基于UHPLC-Q ExactiveOrbitrap-MS法的山楂不同部位化学成分分析

利用UHPLC-Q ExactiveOrbitrap-MS技术检测山楂叶、山楂肉、山楂核化学成分,考察山楂不同部位化学成分差异。色谱使用Waters ACQUITYUPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水和甲醇为流动相进行梯度洗脱;质谱采用ESI离子化方式,正负离子切换模式采集。结果在山楂叶、山楂肉、山楂核中共鉴定了19种化学成分,其中山楂叶中黄酮类成分较多,山楂肉中有机酸类成分较多,而山楂核中指认的成分较少,一定程度上阐明了其不同入药部位发挥不同活性的药效物质基础。

基于UHPLC-Q Exactive Orbitrap/MS结合多元统计方法分析不同基原淫羊藿化学成分的差异

目的:建立超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用(UHPLC-Q Exactive Orbitrap/MS)结合多元统计分析技术对5种不同基原淫羊藿化学成分差异分析的方法。方法:对5种基原30批淫羊藿样品的UHPLC-Q Exactive Orbitrap/MS全扫描数据进行多元统计分析。利用SIMCA软件进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)。结果:5种基原淫羊藿的化学成分具有差异性,根据相关参考文献及谱图信息,共鉴定出27种化学成分。所建立的OPLS-DA模型具有良好的数据描述能力和预测能力。柔毛淫羊藿化学成分具有显著性差异,而朝鲜淫羊藿与箭叶淫羊藿,淫羊藿与巫山淫羊藿之间的化学成分及含量具有相似性。经过筛选与分析,确定8种差异化学成分。结论:建立的方法可分析出5种基原淫羊藿化学成分的差异性,操作简便,方法准确,可为不同基原淫羊藿的质量控制及开发应用提供理论依据。

参仙升脉口服液化学成分的UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS快速分析

目的探究参仙升脉口服液的化学物质基础。方法利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)对参仙升脉口服液的化学成分进行整体、系统辨识。采用Thermo Accucore aQ C_(18)色谱柱(150 mm×2.1 mm,2.6μm),流动相0.1%甲酸水溶液(A)-甲醇(B)梯度洗脱,洗脱程序为0-13 min,5%-60%B;13-27 min,60%-95%B;27-30 min,95%B,流速0.3 mL·min^(-1),柱温30°C;质谱分析离子化方式为加热电喷雾离子化(H-ESI),扫描模式为正、负离子切换,扫描范围m/z 120-1800,碰撞能量30 eV、50 eV、70 eV。结果共鉴定出160个化学成分,包括29个黄酮类成分,24个有机酸类成分,21个生物碱类成分,19个萜类成分,15个苯丙素类成分,12个皂苷类成分和40个其他类成分;其中6个化学成分(芦丁、补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂酚)经对照品比对确认。结论该研究借助UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS技术实现了参仙升脉口服液化学成分准确、快速、系统的分析和鉴定,为其化学物质基础的阐明和质量控制提供了重要依据。

UHPLC-Q Exactive高分辨质谱联用法分析淫羊藿中的化学成分

目的采用UHPLC-Q Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术鉴定分析淫羊藿药材成分。方法采用Thermo Hypersil GLOD C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱,体积分数0.1%甲酸水溶液-乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为40℃,电喷雾正、负离子模式扫描。结果共分析和鉴定出79个化合物,包括黄酮类、生物碱类、有机酸类和木脂素类化合物,其中16个化合物经与对照品比对鉴定。鉴定的黄酮类包括46个异戊烯基黄酮醇类化合物,异戊烯基黄酮醇类负离子模式二级特征碎片为m/z 367、351、513、353和323。初步鉴定化合物41、54、76、65和69为新的异戊烯基黄酮。结论淫羊藿中异戊烯基黄酮醇类多具有淫羊藿素或8-异戊烯基山奈酚苷元母核结构,该结果为淫羊藿成分的系统分析提供了数据支持。

UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析头痛宁胶囊的体内分布特征

目的解析头痛宁胶囊在大鼠体内的分布特征。方法采用UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析大鼠灌胃头痛宁胶囊后不同时间点血浆、不同组织及排泄物中的原形成分分布特征。结果从给药后15、30、60、90、120 min的大鼠血浆样品中分别检出39、44、42、41、38种头痛宁胶囊的原形成分,由此可见,给药30 min后的入血原形成分最多;从心、肝、脾、肺、肾、脑、粪便、尿液中分别检测到7、9、20、4、11、8、21、21种原形成分。这些成分类型主要为黄酮、有机酸、酚及二苯乙烯苷类化合物,包括升麻素、升麻素苷、白藜芦醇、溶血磷脂酰胆碱、天麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、落新妇苷和2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷等成分。结论本法为后续头痛宁胶囊的药效物质基础研究及药效标志物的筛选提供了重要依据。

