基于UHPLC-QqQ-MS的四逆散水提液中16种主要化学成分的定量研究

目的建立同时测定四逆散水提液中16种化学成分含量的方法。方法应用UHPLC-QqQ-MS技术,采用负离子模式进行扫描,以MRM配对离子方式进行定量。结果柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D、橙皮素、儿茶素、甘草苷、甘草酸、甘草素、绿原酸、没食子酸、芍药苷、芍药内酯苷、异甘草素、异绿原酸A、橙皮苷在负离子模式下响应良好。结论本实验所建立的同时测定四逆散水提液中16种化学成分含量的分析方法专属性强、快速、灵敏且准确可靠,在完成含量测定的同时又可以准确给出化合物质量数信息,从而达到成分鉴别的效果,该方法可以为四逆散水提液的全面质量控制提供技术支持。

不同来源蜈蚣核苷类成分的UHPLC-QQQ MS分析与评价

目的:建立蜈蚣中核苷类成分的UHPLC-QQQ MS检测方法,并对结果进行分析与评价。方法:采用UHPLC-QQQ MS法同时测定4个省份(安徽、江苏、浙江、湖北)33批蜈蚣样品中的23个核苷类成分,并对结果进行主成分分析(PCA)。结果:蜈蚣中含有丰富的核苷类成分,不同样品核苷类成分含量差异较大,次黄嘌呤的平均含量最高,2′-脱氧腺苷的平均含量最低,S25号样品的核苷总含量最高,S32号样品的核苷总含量最低。PCA结果显示33批蜈蚣样品聚为4类,相同省份蜈蚣样品品质接近,不同省份蜈蚣品质存在差异,提示地域生态环境与蜈蚣品质差异密切相关。综合评价结果显示安徽蜈蚣得分较高,故从核苷类成分角度考虑,安徽蜈蚣的品质较好。结论:该研究建立的蜈蚣中核苷类成分的分析与评价方法可为蜈蚣的质量评价和基础研究提供参考。

基于UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS、GC-MS和UHPLC-QQQ-MS/MS技术的散寒化湿方化学成分轮廓分析

该研究采用定性定量质谱技术全面分析散寒化湿方药效成分,为阐明其药效物质基础奠定依据。采用UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS与GC-MS技术分析鉴定了散寒化湿方中挥发性和非挥发性成分;采用UHPLC-QQQ-MS/MS技术同时测定散寒化湿方27个主要药效成分的含量。结果显示从散寒化湿方中分析鉴定了308个主要化学成分,其中60个化合物经对照品比对,主要包括生物碱类、黄酮类、香豆素类、三萜皂苷类、氨基酸类和核苷类等。GC-MS技术初步鉴定了52个挥发性化合物,其中γ-桉叶醇、β-桉叶醇为主要成分。液质定量结果表明,27个活性成分线性关系良好(r>0.99),所建立的方法稳定,操作简单,结果可靠,其中苦杏仁苷、紫花前胡苷、槟榔碱、麻黄碱和伪麻黄碱含量较高,可能是发挥作用的主要药效物质。综上所述,该研究系统、全面地表征了散寒化湿方药味所含主要化成分及模式,为散寒化湿方的药效机制及临床应用提供依据。

UHPLC-QqQ-MS测定蒲地蓝消炎口服液中12种成分的含量

目的:建立超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法同时测定蒲地蓝消炎口服液中汉黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩素、白杨素、木犀草素、咖啡酸、乙酰紫堇灵、紫堇灵、原阿片碱、水杨酸、尿嘧啶、腺苷的含量测定方法。方法:采用Agilent Extend C18色谱柱(3. 0 mm×150 mm,3. 5μm);流动相甲醇-水(0. 1%甲酸),梯度洗脱;流速0. 3 m L·min-1。采用三重四极杆质谱检测器,电喷雾离子化源(ESI),动态多反应监测(DMRM)模式,正、负离子交替模式检测。结果:12种对照品峰型良好具有良好专属性,汉黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩素、白杨素、木犀草素、咖啡酸、乙酰紫堇灵、紫堇灵、原阿片碱、水杨酸、尿嘧啶、腺苷分别在0. 062 24~16. 24,33. 95~530. 4,0. 013 64~3. 558,0. 001 157~0. 302 4,0. 001 199~0. 313 0,0. 014 64~3. 821,0. 000 739 5~0. 038 59,0. 060 83~3. 174,0. 002 443~0. 637 4,0. 021 80~1. 138,0. 022 99~6. 000,0. 006 046~1. 578μg·L-1线性关系良好,精密度、稳定性、重复性良好。汉黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩素、白杨素、木犀草素、咖啡酸、乙酰紫堇灵、紫堇灵、原阿片碱、水杨酸、尿嘧啶、腺苷平均加样回收率分别为98. 9%,100. 2%,106. 9%,100. 8%,101. 7%,99. 3%,94. 6%,100. 0%,100. 5%,103. 4%,96. 8%,98. 1%。结论:该方法样品处理简便,专属性强,灵敏度高,检测结果可靠,为蒲地蓝消炎口服液的质量提升奠定了基础。

