基于GC-TOF-MS和UHPLC-QE-MS的苏合香化学成分分析

目的 基于GC-TOF-MS和UHPLC-QE-MS分析中药苏合香的化学成分。方法 挥发性成分分析采用Agilent DB-5MS毛细管色谱柱(30 m×250μm×0.25μm);程序升温,进样口温度280℃;柱流速1.0 mL·min^(-1);进样量1μL;分流比15:1;通过标准谱库检索并结合文献对主要色谱峰进行鉴定。可溶性成分分析采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1mm×100 mm,1.8μm);流动相为5.0 mmol·L^(-1)乙酸铵-5.0 mmol·L^(-1)乙酸和乙腈;梯度洗脱;NCE模式下碰撞能量;电喷雾离子源正负离子模式下对色谱流出物进行质谱检测,利用对照品、二级质谱信息及文献对各主要色谱峰进行归属。结果 苏合香提取物中共鉴定出25个挥发性成分和32个可溶性成分。结论 该方法准确稳定,重复性好,可用于苏合香的成分分析。

橘荔散结丸醇提物化学成分的UHPLC-QE-MS分析及其抗子宫肌瘤细胞的药效机制研究

【目的】运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UHPLC-QE-MS)技术分析橘荔散结丸醇提物的化学成分,并探讨其对子宫肌瘤细胞增殖的抑制作用及机制。【方法】(1)以UHPLC-QE-MS技术分析橘荔散结丸醇提物化学成分。(2)培养原代人子宫肌瘤细胞。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定不同浓度橘荔散结丸醇提物处理不同时间后的细胞增殖抑制率,并筛选后续实验中其2个高、低浓度。实验分为空白对照组,二甲基亚砜(DMSO)组,米非司酮组及橘荔散结丸醇提物高、低浓度组,分别给予相应处理后,采用流式细胞术检测细胞周期,Western Blot或定量聚合酶链反应(qPCR)法分别检测细胞Wnt/糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路关键蛋白Wnt 5b、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin、表皮生长因子受体(EGFR)和基质金属蛋白酶2(MMP2)的蛋白、mRNA表达水平。【结果】鉴别橘荔散结丸醇提物主要化学成分91个,橘荔散结丸醇提物冻干粉与中成药橘荔散结片主要化学成分共有22个。橘荔散结丸醇提物各浓度组细胞增殖抑制率均大于空白对照组(P<0.05);橘荔散结丸醇提物高、低浓度组及米非司酮组G0/G1期细胞数均大于空白对照组,而G2/M期细胞数小于空白对照组(P<0.05);橘荔散结丸醇提物高、低浓度组及米非司酮组Wnt 5b、β-catenin、EGFR、MMP2蛋白、mRNA表达水平均低于与空白对照组(均P<0.05),而GSK-3β蛋白及mRNA表达水平与空白对照组无显著性差异(P>0.05)。【结论】UHPLC-QE-MS技术分离橘荔散结丸醇提物化学成分众多,主要成分具有氧化应激调节作用;橘荔散结丸醇提物可有效抑制子宫肌瘤细胞增殖,其分子机制与抑制Wnt/GSK-3β/β-catenin信号通路关键蛋白表达,进而干预子宫肌瘤细胞微环境氧化应激反应有关。

