参仙升脉口服液化学成分的UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS快速分析

目的探究参仙升脉口服液的化学物质基础。方法利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)对参仙升脉口服液的化学成分进行整体、系统辨识。采用Thermo Accucore aQ C_(18)色谱柱(150 mm×2.1 mm,2.6μm),流动相0.1%甲酸水溶液(A)-甲醇(B)梯度洗脱,洗脱程序为0-13 min,5%-60%B;13-27 min,60%-95%B;27-30 min,95%B,流速0.3 mL·min^(-1),柱温30°C;质谱分析离子化方式为加热电喷雾离子化(H-ESI),扫描模式为正、负离子切换,扫描范围m/z 120-1800,碰撞能量30 eV、50 eV、70 eV。结果共鉴定出160个化学成分,包括29个黄酮类成分,24个有机酸类成分,21个生物碱类成分,19个萜类成分,15个苯丙素类成分,12个皂苷类成分和40个其他类成分;其中6个化学成分(芦丁、补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂酚)经对照品比对确认。结论该研究借助UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS技术实现了参仙升脉口服液化学成分准确、快速、系统的分析和鉴定,为其化学物质基础的阐明和质量控制提供了重要依据。

UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析头痛宁胶囊的体内分布特征

目的解析头痛宁胶囊在大鼠体内的分布特征。方法采用UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析大鼠灌胃头痛宁胶囊后不同时间点血浆、不同组织及排泄物中的原形成分分布特征。结果从给药后15、30、60、90、120 min的大鼠血浆样品中分别检出39、44、42、41、38种头痛宁胶囊的原形成分,由此可见,给药30 min后的入血原形成分最多;从心、肝、脾、肺、肾、脑、粪便、尿液中分别检测到7、9、20、4、11、8、21、21种原形成分。这些成分类型主要为黄酮、有机酸、酚及二苯乙烯苷类化合物,包括升麻素、升麻素苷、白藜芦醇、溶血磷脂酰胆碱、天麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、落新妇苷和2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷等成分。结论本法为后续头痛宁胶囊的药效物质基础研究及药效标志物的筛选提供了重要依据。

秦岭岩白菜根茎化学成分的UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析

目的:采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)对秦岭岩白菜药材的化学成分进行快速识别和鉴定。方法:选择秦岭岩白菜的75%甲醇提取液作为供试品溶液,采用Thermo Accucore aQ RP18色谱柱(2.1 mm×150 mm,2.6μm),流动相甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~40 min,5%~95%A;40~45 min,95%A),流速0.3 mL·min-1,柱温30℃;质谱分析采用加热电喷雾离子源(HESI),正、负离子模式扫描,扫描范围m/z 80~1 200。结果:共鉴定出了66个成分,包括游离氨基酸2个、岩白菜素类7个、黄酮类15个、有机酸类15个、糖苷类25个及其他类2个。结论:该方法可系统、准确、快速地对秦岭岩白菜药材中化学成分进行定性分析,其中8个成分(琥珀酸、熊果苷、没食子酸、原儿茶酸、岩白菜素、儿茶素、绿原酸和咖啡酸)与对照品比对而准确鉴定,51个成分为首次在秦岭岩白菜中发现,28个成分为首次从岩白菜属植物中发现,可为秦岭岩白菜药效物质研究及质量评价提供重要依据。

秦岭岩白菜入血成分及其代谢产物的UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析

目的:研究秦岭岩白菜提取物在大鼠体内的入血原型成分及代谢产物。方法:采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)技术,通过比对秦岭岩白菜提取液、空白血清和含药血清的图谱差异,根据保留时间、相对分子质量,以及一级、二级离子碎片,解析秦岭岩白菜提取物经大鼠灌胃给药后血清中的原型成分和代谢产物,检测条件为流动相选择甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~40 min,5%~95%A;40~45 min,95%A),流速设定0.3 mL·min^(-1),进样量1μL,加热电喷雾离子源,检测范围m/z 80~1200,正、负离子扫描模式。结果:大鼠口服给药后,共在血清中检测到35个移行成分,其中6个为原型成分,29个为代谢产物。经鉴定6个原型成分分别为熊果苷、mallonanoside A、岩白菜素、ardimerin、水杨酸、鞣花酸,29个代谢产物主要是来自含有没食子酸、mallonanoside A、岩白菜素、儿茶素、鞣花酸等结构单元的化合物代谢物,其代谢途径主要为葡萄糖醛酸化、硫酸酯化、甲基化等,以Ⅱ相代谢为主。结论:入血成分及其代谢产物可能是秦岭岩白菜体内直接作用的药效成分,其中mallonanoside A、岩白菜素、鞣花酸在体内既可以原型成分入血,又可以经过Ⅱ相代谢发挥药效;而秦岭岩白菜药材中的其他大多数化学成分在体内可能主要是先通过水解等途径转化为没食子酸、岩白菜素、儿茶素等简单结构,再进一步发生Ⅱ相代谢。