基于UHPLC-QqQ-MS对蟾衣中游离氨基酸与总氨基酸的分析

为探究蟾衣的营养和药用价值,采用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱(UHPLC-QqQ-MS)技术,分析蟾衣中游离氨基酸和总氨基酸的组成及含量。实验结果显示,在蟾衣样品中分析出的游离氨基酸有11种:天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、γ-氨基丁酸、酪氨酸、苏氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸;总氨基酸有18种:精氨酸、胱氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、γ-氨基丁酸、酪氨酸、脯氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸;并检出了17种氨基酸的含量:谷氨酸含量最高,其次是天冬氨酸,组氨酸和胱氨酸含量较低。此外,本研究建立的UHPLC-QqQ-MS技术用于测定上述游离氨基酸和总氨基酸专属性好,灵敏度高,可检测较低质量浓度的氨基酸。蟾衣的氨基酸种类丰富,药用氨基酸种类齐全,具有重要的营养价值和药用价值。实验结果可为深入研究蟾衣药材的资源开发利用提供基础资料。

基于含量测定与药效活性相结合的川楝子质量评价

目的分析比较不同批次川楝子代表性成分川楝素、异川楝素含量及颜色值,分析比较不同批次川楝子提取物对TRAIL诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的增效作用和对非小细胞肺癌细胞膜死亡受体DR5表达的影响,二者相结合共同评价川楝子的质量。方法采用UHPLC-QqQ-MS/MS对其所含川楝素、异川楝素进行含量测定,色谱柱为Poroshell 120 SB C18柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈,流速为0.3 mL/min,进样量为1μL,柱温为35℃;同时采用分光测色仪测定川楝子饮片的颜色值。采用流式细胞仪检测非小细胞肺癌A549细胞凋亡率与细胞膜死亡受体DR5的表达。结果10批川楝子中川楝素、异川楝素的含量分别为1.024~4.128,0.010~0.045 mg/g;平均颜色值(L*,a*,b*)为68.56,5.27,25.12。10批川楝子均能显著增加非小细胞肺癌细胞膜死亡受体DR5表达,增强TRAIL诱导非小细胞肺癌细胞凋亡。结论建立川楝子饮片的含量测定与颜色检测方法,结合细胞药效活性,可准确用于川楝子的质量控制。

黄烷-3-醇类化合物及其代谢产物的靶向定量方法研究

黄烷-3-醇类化合物作为重要的膳食多酚,其生物利用度不仅局限于母体化合物,更重要的是其经过体内肠道微生物代谢后的产物。为了明确体内代谢情况及代谢产物对生物利用度的贡献,本研究探究了黄烷-3-醇类化合物及其代谢产物的靶向定量分析方法。根据各化合物子离子响应值的差异,确定其在混合标准溶液中适合的浓度,并建立了超高效液相色谱-三重四极杆-串联质谱(UHPLC-QQQ-MS)定量分析方法,在15 min分析时间内所有化合物的分离度良好,并有适宜的响应值。方法学验证结果表明,定量化合物具有良好的线性关系;并以尿液、粪便和血浆为研究材料考察方法的稳定性,日内和日间精密度RSD值均在15%以下,基质效应介于±20%之间,回收率在70%~120%之间。该方法快速、灵敏、准确、稳定,可用于黄烷-3-醇类化合物在体内的靶向定量研究。

基于非靶标筛查的超高效液相色谱-三重四极杆质谱法检测尿液样品中的酰基肉碱

建立了一种基于母离子扫描模式的超高效液相色谱-三重四极杆质谱检测尿液中酰基肉碱的分析方法。对酰基肉碱类化合物所共有的m/z为60、85和144的碎片离子进行选择性检测,结合化合物母离子扫描的结果及其对应的保留时间,选取一致性较好的化合物进行筛选,再利用高分辨质谱确认,最终检测到37种酰基肉碱化合物,其中有14种尚未被HMDB和LIPID MAPS数据库收录。该方法可应用于其他生物样本(如血液、组织)中酰基肉碱的定性、定量分析,可作为检测酰基肉碱化合物的新选择。