基于UHPLC-QE-MS及网络药理学探讨固本化湿降脂汤调控肥胖大鼠进食机制

目的探讨固本化湿降脂汤(由参苓白术散化裁)对脾虚湿阻型单纯性肥胖大鼠进食机制的影响。方法采用超高效液相色谱-四级杆静电场轨道阱质谱(UHPLC-QE-MS)联用技术确定固本化湿降脂汤的入血成分;利用相关数据库查询入血成分的作用靶点;借助metascape数据库进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析及基因本体(GO)功能分析。建立脾虚湿阻型单纯性肥胖大鼠模型;模型复制成功后,连续灌胃给药4周,并观察大鼠体质量、Lee’s指数的变化;采用免疫印迹法检测大鼠下丘脑中阿黑皮素原(POMC)、刺鼠相关蛋白(AgRP)两个蛋白的表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清大鼠瘦素(Leptin,LEP)、大鼠脂肪素(Apelin)、大鼠脂联素(ADP)和大鼠游离脂肪酸(FFA)水平,以及炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)的表达。结果鉴定出31个固本化湿降脂汤的入血成分,获得591个预测靶点,核心靶点是IL6、EGFR、ESR1,涉及AGE-RAGE、HIF-1、乙型肝炎、细胞凋亡等信号通路。体内实验:与模型组比较,固本化湿降脂汤组大鼠下丘脑中POMC抑制食欲蛋白表达升高(P<0.001),AgRP促食欲蛋白表达降低(P<0.05);血清中ADP含量有所升高(P<0.01),LEP、Apelin、FFA含量不同程度降低(P<0.05,P<0.01);炎症因子含量都有所降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论固本化湿降脂汤可通过肠-脑轴来影响脾虚湿阻型单纯性肥胖大鼠进食机制,发挥其治疗作用。

基于UHPLC-QE-Orbitrap-MS技术的深加工槟榔籽的成分分析

本研究以槟榔深加工过程中产生的副产物槟榔籽为研究对象,采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道肼高分辨质谱法(UHPLC-QE-Orbitrap-MS)对槟榔籽的成分进行分析鉴定。采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温35℃,进样体积10μL,使用电喷雾离子源(ESI),扫描范围m/z为100~1200,Full MSddMS2检测模式,正负离子同时采集。利用Compound Discoverer 3.3软件对原始数据进行分析,通过本地数据库和mzCloud在线数据库对化合物进行结构鉴定。试验鉴定出85种存在于槟榔籽中的成分,分别为生物碱类化合物3种、黄酮类化合物24种、有机酸类化合物15种、酚类化合物7种、萜类化合物7种、氨基酸类化合物6种、糖类化合物4种、酯类化合物4种、酰胺类化合物2种、鞘脂类化合物2种、类固醇衍生物1种、苯丙素类化合物1种、香豆素类化合物1种、其它8种。UHPLC-QE-Orbitrap-MS检测技术可以对槟榔深加工副产物槟榔籽中的成分进行快速识别,本研究为槟榔资源进一步综合利用,开发高附加值产品提供科学依据。

基于UHPLC-QE-MS的橘荔散结丸诱导子宫肌瘤细胞凋亡的炎症机制

目的运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UHPLC-QE-MS)技术分析橘荔散结丸的药物成分,围绕核因子-κB(NF-κB)信号通路探讨橘荔散结丸诱导子宫肌瘤细胞凋亡的炎症机制。方法①采用UHPLC-QE-MS技术分析橘荔散结丸化学成分。②培养原代人子宫肌瘤细胞,免疫组化法进行鉴定。实验分为5组,空白组常规培养,基质组加入0.05%DMSO培养,米非司酮组加入1×10-5 mol/L米非司酮含药液培养,橘荔散结丸高、低浓度组分别加入2 mg/mL和1 mg/mL橘荔散结丸含药液培养。采用流式细胞术检测子宫肌瘤细胞凋亡率,采用Western blot法检测子宫肌瘤细胞中IKKα、IKBα、p-IKBα、p65、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达情况,采用qPCR技术检测子宫肌瘤细胞中IKKα、IKBα、p65、TNF-α、IL-6 mRNA表达量。结果鉴别橘荔散结丸主要化学成分91个,冻干粉与中成药间共有22个。米非司酮组和橘荔散结丸高、低浓度组子宫肌瘤细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均明显高于空白组和基质组(P均<0.05),且米非司酮组、橘荔散结丸高浓度组早期凋亡率和晚期凋亡率均明显高于橘荔散结丸低浓度组(P均<0.05),橘荔散结丸高浓度组早期凋亡率明显高于米非司酮组(P<0.05)。橘荔散结丸高浓度组和米非司酮组子宫肌瘤细胞中IKKα、p-IKBα、p65、TNF-α蛋白相对表达量均明显高于空白组和橘荔散结丸低浓度组(P均<0.05),且橘荔散结丸高浓度组和米非司酮组子宫肌瘤细胞中IL-6蛋白相对表达量均明显高于空白组(P均<0.05);橘荔散结丸高浓度组子宫肌瘤细胞中p-IKBα、p65、IL-6蛋白相对表达量均明显低于米非司酮组(P均<0.05)。米非司酮组、橘荔散结丸高浓度组、橘荔散结丸低浓度组子宫肌瘤细胞中IKKα、IKBα、p65、IL-6 mRNA相对表达量和米非司酮组、橘荔散结丸高浓度组TNF-αmRNA相对表达量均明显高于空白组(P均<0.05);橘荔散结丸高浓度组和米非司酮组IKBα、p65、IL-6 mRNA相对表达量均明显高于橘荔散结丸低浓度组(P均<0.05)。结论橘荔散结丸化学成分具有抗炎免疫调节作用,其治疗子宫肌瘤分子机制与干预肌瘤细胞微环境炎症反应密切相关。