多花黄精对少弱精子症大鼠生精细胞凋亡的保护作用及药效物质基础研究

目的阐明多花黄精对少弱精子症大鼠模型生精细胞凋亡的保护作用及药效物质基础。方法采用UHPLC-Q Exactive Focus HRMS技术鉴定多花黄精化学成分,及其提取物灌胃给予大鼠后在血清和睾丸组织中的化学成分。设置空白组、模型组、阳性药组(左卡尼汀300 mg/kg)及多花黄精高、中、低剂量组(10、5和2.5 g/kg),考察其改善少弱精子症的药理作用,每组6只大鼠。通过HE染色观察大鼠睾丸组织病理形态,TUNEL染色观察大鼠睾丸生精细胞的凋亡情况,免疫荧光法检测DNMT3A和PIWIL1蛋白表达。结果从多花黄精提取物、大鼠血清、大鼠睾丸中分别鉴定出138种、23种、30种化学成分。模型组大鼠睾丸曲细精管中大量生精细胞凋亡,DNMT3A和PIWIL1蛋白低表达,而多花黄精高、中剂量组大鼠睾丸曲细精管中TUNEL阳性生精细胞数量减少,DNMT3A和PIWIL1蛋白表达显著升高。结论多花黄精对少弱精子症大鼠具有保护作用,其可能是通过上调大鼠睾丸中DNMT3A和PIWIL1的表达,逆转生精细胞的凋亡。

超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱法快速筛查减肥食品中非法添加物

本研究建立了超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱(UHPLC-Q/Orbitrap MS)法快速筛查减肥类食品中非法添加的化学药物。采用乙腈超声提取样品,使用UHPLC-Q/Orbitrap MS采集数据,以青梅和果冻为基质,外标法定量分析。基于7种自建的减肥类食品非法添加物数据库,在青梅中检出1种未知添加物。通过分析未知添加物的分子离子峰、二级质谱碎片离子信息及同位素信息,结合密度泛函理论,并经过标准品验证,确认其为新型非法添加物4-氯双醋酚丁。通过优化样品提取溶剂和流动相溶液,考察了8种非法添加物的检出限、定量限、线性范围、回收率、相对标准偏差和基质效应。结果表明,脱乙酰比沙可啶和比沙可啶的检出限为0.001 mg/kg、定量限为0.005 mg/kg,其余6种化合物的检出限为0.05 mg/kg、定量限为0.1 mg/kg,线性相关系数(R^(2))不低于0.999,所有化合物均表现为中等和弱基质效应,回收率为71.02%~103.01%,相对标准偏差为0.87%~13.24%。将该方法应用于减肥类食品青梅和果冻的快速筛查中,30%青梅检出4-氯双醋酚丁。本方法适用于减肥类食品中非法添加物的快速定性、定量分析,可在潜在风险物识别方面发挥作用。

蛭蛇通络胶囊的入血、入脑成分研究

目的分析蛭蛇通络胶囊入血、入脑成分。方法16只大鼠随机分为4组,灌胃给药(3.1 g/kg),建立脑缺血再灌注损伤(MACO)模型,取血和脑组织,UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS法鉴定原型成分。结果共鉴定出70种成分,血浆中有20种,主要为黄酮类、丹参醌类、川芎苯酞类,7种能透过血脑屏障进入脑组织。与正常给药组比较,MACO给药组入血成分增加间羟基苯甲酸、毛蕊异黄酮苷、莪术烯醇、洋川芎内酯B、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮;左脑组织(梗死侧)入脑成分减少葛根素、榄香素、新蛇床内酯,增加丹酚酸A、洋川芎内酯I、二氢丹参酮Ⅰ。结论蛭蛇通络胶囊入血、入脑成分及脑缺血再灌注损伤大鼠体内增强吸收的苯酞类、醌类、酚类成分可能是治疗脑梗塞的活性物质。