UHPLC MS-QQQ同时测定红景天中4种有效活性成分研究

目的:红景天为高海拔地区珍贵天然中药材,其活性成分具有显著提高适应性、抗疲劳等功效。为实现对红景天药材质量快速鉴别,建立红景天中多种有效成分定量分析方法。方法:利用UHPLCMS-QQQ负离子检测模式建立了同时测定红景天中红景天苷、酪醇、没食子酸和鞣花酸的分析方法。结果:色谱条件柱温40℃;流动相:水-甲醇。质谱条件电喷雾离子化源(ESI);负离子多反应监测模式(MRM);定量碎片离子:红景天苷299→59、酪醇137→92.8、没食子酸300.9→145.1、鞣花酸169.2→78.9。结论:首次利用UHPLCMS-QQQ负离子模式进行红景天苷、酪醇、没食子酸和鞣花酸含量测定。

超高效液相色谱-三重四级杆质谱法用于阿胶糕类食品中阿胶的鉴别及马、牛、羊、猪皮源成分的检测

目的:建立以特征肽为检测指标的阿胶糕中阿胶的鉴别方法与马皮、牛皮、羊皮、猪皮源成分的检测方法。方法:采用三氯乙酸沉淀法提取阿胶糕中的蛋白质,胰蛋白酶进行酶解处理,利用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法(UHPLCQQQ MS),电喷雾离子源(ESI),正离子模式下扫描,采用多重反应监测模式,对特征肽目标离子进行检测。结果:经验证,鉴别方法和检查方法均均有良好的专属性,灵敏度高。市售样品测定结果显示,部分样品中检出阿胶成分,有的样品中检出牛皮源成分,有的样品中未检出任何皮源性成分。结论:所建立方法操作简便,专属性强,可用于阿胶糕中阿胶的鉴别和掺假杂皮胶的检测。

六种柚果实不同部位次生代谢产物的靶向筛查及其差异研究

通过采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法对6种柚果实黄皮层、白皮层和果肉3个部位的酚酸、类黄酮和香豆素类物质进行靶向筛查和定量分析,测定出样品中8种酚酸、20种类黄酮和11种香豆素的含量,鉴定出文旦柚、通贤柚、虎蜜柚和强德勒红心柚果实中之前未被报道的5-羟基-7,8,4′-三甲氧基黄酮,并对数据进行了多角度分析和差异性研究。结果表明:6种柚果实的3个测定部位中均能检出8种酚酸和20种类黄酮化合物,其中包括川陈皮素、橘皮素、甜橙黄酮和5-羟基-7,8,4′-三甲氧基黄酮4种多甲氧基黄酮。黄皮层和白皮层的酚酸含量以p-香豆酸、阿魏酸为主,果肉则以芥子酸和阿魏酸为主,且黄皮层所测酚酸总量高于白皮层和果肉。3个部位的类黄酮含量均以柚皮苷最高,且白皮层中的类黄酮含量远高于黄皮层和果肉。6种柚果实的黄皮层均能检测出11种香豆素,白皮层中能检测出8种,二者均以异欧前胡素和异橙皮内酯为主;果肉中只检出7种香豆素,以香柑醇和6′,7′-环氧香柠檬亭为主。就柚品种而言,酚酸总含量最高的为通贤柚;香豆素总含量最高的为文旦柚;而类黄酮总含量最高的为琯溪蜜柚,文旦柚次之。本研究证实了柚果实中富含的生物活性成分以及白皮层、黄皮层和果肉中活性成分之间的差异性,研究结果对柚果实的加工利用及柚产业发展具有借鉴意义。