基于UHPLC-QE-MS方法分析壮药旱田草化学成分

目的:采用UHPLC-QE-MS技术对壮药旱田草进行次生代谢产物分析,结合多元统计分析方法鉴定不同大类成分,并进行差异代谢物KEGG通路富集分析,为旱田草资源开发利用提供实验依据。方法:应用UHPLC-QE-MS技术对旱田草成分进行检测,鉴定成分,再进行差异代谢物KEGG通路富集分析。结果:旱田草共鉴定出15类368种次生代谢产物,其中黄酮类、酚酸类及生物碱类成分共90种化学成分。反式-邻羟基肉桂酸、7-羟基-6-甲基-2H-1-苯并吡喃-2-酮、2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-2,3-dihydrochromen-4-one为相对含量最高的3种黄酮类成分。368种代谢物被注释到KEGG通路中得到34条代谢通路,根据代谢物富集数量及-In P-value值大小,筛选了主要5条通路,分别为氨基酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,苯丙氨酸代谢,淀粉和蔗糖的代谢,类胡萝卜素生物合成。差异代谢物为10个,分别为L-色氨酸、3-羟基邻氨基苯甲酸、3-吲哚乙腈、苯乙胺、L-谷氨酰胺、γ-氨基丁酸、蔗糖、D-麦芽糖、番茄红素、叶黄素。结论:UHPLCQE-MS技术稳定可靠,可作为旱田草代谢产物检测手段。实验结果中得到的黄酮类、酚酸类及生物碱类是否为旱田草活性成分,需进一步实验研究。此外,筛选得到的5条代谢通路为挖掘旱田草活性成分积累提供了研究方向。

基于UHPLC-QE-MS代谢组学分析小粒种咖啡豆特征成分

以云南小粒咖啡生豆和埃塞俄比亚咖啡生豆为研究对象,采用超高效液相色谱串联质谱(UHPLC-QE-MS)对咖啡生豆代谢产物进行代谢组学分析,探究云南不同地区咖啡生豆代谢产物差异,以及与埃塞俄比亚咖啡生豆相比的特征成分。试验结果表明:云南小粒咖啡生豆与埃塞俄比亚生豆有36种差异物质,包括表儿茶素、3-O-咖啡酰-1-O-甲基奎宁酸等16种多酚,十八碳三烯酸等8种脂质类,牡荆甙等6种糖类以及少量生物碱类、有机酸类、萜类,其中Mammeigin、牡荆甙、3-O-咖啡酰-1-O-甲基奎宁酸、2,2-二甲基丁二酸、十八碳三烯酸等24种化合物含量高于埃塞俄比亚生豆,表儿茶素、决明子苷、脂氧素等12种化合物含量显著低于埃塞俄比亚生豆。不同地区云南小粒咖啡生豆的代谢组学分析结果显示:差异代谢物共有44种,包括谷氨酸、苯丙氨酸等14种氨基酸,棕榈酰胺、花生酸等11种脂质类,绿原酸、奎宁酸等10种多酚,苹果酸等3种有机酸以及少量萜类、糖类、醇类和其它类。以上结论:利用UHPLC-QE-MS技术并结合多元统计分析的方法,可分析不同区域条件下咖啡生豆代谢产物差异,为咖啡豆产地溯源提供方法依据。