基于UHPLC-Q Exactive Orbitrap/MS结合多元统计方法分析不同基原淫羊藿化学成分的差异

目的:建立超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用(UHPLC-Q Exactive Orbitrap/MS)结合多元统计分析技术对5种不同基原淫羊藿化学成分差异分析的方法。方法:对5种基原30批淫羊藿样品的UHPLC-Q Exactive Orbitrap/MS全扫描数据进行多元统计分析。利用SIMCA软件进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)。结果:5种基原淫羊藿的化学成分具有差异性,根据相关参考文献及谱图信息,共鉴定出27种化学成分。所建立的OPLS-DA模型具有良好的数据描述能力和预测能力。柔毛淫羊藿化学成分具有显著性差异,而朝鲜淫羊藿与箭叶淫羊藿,淫羊藿与巫山淫羊藿之间的化学成分及含量具有相似性。经过筛选与分析,确定8种差异化学成分。结论:建立的方法可分析出5种基原淫羊藿化学成分的差异性,操作简便,方法准确,可为不同基原淫羊藿的质量控制及开发应用提供理论依据。

UHPLC-Q Exactive高分辨质谱联用法分析淫羊藿中的化学成分

目的采用UHPLC-Q Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术鉴定分析淫羊藿药材成分。方法采用Thermo Hypersil GLOD C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱,体积分数0.1%甲酸水溶液-乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为40℃,电喷雾正、负离子模式扫描。结果共分析和鉴定出79个化合物,包括黄酮类、生物碱类、有机酸类和木脂素类化合物,其中16个化合物经与对照品比对鉴定。鉴定的黄酮类包括46个异戊烯基黄酮醇类化合物,异戊烯基黄酮醇类负离子模式二级特征碎片为m/z 367、351、513、353和323。初步鉴定化合物41、54、76、65和69为新的异戊烯基黄酮。结论淫羊藿中异戊烯基黄酮醇类多具有淫羊藿素或8-异戊烯基山奈酚苷元母核结构,该结果为淫羊藿成分的系统分析提供了数据支持。

超高效液相色谱-串联Orbitrap质谱(Q-Exactive)对湿热质人群代谢表型的分析

采用超高效液相色谱-串联Orbitrap质谱(UHPLC-Q/Exactive)技术分析湿热质(n=8)和平和质(n=13)志愿者尿液,运用质谱数据建立无监督的火山模型和有监督的正交偏最小二乘判别分析模型(OPLS-DA)筛选湿热质的特征代谢物,并分析湿热质与平和质志愿者间代谢表型的差异,通过特征代谢物的代谢通路分析,研究湿热质形成的分子作用机理。结果表明,湿热质和平和质的代谢表型存在显著差异,通过火山模型可筛选出22个差异显著的代谢物,通过OPLS-DA模型可筛选出29个特征代谢物。代谢通路分析结果表明,湿热质志愿者精氨酸和脯氨酸代谢,组氨酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢等通路发生了紊乱,这为针对湿热质人群实施精准营养提供了新的思路。