超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱探究4-HO-MiPT染毒斑马鱼脑部代谢组学变化

为评价色胺类新精神活性物质4-羟基-N-甲基-N-异丙基色胺(4-HO-MiPT)对大脑的毒性效应,本实验以斑马鱼为模式生物进行自发活动行为记录分析,采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLCQ/Orbitrap HRMS)分析斑马鱼大脑长期染毒后的代谢产物,并在转录水平上检测斑马鱼脑部目标基因的变化。结果表明,注射药物4-HO-MiPT后,斑马鱼运动速度明显减慢,运动范围明显缩小。从斑马鱼大脑检测出37种差异代谢产物,其中7种升高,30种降低,并导致6条代谢通路改变。脑部基因转录水平检测发现,4个神经系统的基因转录水平下降,对大脑细胞产生影响。本实验证明了4-HO-MiPT对斑马鱼大脑产生毒性效应,对神经系统、免疫功能造成损害并影响体内代谢,对斑马鱼行为产生明显的抑制效果,同时从4-HO-MiPT造成的内源性影响推测其可能致癌。

基于UPLC-QE Plus-MS/MS技术的广东紫珠化学成分分析及其神经保护活性

分析广东紫珠(Callicarpa kwangtungensis,CK)的化学成分并探讨其对神经细胞的保护作用。本研究采用超高效液相色谱串联四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-QE Plus-MS/MS)对CK的化学成分进行鉴定。通过建立体外神经炎症模型,检测一氧化氮(nitric oxide,NO)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)炎症因子含量,结合细胞流式术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,并使用免疫荧光观察细胞形态变化,以评估CK的神经保护作用。在CK中共鉴定出108个化学成分,包括34个苯乙醇苷类、10个苯丙素类、25个黄酮类、23个萜类、10个有机酸类、2个有机醛类和4个其他类化合物,其中21个成分为首次鉴定。体外实验结果表明,CK能够抑制脂多糖诱导的BV2细胞NO、IL-1β、IL-6和ROS的表达水平,并能够逆转BV2细胞的活化状态。本研究通过UPLC-QE Plus-MS/MS实现对CK化学成分进行快速分析,并探讨了其神经保护活性,为后续的药效物质基础研究和新药开发提供了重要的理论依据。

超高效液相色谱-串联Orbitrap质谱(Q-Exactive)对湿热质人群代谢表型的分析

采用超高效液相色谱-串联Orbitrap质谱(UHPLC-Q/Exactive)技术分析湿热质(n=8)和平和质(n=13)志愿者尿液,运用质谱数据建立无监督的火山模型和有监督的正交偏最小二乘判别分析模型(OPLS-DA)筛选湿热质的特征代谢物,并分析湿热质与平和质志愿者间代谢表型的差异,通过特征代谢物的代谢通路分析,研究湿热质形成的分子作用机理。结果表明,湿热质和平和质的代谢表型存在显著差异,通过火山模型可筛选出22个差异显著的代谢物,通过OPLS-DA模型可筛选出29个特征代谢物。代谢通路分析结果表明,湿热质志愿者精氨酸和脯氨酸代谢,组氨酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢等通路发生了紊乱,这为针对湿热质人群实施精准营养提供了新的思路。

基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱对西藏不同产地甘青青兰的差异性成分分析

采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q/Orbitrap HRMS)技术对西藏3个地区的41批甘青青兰样本进行分析,通过Compound Discoverer 3.2软件对化学成分进行鉴定,并利用多元统计学分析筛选出不同地区样本之间的差异性成分。在甘青青兰样本中共鉴定73种化合物,包括41种黄酮类、15种有机酸类、8种氨基酸类以及9种其他类化合物。经多元统计学分析,山南市样本(SN)与拉萨市样本(LS)之间有11种差异化合物,山南市样本(SN)与昌都市样本(CD)之间有18种差异化合物,拉萨市样本(LS)与昌都市样本(CD)之间有21种差异化合物(VIP>1,P<0.05)。大多数差异化合物为黄酮类及有机酸类化合物。绿原酸在3组样本间的含量差异最大,在CD组含量最高(约为11.85 mg/g),LS组次之(约为7.85 mg/g),SN组最低(约为5.30 mg/g),这与甘青青兰样本的叶子数量和粉末颜色有一定的相关性。结合各地区地势及气候推测光照日长及日温差对甘青青兰化学成分有影响。综上所述,推测地理环境的差异对甘青青兰的性状和化学成分具有影响。研究结果为甘青青兰质量控制及后续开发利用提供了理论基础。