基于UHPLC-QE-MS的CCI模型大鼠的血清代谢组学研究

采用超高效液相色谱-四级杆静电场轨道阱质谱(UHPLC-QE-MS)非靶向代谢组学方法,观察CCI模型大鼠血清内源性代谢物的变化,筛选出慢性坐骨神经痛大鼠血清差异性代谢物,分析慢性疼痛对差异性代谢物的影响。将12只SPF级SD雄性大鼠随机均分为正常组和坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)组,每组6只。CCI组建立大鼠左侧坐骨神经慢性压迫损伤模型,正常组除不结扎坐骨神经,其余步骤一样。14天后腹主动脉采血,分离血清,对大鼠血清中的代谢物进行代谢组学检测。利用UHPLC-QE-MS技术并结合PCA(主成分分析)筛选差异代谢物,利用MetabolicAnalyst5.0进行差异代谢物的富集分析。富集分析结果表明,与正常对照组相比,CCI模型大鼠血清有机酸、有机杂环化合物、脂肪酰基、碳水化合物、核酸、有机氮化合物、碳氢化合物等9类代谢物具有统计学差异。结果表明:基于UHPLC-QE-MS的血清代谢组学方法能够有效区分正常组和CCI组,筛选出的差异代谢物有助于慢性疼痛的机制及药物靶点研究。

基于UHPLC-QE-MS技术和网络药理学研究四妙散治疗膝骨关节的药效物质基础及作用机制

目的:分析并鉴定四妙散的化学成分和入血成分,预测其治疗膝骨关节炎(KOA)的药效物质基础和作用机制。方法:采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱质谱联用(UHPLC-QE-MS)技术鉴定四妙散的化学成分及入血成分。根据入血成分进行网络药理学分析,并对核心成分和关键靶点进行分子对接验证。结果:从四妙散水煎剂中共鉴定出354个化学成分。通过比较四妙散水煎剂、空白血清及含药血清样本数据,鉴定出21个入血成分,主要包括黄酮类、萜类、苯丙素类、生物碱类等成分。网络药理学结果表明,四妙散入血成分可能通过调节AKT1、ALB、TNF、EGFR、JUN、SRC、MAPK3等关键靶点,调控PI3K/AKT、Ras、TNF等信号通路发挥治疗KOA效应。分子对接结果显示,四妙散核心入血成分与关键靶点之间具有较好的结合活性。结论:四妙散中黄酮类等入血成分可能通过作用于AKT1等关键靶点,调控PI3K/AKT等关键通路进而发挥治疗KOA效应。

基于UHPLC-Q Exactive Orbitrap/MS结合多元统计方法分析不同基原淫羊藿化学成分的差异

目的:建立超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用(UHPLC-Q Exactive Orbitrap/MS)结合多元统计分析技术对5种不同基原淫羊藿化学成分差异分析的方法。方法:对5种基原30批淫羊藿样品的UHPLC-Q Exactive Orbitrap/MS全扫描数据进行多元统计分析。利用SIMCA软件进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)。结果:5种基原淫羊藿的化学成分具有差异性,根据相关参考文献及谱图信息,共鉴定出27种化学成分。所建立的OPLS-DA模型具有良好的数据描述能力和预测能力。柔毛淫羊藿化学成分具有显著性差异,而朝鲜淫羊藿与箭叶淫羊藿,淫羊藿与巫山淫羊藿之间的化学成分及含量具有相似性。经过筛选与分析,确定8种差异化学成分。结论:建立的方法可分析出5种基原淫羊藿化学成分的差异性,操作简便,方法准确,可为不同基原淫羊藿的质量控制及开发应用提供理论依据。