基于UHPLC-Q Exactive Orbitrap HRMS的如意珍宝丸体内外成分分析

目的:基于超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q Exactive Orbitrap HRMS)对如意珍宝丸所含化学成分及其入血、入脑成分进行定性研究。方法:采用UHPLC-Q Exactive Orbitrap HRMS鉴定如意珍宝丸的化学成分。12只雄性SD大鼠随机分为空白组与如意珍宝丸组,如意珍宝丸组按生药量1.8 g·kg^(-1)进行如意珍宝丸混悬液灌胃,空白组灌胃等体积纯水。灌胃1.5 h后取血浆与脑脊液,采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~15 min,97%~80%A;15~30 min,80%~60%A;30~40 min,60%~30%A;40~45 min,30%~5%A),电喷雾离子源(ESI),扫描范围m/z 100~1500,并结合文献和对照品的相应信息,分别完成在正、负离子模式下对样品进行入血与入脑成分的定性分析。结果:从如意珍宝丸80%甲醇溶液中鉴定出126种化合物,血浆中检测到14种原型成分,脑脊液中检测到7种原型成分,并分析了芹菜素、芹菜素-7-O葡萄糖醛酸苷、高良姜素、甘草苷、胡椒碱、甘草酸、丁香酚、没食子酸和胆酸的裂解规律。结论:该研究实现了如意珍宝丸中多类别体外化学成分、入血及入脑成分的快速表征与鉴定,为该品种药效物质基础与质量控制研究提供了参考。

基于HPLC指纹图谱与UPLC-Q Exactive Focus MS/MS的黄芩炒炭前后化学成分变化

目的探究黄芩Scutellariae Radix炒炭前后的化学成分变化。方法HPLC法建立黄芩片及黄芩炭的指纹图谱,标定共有峰并通过主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)筛选出黄芩炒炭前后的差异性成分。进一步通过UPLC-Q Exactive Focus MS/MS技术对差异性成分进行定性分析。结果建立的HPLC指纹图谱中,黄芩片标定了21个共有峰,15批黄芩片的相似度为0.998~1.000;黄芩炭标定了16个共有峰,15批黄芩炭的相似度为0.979~0.999;指认出黄芩炒炭前后28个差异性成分;通过UPLC-Q Exactive Focus MS/MS技术确定黄芩炭炮制前后的主要差异性成分为黄芩苷、汉黄芩苷、千层纸素A苷、黄芩素及汉黄芩素。结论通过对黄芩炒炭前后化学成分的系统研究,明确了黄芩炒炭前后的主要差异性成分,为完善黄芩片及黄芩炭质量标准提供了依据,为黄芩炭凉血止血谱效关系的研究提供了一定的参考依据。

蛭蛇通络胶囊的入血、入脑成分研究

目的分析蛭蛇通络胶囊入血、入脑成分。方法16只大鼠随机分为4组,灌胃给药(3.1 g/kg),建立脑缺血再灌注损伤(MACO)模型,取血和脑组织,UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS法鉴定原型成分。结果共鉴定出70种成分,血浆中有20种,主要为黄酮类、丹参醌类、川芎苯酞类,7种能透过血脑屏障进入脑组织。与正常给药组比较,MACO给药组入血成分增加间羟基苯甲酸、毛蕊异黄酮苷、莪术烯醇、洋川芎内酯B、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮;左脑组织(梗死侧)入脑成分减少葛根素、榄香素、新蛇床内酯,增加丹酚酸A、洋川芎内酯I、二氢丹参酮Ⅰ。结论蛭蛇通络胶囊入血、入脑成分及脑缺血再灌注损伤大鼠体内增强吸收的苯酞类、醌类、酚类成分可能是治疗脑梗塞的活性物质。

多花黄精对少弱精子症大鼠生精细胞凋亡的保护作用及药效物质基础研究

目的阐明多花黄精对少弱精子症大鼠模型生精细胞凋亡的保护作用及药效物质基础。方法采用UHPLC-Q Exactive Focus HRMS技术鉴定多花黄精化学成分,及其提取物灌胃给予大鼠后在血清和睾丸组织中的化学成分。设置空白组、模型组、阳性药组(左卡尼汀300 mg/kg)及多花黄精高、中、低剂量组(10、5和2.5 g/kg),考察其改善少弱精子症的药理作用,每组6只大鼠。通过HE染色观察大鼠睾丸组织病理形态,TUNEL染色观察大鼠睾丸生精细胞的凋亡情况,免疫荧光法检测DNMT3A和PIWIL1蛋白表达。结果从多花黄精提取物、大鼠血清、大鼠睾丸中分别鉴定出138种、23种、30种化学成分。模型组大鼠睾丸曲细精管中大量生精细胞凋亡,DNMT3A和PIWIL1蛋白低表达,而多花黄精高、中剂量组大鼠睾丸曲细精管中TUNEL阳性生精细胞数量减少,DNMT3A和PIWIL1蛋白表达显著升高。结论多花黄精对少弱精子症大鼠具有保护作用,其可能是通过上调大鼠睾丸中DNMT3A和PIWIL1的表达,逆转生精细胞的凋亡。