青胶蒲公英化学成分鉴定及质谱裂解规律研究

采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q/Orbitrap HRMS)对青胶蒲公英中的化学成分进行快速分析鉴定。将青胶蒲公英的根、叶干燥粉碎,经超声/微波辅助萃取,采用Waters ACQUITY BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm×1.7μm),以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱。洗脱液经大气压化学电离源(APCI)离子化后,采用全扫描-数据依赖型二级质谱扫描模式进行数据采集。将预处理后的数据与中药数据库及在线数据库等比对分析,包括一级精确质荷比、同位素峰分布以及二级质谱图匹配,共鉴定出164种化合物,包括黄酮类、香豆素类、萜类、有机酸类、生物碱类、木质素类等,同时对部分鉴定成分的质谱裂解规律进行推导,有助于黄酮类等化合物的结构解析,为青胶蒲公英中黄酮类等成分结构类似物的快速鉴定提供了重要的实验依据。

基于UHPLC-Q Exactive Orbitrap HRMS的如意珍宝丸体内外成分分析

目的:基于超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q Exactive Orbitrap HRMS)对如意珍宝丸所含化学成分及其入血、入脑成分进行定性研究。方法:采用UHPLC-Q Exactive Orbitrap HRMS鉴定如意珍宝丸的化学成分。12只雄性SD大鼠随机分为空白组与如意珍宝丸组,如意珍宝丸组按生药量1.8 g·kg^(-1)进行如意珍宝丸混悬液灌胃,空白组灌胃等体积纯水。灌胃1.5 h后取血浆与脑脊液,采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~15 min,97%~80%A;15~30 min,80%~60%A;30~40 min,60%~30%A;40~45 min,30%~5%A),电喷雾离子源(ESI),扫描范围m/z 100~1500,并结合文献和对照品的相应信息,分别完成在正、负离子模式下对样品进行入血与入脑成分的定性分析。结果:从如意珍宝丸80%甲醇溶液中鉴定出126种化合物,血浆中检测到14种原型成分,脑脊液中检测到7种原型成分,并分析了芹菜素、芹菜素-7-O葡萄糖醛酸苷、高良姜素、甘草苷、胡椒碱、甘草酸、丁香酚、没食子酸和胆酸的裂解规律。结论:该研究实现了如意珍宝丸中多类别体外化学成分、入血及入脑成分的快速表征与鉴定,为该品种药效物质基础与质量控制研究提供了参考。

缬苯那嗪类似物P109人肝微粒体中代谢产物鉴定及酶表型研究

化合物P109是缬苯那嗪结构类似物,其在9位进行了环丙烷甲基取代,具有与缬苯那嗪相似的药物活性与药理作用机制。为研究P109在人肝微粒体孵育体系中的代谢产物,采用Waters Eclipse Plus-C18色谱柱(150 mm×2.1 mm×3.5μm)分离,以0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,利用超高效液相色谱-高性能台式四极杆-轨道阱质谱(UHPLC-Q Exactive^(TM) Orbitrap MS)技术,在正离子模式下分析样品,筛选出9个化合物(包括P109及其8个代谢产物),并进行结构鉴定。结果表明,P109经人肝微粒体主要发生氧化、水解、脱环丙烷甲基的Ⅰ相代谢反应。代谢产物酶表型研究表明,P109的主要代谢酶亚型为CYP3A4和CYP2C8,次要代谢酶亚型为CYP2D6。本研究初步阐明了P109在人肝微粒体中的代谢规律及代谢产物酶表型,可为新药筛选、毒理学研究提供支持。

对氨甲苯酸注射液中特定杂质4-甲酰基苯甲酸的研究

目的研究氨甲苯酸注射液中的特定杂质。方法对样品进行有关物质检查,利用半制备柱从样品中制备杂质,建立UHPLC-Q Exactive Focus MS法对样品中的杂质进行结构鉴定,并以氨甲苯酸为参照物,采用斜率法计算杂质的相对校正因子。结果确定了特定杂质为4-甲酰基苯甲酸,且其在1.244~62.20 ng·mL^(-1)与峰面积线性关系良好,Y=1687X-330.5(r=1.000),相对校正因子为2.88,检测限和定量限分别为0.27 ng·mL^(-1)和1.07 ng·mL^(-1),重复性RSD为0.44%,稳定性RSD为0.50%,加样回收率在97.85%~102.6%(RSD=1.4%)。结论本文利用半制备柱从样品中制备杂质,建立了UHPLC-Q Exactive Focus MS方法对杂质结构进行鉴定及定量分析,进一步完善质量标准。