参仙升脉口服液化学成分的UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS快速分析

目的探究参仙升脉口服液的化学物质基础。方法利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)对参仙升脉口服液的化学成分进行整体、系统辨识。采用Thermo Accucore aQ C_(18)色谱柱(150 mm×2.1 mm,2.6μm),流动相0.1%甲酸水溶液(A)-甲醇(B)梯度洗脱,洗脱程序为0-13 min,5%-60%B;13-27 min,60%-95%B;27-30 min,95%B,流速0.3 mL·min^(-1),柱温30°C;质谱分析离子化方式为加热电喷雾离子化(H-ESI),扫描模式为正、负离子切换,扫描范围m/z 120-1800,碰撞能量30 eV、50 eV、70 eV。结果共鉴定出160个化学成分,包括29个黄酮类成分,24个有机酸类成分,21个生物碱类成分,19个萜类成分,15个苯丙素类成分,12个皂苷类成分和40个其他类成分;其中6个化学成分(芦丁、补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂酚)经对照品比对确认。结论该研究借助UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS技术实现了参仙升脉口服液化学成分准确、快速、系统的分析和鉴定,为其化学物质基础的阐明和质量控制提供了重要依据。

基于UHPLC-QE Plus-MS/MS法分析柴黄颗粒及柴胡中化学成分

目的 基于UHPLC-QE Plus-MS/MS方法分析柴黄颗粒以及柴胡的化学成分,明确其质量特征。方法 以5%氨甲醇溶液超声提取,采用Luna Omega色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.6μm),以乙腈-0.1%甲酸溶液进行梯度洗脱,体积流量0.3m L/min。电喷雾离子源(ESI),负离子模式下采集。根据精确相对分子质量以及二级离子碎片信息,结合相对保留时间,通过查阅文献以及和对照品比对,进行成分指认。结果 鉴定出柴胡药材中化合物50个;柴黄颗粒中71个化合物,其中36个峰归属于黄芩,33个归属于柴胡。结论 建立的方法能快速、准确分析柴黄颗粒和柴胡化学成分,归纳各主要成分裂解规律,并通过与两者成分比较,发现柴胡配伍前后化学成分的变化,提示柴黄颗粒及柴胡中的质控成分。

采用UHPLC-QExactive轨道肼高分辨质谱快速识别脑震宁颗粒的化学成分

脑震宁颗粒是由11味中药组成的复方制剂,临床主要用于治疗脑震荡、脑外伤综合征等。针对其复杂的物质组成,本研究采用UHPLC-Q Exactive轨道肼高分辨质谱建立了脑震宁颗粒化学成分的快速识别方法,通过分析色谱保留行为、精确分子质量、裂解碎片信息,结合文献及对照品数据对照,并借助Compound Discover2.0自动指认,共鉴定出脑震宁颗粒中161个化合物,并对这些成分的来源进行了归属。所鉴定的成分包括环烯醚萜苷类9个、丁基苯酞类8个、黄酮及黄酮苷类26个、酚酸类8个、单萜苷类8个、生物碱类9个,以及有机酸、氨基酸、糖类等中药材共性成分。本研究首次对脑震宁颗粒的化学组成进行了全面表征,所构建的脑震宁化学成分物质组为其进一步的质量控制和药效物质基础研究奠定了基础。

基于UHPLC-QE-MS的银星养脑片治疗血管痴呆性大鼠的血清代谢组学研究

目的:基于超高效液相色谱-质谱联用(UHPLC-QE-MS)技术探讨银星养脑片对血管痴呆性大鼠血清中内源性标志物的影响,并初步探讨其发挥药效的作用通路。方法:采用双侧颈总动脉结扎法诱导血管性痴呆模型,将SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、吡拉西坦片0.4 g/kg组、银星养脑片0.27 g/kg组,每组10只。经双侧颈总动脉结扎后14 d开始给药,连续给药14 d,给药结束后立即进行水迷宫测试并将动物脑组织进行HE染色,应用UHPLC-QE-MS技术进行血清样品的分离和数据采集,采用主成分分析法(PCA)和正交偏最小二乘判别分析法(OPLS-DA)筛选出相关差异代谢物,并对已经鉴定的代谢标志物使用KEGG数据库进行可能的代谢通路分析。结果:水迷宫结果显示,与正常对照组相比,模型对照组动物出现明显认知功能障碍;HE染色证明模型对照组大鼠海马CA1区神经元出现病理性损伤,银星养脑片0.27 g/kg组有一定的改善;PCA结果显示,正常对照组、模型对照组和银星养脑片组大鼠血清代谢物发生了明显的变化;通过OPLS-DA分析最终确定在3个组中的40个显著差异代谢物;通路分析显示,主要与支链氨基酸生物合成代谢途径有关。结论:银星养脑片对血管性痴呆大鼠的治疗作用可能与支链氨基酸合成代谢有关。