UHPLC-Q Exactive轨道肼高分辨质谱在线快速识别黄芪建中汤的化学成分

本文采用UHPLC-Q Exactive轨道肼高分辨质谱建立了快速、灵敏的液质联用方法在线快速鉴定黄芪建中汤的化学成分,构建了较为全面的黄芪建中汤化学成分谱,用于该复方的质量评价。依据离子峰的保留时间、精确分子量和多级质谱碎片,与对照品及文献报道数据比较,对黄芪建中汤的整体化学成分进行了在线快速鉴定。共鉴定了黄芪建中汤中71种化学成分,主要包括皂苷类和黄酮类,另外还有个别生物碱类和酚类化合物等。这些成分中,来源于黄芪的有20种、白芍14种、甘草37种、生姜3种、桂枝大枣各2种,为黄芪建中汤的质量控制以及药效物质基础研究提供了科学依据。

采用UHPLC-QExactive轨道肼高分辨质谱快速识别脑震宁颗粒的化学成分

脑震宁颗粒是由11味中药组成的复方制剂,临床主要用于治疗脑震荡、脑外伤综合征等。针对其复杂的物质组成,本研究采用UHPLC-Q Exactive轨道肼高分辨质谱建立了脑震宁颗粒化学成分的快速识别方法,通过分析色谱保留行为、精确分子质量、裂解碎片信息,结合文献及对照品数据对照,并借助Compound Discover2.0自动指认,共鉴定出脑震宁颗粒中161个化合物,并对这些成分的来源进行了归属。所鉴定的成分包括环烯醚萜苷类9个、丁基苯酞类8个、黄酮及黄酮苷类26个、酚酸类8个、单萜苷类8个、生物碱类9个,以及有机酸、氨基酸、糖类等中药材共性成分。本研究首次对脑震宁颗粒的化学组成进行了全面表征,所构建的脑震宁化学成分物质组为其进一步的质量控制和药效物质基础研究奠定了基础。

基于UHPLC-Q Exactive MS的分子网络技术快速分析龙葵叶物质成分

龙葵(Solanum nigrum L.)全草均可入药。本研究采用UHPLC-Q Exactive高分辨质谱结合GNPS分子网络(global natural products social molecular networking),对龙葵叶的化学成分进行快速表征。通过与文献报道数据比较,并结合质谱裂解特征规律分析,以及GNPS分子网络中已知和未知节点的关联分析,从龙葵叶中共鉴定157个化合物,包括甾体生物碱30个,甾体皂苷61个,黄酮类35个,氨基酸、有机酸等其他类型化合物31个。与龙葵果和龙葵茎相比,龙葵叶中甾体皂苷、甾体生物碱、黄酮类成分的种类均较为丰富,本研究结果为龙葵药材资源的精准利用奠定了基础。

UHPLC-Q/Exactive测定卫矛科不同属药材中12种成分的含量

目的:采用超高效液相-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q/Exactive),建立卫矛科不同属药材中12种成分的快速定量检测方法。方法:将卫矛科药材进行粉碎后过筛,甲醇超声提取。采用UPLC^(®)HSS T3柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)、以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,后采用配有电喷雾离子源的四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱在正离子模式下进行检测,内标法进行定量。结果:该方法线性较好,线性范围广,12种化学成分在0.8~2000.0 ng/ml范围内都有着良好的线性关系,相关系数(R^(2))均>0.99;样品加样回收率为97.9%~108.0%,相对标准偏差为0.1%~1.2%。结论:该法具有快速、操作简便、准确度高的优点,可用于卫矛科药材成分快速定量分析,更好的促进卫矛科药材的合理利用,扩大可使用的药材种类,为中药资源的科学开发提供一定依据。

对氨甲苯酸注射液中特定杂质4-甲酰基苯甲酸的研究

目的研究氨甲苯酸注射液中的特定杂质。方法对样品进行有关物质检查,利用半制备柱从样品中制备杂质,建立UHPLC-Q Exactive Focus MS法对样品中的杂质进行结构鉴定,并以氨甲苯酸为参照物,采用斜率法计算杂质的相对校正因子。结果确定了特定杂质为4-甲酰基苯甲酸,且其在1.244~62.20 ng·mL^(-1)与峰面积线性关系良好,Y=1687X-330.5(r=1.000),相对校正因子为2.88,检测限和定量限分别为0.27 ng·mL^(-1)和1.07 ng·mL^(-1),重复性RSD为0.44%,稳定性RSD为0.50%,加样回收率在97.85%~102.6%(RSD=1.4%)。结论本文利用半制备柱从样品中制备杂质,建立了UHPLC-Q Exactive Focus MS方法对杂质结构进行鉴定及定量分析,进一步完善质量标准。

