秦岭岩白菜入血成分及其代谢产物的UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析

目的:研究秦岭岩白菜提取物在大鼠体内的入血原型成分及代谢产物。方法:采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)技术,通过比对秦岭岩白菜提取液、空白血清和含药血清的图谱差异,根据保留时间、相对分子质量,以及一级、二级离子碎片,解析秦岭岩白菜提取物经大鼠灌胃给药后血清中的原型成分和代谢产物,检测条件为流动相选择甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~40 min,5%~95%A;40~45 min,95%A),流速设定0.3 mL·min^(-1),进样量1μL,加热电喷雾离子源,检测范围m/z 80~1200,正、负离子扫描模式。结果:大鼠口服给药后,共在血清中检测到35个移行成分,其中6个为原型成分,29个为代谢产物。经鉴定6个原型成分分别为熊果苷、mallonanoside A、岩白菜素、ardimerin、水杨酸、鞣花酸,29个代谢产物主要是来自含有没食子酸、mallonanoside A、岩白菜素、儿茶素、鞣花酸等结构单元的化合物代谢物,其代谢途径主要为葡萄糖醛酸化、硫酸酯化、甲基化等,以Ⅱ相代谢为主。结论:入血成分及其代谢产物可能是秦岭岩白菜体内直接作用的药效成分,其中mallonanoside A、岩白菜素、鞣花酸在体内既可以原型成分入血,又可以经过Ⅱ相代谢发挥药效;而秦岭岩白菜药材中的其他大多数化学成分在体内可能主要是先通过水解等途径转化为没食子酸、岩白菜素、儿茶素等简单结构,再进一步发生Ⅱ相代谢。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS的复方一枝蒿颗粒化学成分快速鉴定

目的:采用超高效液相色谱-四极杆-静电轨道场离子阱质谱法对复方一枝蒿颗粒的化学成分进行分析。方法:采用Thermo Scientific Syncronis C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸-乙腈,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(–1),柱温为45℃,进样量为2μL。在正负离子模式下采集复方一枝蒿颗粒的质谱数据,根据高分辨质谱提供的精确相对分子质量和碎片离子信息,结合对照品比对和相关文献报道对复方一枝蒿颗粒的化学成分进行分析。结果:共分析鉴定出90个化合物,包括2个氨基酸类、8个萜类、25个有机酸类、11个含氮类、44个黄酮类成分。其中,16个成分通过与对照品比对确认。结论:分析鉴定了复方一枝蒿颗粒的化学成分,为其质量控制及药效物质基础研究提供了依据。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS的三种基原溪黄草及其干预小鼠肝纤维化的血清化学研究

目的应用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)技术研究三种基原溪黄草及其在肝纤维化小鼠口服给药后的血清化学成分。方法采用Shim-pack GIST-HP C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,3μm);流动相为0.1%甲酸水(A)-甲醇(B),梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温30℃。通过结合高分辨质谱数据及质谱裂解规律,对三种基原溪黄草药材样本及其给药小鼠血清的化学成分进行表征。结果在三种基原溪黄草药材中鉴定出40个化合物,主要包括二萜类、黄酮类、酚酸类化合物。在小鼠血清中鉴定出2个入血成分以及2个可能的代谢产物。结论本研究初步鉴定了三种基原溪黄草在四氯化碳致肝纤维化小鼠中的入血成分及部分代谢产物,为其用于治疗肝纤维化的药效物质基础提供了理论参考。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术的退黄合剂化学成分快速表征

目的建立一种高效快速的超高效液相色谱串联四极杆轨道阱质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)法,对退黄合剂的化学成分进行表征。方法采用Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以流动相0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,进样量为2μL,柱温为40°C。质谱采用电喷雾离子源(ESI)负离子模式,质谱扫描范围为m/z 100~1500。结果通过对照品、数据库及参考文献共鉴定出退黄合剂中77种化学成分,其中包括黄酮类30种、多酚类18种、有机酸10种、萜类9种、蒽醌类9种、其他类1种。结论所建立的方法可高效、快速地鉴定退黄合剂的化学成分。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术的垂盆草化学成分表征与鉴定

建立超高效液相-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS),表征与鉴定垂盆草中的化学成分。采用Phenomenex Kinetex C 18(2.1 mm×100 mm,2.6μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,进样量为3.0μL;选择电喷雾离子源,正、负离子模式扫描。根据化合物的保留时间、精确分子量、二级碎片离子、裂解规律及对照品比对进行化合物分析鉴定。结果显示,从垂盆草中共鉴定或初步推导出了53个化学成分,主要包括25种黄酮、12种Megastigmanes类化合物、11种有机酸、3种生物碱及2种其他化合物。其中有5种化合物与对照品比对获得鉴定,3种化合物目前未见报道。该研究建立的UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS方法可快速且全面表征垂盆草的化学成分,为其质量控制及药效物质基础研究提供参考数据。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术分析土茯苓苯丙素类化学成分及其对类风湿关节炎特征基因的干预

通过超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术(UHPLC-Q Exactive Orbitrap-MS)鉴定土茯苓苯丙素类化合物,筛选与特定免疫细胞浸润相关的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)诊断标志物及苯丙素类化合物。以正离子和负离子模式采集数据分析土茯苓苯丙素类化学成分。通过GEO(gene expression omnibus)数据库获取RA基因芯片,基于“一致性聚类”进行共识聚类且区分RA不同的分子亚型。通过R软件绘制特征基因受试者工作特征曲线(receiveroperating characteristic curve,ROC),并计算ROC曲线下的面积。通过单样本基因集富集分析特征基因与免疫细胞的相关性。基于SYBYL2.1.1分子对接分析苯丙素类化合物与特征基因的结合情况。对RA差异表达基因进行过滤,获得5个特征基因,其中RAC2、ITGB7、CD52、ITGB2基因的ROC曲线面积通过验证,4特征基因能影响8种免疫细胞(活化的CD4+T细胞,活化的CD8+T细胞,中央记忆CD4+T细胞,效应记忆CD4+T细胞,骨髓源性抑制细胞,单核细胞,调节性T细胞,效应记忆CD8+T细胞),且呈正相关(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。土茯苓苯丙素类化合物26个,能共同干预4个免疫特征基因。基于免疫细胞浸润的模型可用于预测RA的发病机制,土茯苓苯丙素类化合物对免疫特征基因具有干预作用,研究结果为RA免疫调节治疗和早期诊断提供科学依据。

基于UHPLC-Q Exactive MS的分子网络技术快速分析龙葵叶物质成分

龙葵(Solanum nigrum L.)全草均可入药。本研究采用UHPLC-Q Exactive高分辨质谱结合GNPS分子网络(global natural products social molecular networking),对龙葵叶的化学成分进行快速表征。通过与文献报道数据比较,并结合质谱裂解特征规律分析,以及GNPS分子网络中已知和未知节点的关联分析,从龙葵叶中共鉴定157个化合物,包括甾体生物碱30个,甾体皂苷61个,黄酮类35个,氨基酸、有机酸等其他类型化合物31个。与龙葵果和龙葵茎相比,龙葵叶中甾体皂苷、甾体生物碱、黄酮类成分的种类均较为丰富,本研究结果为龙葵药材资源的精准利用奠定了基础。