UHPLC-Q Exactive高分辨质谱联用法分析淫羊藿中的化学成分

目的采用UHPLC-Q Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术鉴定分析淫羊藿药材成分。方法采用Thermo Hypersil GLOD C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱,体积分数0.1%甲酸水溶液-乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为40℃,电喷雾正、负离子模式扫描。结果共分析和鉴定出79个化合物,包括黄酮类、生物碱类、有机酸类和木脂素类化合物,其中16个化合物经与对照品比对鉴定。鉴定的黄酮类包括46个异戊烯基黄酮醇类化合物,异戊烯基黄酮醇类负离子模式二级特征碎片为m/z 367、351、513、353和323。初步鉴定化合物41、54、76、65和69为新的异戊烯基黄酮。结论淫羊藿中异戊烯基黄酮醇类多具有淫羊藿素或8-异戊烯基山奈酚苷元母核结构,该结果为淫羊藿成分的系统分析提供了数据支持。

北苍术与朝鲜苍术健脾作用及机制研究

目的 分析北苍术与朝鲜苍术干预后,脾虚大鼠血浆生物标志物及代谢通路的差异,从非靶向代谢组学的角度讨论两者的健脾机制。方法 将SD大鼠采用饮食不节、疲劳过度加苦寒泻下的复合因素法,造成脾虚症模型。测定胃肠道和免疫学指标的水平;采用超高效液相色谱串联Q Exactive质谱仪(UHPLC-QE-MS)技术,联合主成分分析(PCA)与正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)方法,寻找脾虚大鼠血浆中生物标志物;利用Pathway数据库归纳代谢通路。结果 经北苍术与朝鲜苍术给药后,脾虚大鼠血浆中各指标均有不同程度回调。代谢组学分析表明,北苍术与朝鲜苍术分别回调了70个和82个血浆差异代谢物,北苍术主要调节“甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢”与“硫胺素代谢”2个代谢通路,朝鲜苍术主要调节“甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢”、“硫胺素代谢”、“嘧啶代谢”、“丁酸代谢”与“核黄素代谢”5个代谢通路。结论 北苍术与朝鲜苍术对脾虚大鼠均具有一定的调节作用,其作用机制可能与调节“甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢”、“硫胺素代谢”等代谢通路有关。

基于UPLC-QE Plus-MS/MS技术的广东紫珠化学成分分析及其神经保护活性

分析广东紫珠(Callicarpa kwangtungensis,CK)的化学成分并探讨其对神经细胞的保护作用。本研究采用超高效液相色谱串联四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-QE Plus-MS/MS)对CK的化学成分进行鉴定。通过建立体外神经炎症模型,检测一氧化氮(nitric oxide,NO)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)炎症因子含量,结合细胞流式术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,并使用免疫荧光观察细胞形态变化,以评估CK的神经保护作用。在CK中共鉴定出108个化学成分,包括34个苯乙醇苷类、10个苯丙素类、25个黄酮类、23个萜类、10个有机酸类、2个有机醛类和4个其他类化合物,其中21个成分为首次鉴定。体外实验结果表明,CK能够抑制脂多糖诱导的BV2细胞NO、IL-1β、IL-6和ROS的表达水平,并能够逆转BV2细胞的活化状态。本研究通过UPLC-QE Plus-MS/MS实现对CK化学成分进行快速分析,并探讨了其神经保护活性,为后续的药效物质基础研究和新药开发提供了重要的理论依据。