氨甲苯酸注射液日晒降解产物的研究

目的对氨甲苯酸注射液的日晒降解产物进行研究。方法考察日晒对氨甲苯酸注射液有关物质和pH值的影响,建立UHPLC-Q Exactive Focus MS法对样品中产生的杂质进行结构鉴定并进行毒性预测。结果日照10 d的氨甲苯酸注射液颜色变黄,采用UHPLC-Q Exactive Focus MS推测该杂质的结构为3-羟基-4-羟甲基苯甲酸,当样品中该杂质含量超过0.1%时溶液颜色变黄,对杂质的毒性预测显示,该杂质属遗传毒性5级。结论氨甲苯酸注射液在光和热同时作用下产生杂质3-羟基-4-羟甲基苯甲酸,同时4-甲酰基苯甲酸含量和其他杂质总量明显增加,提示氨甲苯酸注射液应采用棕色安瓿包装为宜,避免阳光直射。

动态连续潮流与改进粒子群优化算法相结合的静态电压稳定分析

建立了静态电压稳定分析的优化数学模型,同时用精确罚函数的形式处理节点电压和发电机无功功率这两个状态变量的不等式约束。提出了一种动态连续潮流(Dynamic Continuation Power Flow,DCPF)与自适应混沌聚焦粒子群算法(Adaptive Chaotic Focusing Particle Swarm Optimization,ACFPSO)相结合求取最大静态电压稳定裕度的方法。该方法以静态电压稳定裕度最大为目标函数,用DCPF计算每一组控制变量对应的静态电压稳定裕度,将混沌算法引入到自适应聚焦粒子群算法中组成ACFPSO,利用ACFPSO进行最优控制变量组合的搜索。通过分析控制变量组合和静态电压稳定裕度的对应关系,找到提高静态电压稳定裕度的措施。对IEEE6、IEEE30节点系统的仿真计算验证了该算法的有效性。

超高效液相色谱-高分辨质谱测定白酒中氨基甲酸乙酯含量

利用氨基甲酸乙酯(ehthy carbamate,EC)源内裂解的特殊性质,在超高效液相色谱-高分辨质谱一级全扫描模式下,以EC母离子(m/z 90.05)及其子离子(m/z 62.02)作为定性离子,m/z 62.02作为定量离子,开发酱香型白酒中EC的一级子离子定量法,有效解决了一级母离子定量噪音较大、二级子离子定量响应较低的问题。结果表明,在12.2~244μg/L内线性相关系数大于0.999,检出限为0.95μg/L,加标回收率在83.46%~106.79%之间,相对标准偏差为0.67%~3.54%。该方法具有分析速度快、检出限低、准确度高等优点,适用于酱香型白酒中EC的监控。

缬苯那嗪类似物P109人肝微粒体中代谢产物鉴定及酶表型研究

化合物P109是缬苯那嗪结构类似物,其在9位进行了环丙烷甲基取代,具有与缬苯那嗪相似的药物活性与药理作用机制。为研究P109在人肝微粒体孵育体系中的代谢产物,采用Waters Eclipse Plus-C18色谱柱(150 mm×2.1 mm×3.5μm)分离,以0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,利用超高效液相色谱-高性能台式四极杆-轨道阱质谱(UHPLC-Q Exactive^(TM) Orbitrap MS)技术,在正离子模式下分析样品,筛选出9个化合物(包括P109及其8个代谢产物),并进行结构鉴定。结果表明,P109经人肝微粒体主要发生氧化、水解、脱环丙烷甲基的Ⅰ相代谢反应。代谢产物酶表型研究表明,P109的主要代谢酶亚型为CYP3A4和CYP2C8,次要代谢酶亚型为CYP2D6。本研究初步阐明了P109在人肝微粒体中的代谢规律及代谢产物酶表型,可为新药筛选、毒理学研究提供支持。