氨甲苯酸注射液日晒降解产物的研究

目的对氨甲苯酸注射液的日晒降解产物进行研究。方法考察日晒对氨甲苯酸注射液有关物质和pH值的影响,建立UHPLC-Q Exactive Focus MS法对样品中产生的杂质进行结构鉴定并进行毒性预测。结果日照10 d的氨甲苯酸注射液颜色变黄,采用UHPLC-Q Exactive Focus MS推测该杂质的结构为3-羟基-4-羟甲基苯甲酸,当样品中该杂质含量超过0.1%时溶液颜色变黄,对杂质的毒性预测显示,该杂质属遗传毒性5级。结论氨甲苯酸注射液在光和热同时作用下产生杂质3-羟基-4-羟甲基苯甲酸,同时4-甲酰基苯甲酸含量和其他杂质总量明显增加,提示氨甲苯酸注射液应采用棕色安瓿包装为宜,避免阳光直射。

基于UHPLC-Q/TOF-MS技术鉴定青钱柳叶在大鼠体内的入血成分及代谢产物

目的研究青钱柳叶在大鼠体内的入血成分及代谢产物。方法采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UHPLC-Q/TOF-MS)鉴定大鼠血清中的化学成分,通过比对青钱柳叶、空白血清和含药血清的图谱差异,解析青钱柳水提液经大鼠灌胃后血清中的原型成分和代谢产物。结果共鉴定得到15个入血成分,6个为原型成分,9个为原型成分的代谢产物。入血的原型成分主要为咖啡酰奎宁酸类、黄酮类和皂苷类,代谢途径主要有甲基化和羟基化。结论该研究表明入血的原型成分可能是青钱柳叶的有效成分,为阐明其药效物质基础提供了一定的依据。

秦岭岩白菜入血成分及其代谢产物的UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析

目的:研究秦岭岩白菜提取物在大鼠体内的入血原型成分及代谢产物。方法:采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)技术,通过比对秦岭岩白菜提取液、空白血清和含药血清的图谱差异,根据保留时间、相对分子质量,以及一级、二级离子碎片,解析秦岭岩白菜提取物经大鼠灌胃给药后血清中的原型成分和代谢产物,检测条件为流动相选择甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~40 min,5%~95%A;40~45 min,95%A),流速设定0.3 mL·min^(-1),进样量1μL,加热电喷雾离子源,检测范围m/z 80~1200,正、负离子扫描模式。结果:大鼠口服给药后,共在血清中检测到35个移行成分,其中6个为原型成分,29个为代谢产物。经鉴定6个原型成分分别为熊果苷、mallonanoside A、岩白菜素、ardimerin、水杨酸、鞣花酸,29个代谢产物主要是来自含有没食子酸、mallonanoside A、岩白菜素、儿茶素、鞣花酸等结构单元的化合物代谢物,其代谢途径主要为葡萄糖醛酸化、硫酸酯化、甲基化等,以Ⅱ相代谢为主。结论:入血成分及其代谢产物可能是秦岭岩白菜体内直接作用的药效成分,其中mallonanoside A、岩白菜素、鞣花酸在体内既可以原型成分入血,又可以经过Ⅱ相代谢发挥药效;而秦岭岩白菜药材中的其他大多数化学成分在体内可能主要是先通过水解等途径转化为没食子酸、岩白菜素、儿茶素等简单结构,再进一步发生Ⅱ相代谢。

秦岭岩白菜根茎化学成分的UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析

目的:采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)对秦岭岩白菜药材的化学成分进行快速识别和鉴定。方法:选择秦岭岩白菜的75%甲醇提取液作为供试品溶液,采用Thermo Accucore aQ RP18色谱柱(2.1 mm×150 mm,2.6μm),流动相甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~40 min,5%~95%A;40~45 min,95%A),流速0.3 mL·min-1,柱温30℃;质谱分析采用加热电喷雾离子源(HESI),正、负离子模式扫描,扫描范围m/z 80~1 200。结果:共鉴定出了66个成分,包括游离氨基酸2个、岩白菜素类7个、黄酮类15个、有机酸类15个、糖苷类25个及其他类2个。结论:该方法可系统、准确、快速地对秦岭岩白菜药材中化学成分进行定性分析,其中8个成分(琥珀酸、熊果苷、没食子酸、原儿茶酸、岩白菜素、儿茶素、绿原酸和咖啡酸)与对照品比对而准确鉴定,51个成分为首次在秦岭岩白菜中发现,28个成分为首次从岩白菜属植物中发现,可为秦岭岩白菜药效物质研究及质量评价提供重要依据。