基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱对天然牛黄和体外培育牛黄胆汁酸类成分的差异性分析

采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-QE-Orbitrap MS)对天然牛黄和体外培育牛黄共18批样品进行分析,使用Compound Discoverer软件对胆汁酸类成分进行鉴定,结合化学统计学分析筛选不同类型牛黄的差异性成分。根据一级质谱精确质荷比和二级化合物碎片信息,鉴定了30个共有的胆汁酸类成分。聚类分析结果表明体外培育牛黄与产地呈现一致趋势,而天然牛黄的聚类趋势与产地无关。主成分分析载荷图显示胆酸、去氧胆酸等成分对主成分1的贡献较大,而甘氨鹅去氧胆酸、甘氨去氧胆酸、牛磺去氧胆酸等成分对主成分2的贡献较大。通过建立正交偏最小二乘法判别(OPLS-DA)模型,共筛选出11个胆汁酸类差异成分(VIP>1,P<0.05),其中胆酸在两组之间的含量差异最大。除了去氢胆酸和甘氨去氢胆酸,其余9个差异成分在体外培育牛黄中的相对含量均较高。研究结果可为天然牛黄和体外培育牛黄的物质基础、质量控制和资源开发应用提供理论参考。

多花黄精对少弱精子症大鼠生精细胞凋亡的保护作用及药效物质基础研究

目的阐明多花黄精对少弱精子症大鼠模型生精细胞凋亡的保护作用及药效物质基础。方法采用UHPLC-Q Exactive Focus HRMS技术鉴定多花黄精化学成分,及其提取物灌胃给予大鼠后在血清和睾丸组织中的化学成分。设置空白组、模型组、阳性药组(左卡尼汀300 mg/kg)及多花黄精高、中、低剂量组(10、5和2.5 g/kg),考察其改善少弱精子症的药理作用,每组6只大鼠。通过HE染色观察大鼠睾丸组织病理形态,TUNEL染色观察大鼠睾丸生精细胞的凋亡情况,免疫荧光法检测DNMT3A和PIWIL1蛋白表达。结果从多花黄精提取物、大鼠血清、大鼠睾丸中分别鉴定出138种、23种、30种化学成分。模型组大鼠睾丸曲细精管中大量生精细胞凋亡,DNMT3A和PIWIL1蛋白低表达,而多花黄精高、中剂量组大鼠睾丸曲细精管中TUNEL阳性生精细胞数量减少,DNMT3A和PIWIL1蛋白表达显著升高。结论多花黄精对少弱精子症大鼠具有保护作用,其可能是通过上调大鼠睾丸中DNMT3A和PIWIL1的表达,逆转生精细胞的凋亡。

超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱法快速筛查减肥食品中非法添加物

本研究建立了超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱(UHPLC-Q/Orbitrap MS)法快速筛查减肥类食品中非法添加的化学药物。采用乙腈超声提取样品,使用UHPLC-Q/Orbitrap MS采集数据,以青梅和果冻为基质,外标法定量分析。基于7种自建的减肥类食品非法添加物数据库,在青梅中检出1种未知添加物。通过分析未知添加物的分子离子峰、二级质谱碎片离子信息及同位素信息,结合密度泛函理论,并经过标准品验证,确认其为新型非法添加物4-氯双醋酚丁。通过优化样品提取溶剂和流动相溶液,考察了8种非法添加物的检出限、定量限、线性范围、回收率、相对标准偏差和基质效应。结果表明,脱乙酰比沙可啶和比沙可啶的检出限为0.001 mg/kg、定量限为0.005 mg/kg,其余6种化合物的检出限为0.05 mg/kg、定量限为0.1 mg/kg,线性相关系数(R^(2))不低于0.999,所有化合物均表现为中等和弱基质效应,回收率为71.02%~103.01%,相对标准偏差为0.87%~13.24%。将该方法应用于减肥类食品青梅和果冻的快速筛查中,30%青梅检出4-氯双醋酚丁。本方法适用于减肥类食品中非法添加物的快速定性、定量分析,可在潜在风险物识别方面发挥作用。