超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪检测动物源性食品中氟虫腈及其代谢物

[目的]使用QuEChERS-EMR-Lipid前处理,超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪建立动物源性食品中氟虫腈及其代谢物的检测方法。[方法]优化后的前处理条件:以乙腈作为萃取溶剂,摇匀后,旋涡振荡1min,以10000r/min常温离心3min,取5mL上清液倒入已活化好的EMR-LipiddSPE增强型脂质去除净化管并放入陶瓷颗粒,剧烈振荡3min,以10000r/min常温离心3min;上清液全部转移至EMR-LipidPolish反萃取管中加入陶瓷颗粒并立即剧烈振荡,超声至管内粉末全部溶解,以10000r/min常温离心3min,吸200μL到样品瓶中用超纯水定容到1mL,旋涡振荡后上机检测。色谱条件:色谱柱为Poroshell120EC-C18,流动相为甲醇-水,在4.6min内4种组分分离良好。质谱条件:喷射流电喷雾离子源(AJSESI);负离子模式同时扫描;多反应监测(MRM)采集方式。[结果]氟虫腈及其代谢物在0.1~20.0ng/g均具有良好的线性关系,相关系数≥0.999,平均加标回收率为94.9%~113.0%,相对标准偏差为1.9%~4.9%,方法检出限为0.010~0.023ng/g。[结论]超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪适用于动物源性食物中氟虫腈及其代谢物的快速检测。

基于UHPLC-ESI-QQQ-MS/MS技术对复方景川片中多药效成分的质量控制研究

目的:探讨分析复方景川片多药效成分质量控制的有效方法。方法:采用基于UHPLC-ESI-QQQ-MS/MS技术的方法对复方景川片进行梯度洗脱,采用正负离子多反应监测模式对药物成分的特定离子进行监测,测定复方景川片中的药物成分含量。结果:UHPLC-ESI-QQQ-MS/MS技术用于复方景川片中的药物成分进行分析在15 min内即可得出结果,药物中的峰面积与质量浓度有良好的线性关系。结论:采用UHPLC-ESI-QQQ-MS/MS技术可快速的对景川片中的药物成分进行分析,对质量的控制有一定的帮助。

UPLC-QQQ-MS法同时测定产后逐瘀胶囊中10个成分的含量

目的建立同时测定产后逐瘀胶囊中10个成分含量的方法。方法采用Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)、流动相0.1%甲酸水-乙腈进行梯度洗脱,流速0.35 mL·min^(-1),柱温40℃;质谱为电喷雾离子源(ESI)、正负离子扫描的多反应监测模式(MRM)。结果益母草碱、水苏碱、咖啡酸、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、6-姜辣素、洋川芎内酯A、藁本内酯和6-姜烯酚分别在22.56~1443.75、33.50~8575.00、7.13~456.25、10.94~700.00、14.06~450.00、12.89~412.50、10.06~643.75、15.53~993.75、17.38~1112.50和18.46~590.63 ng·mL^(-1)质量浓度范围内线性关系良好;精密度、重复性和稳定性RSD均小于5.91%;加样回收率在80.66%~108.37%,RSD在1.74%~5.98%。12批胶囊中益母草碱、水苏碱、咖啡酸、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、6-姜辣素、洋川芎内酯A、藁本内酯和6-姜烯酚的含量分别在386.96~707.49、3988.18~8083.22、85.48~226.35、239.04~578.10、87.20~325.09、46.66~227.09、59.93~184.20、417.62~1039.34、573.74~1196.23和27.73~107.22μg·g^(-1)范围内。结论该方法准确、灵敏、可靠,可为产后逐瘀胶囊的质量控制提供一定参考。

杜仲盐炙前后主要活性成分在肾纤维化大鼠体内的药代动力学研究

建立杜仲生、盐炙品提取物中6种主要活性成分(桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷酸、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷和松脂醇单葡萄糖苷)在腺嘌呤致肾纤维化模型大鼠血浆中的定量分析方法,并对比研究其体内药代动力学行为。应用UHPLC-Qq Q-MS/MS技术,采用负离子模式进行扫描,以MRM配对离子方式进行定量,同时对其专属性、线性范围、准确度、精密度、稳定性、提取回收率及基质效应进行考察,方法学考察结果均符合生物样本的分析要求。成功建立了一种可同时测定杜仲生、盐炙品提取物中6种活性成分在大鼠血浆中快速、灵敏、准确的定量分析方法,并对肾纤维化大鼠单次给予杜仲生、盐炙品提取物后不同时间点各成分的血药浓度进行检测,计算各成分的药代动力学参数并构建药-时曲线。本实验获得南京中医药大学实验动物伦理委员会批准(批准号:202103A008)。结果表明,与杜仲生品组相比,杜仲盐炙品组大鼠血浆中桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷和松脂醇单葡萄糖苷等化合物的tmax值均显著小于生品组(P<0.05,P<0.01);绿原酸的Cmax、AUC0-48 h,松脂醇二葡萄糖苷的Cmax、AUC0-48 h和AUC0-∞,京尼平苷以及松脂醇单葡萄糖苷的Cmax均显著高于生品组(P<0.05,P<0.01)。研究发现,相较于杜仲生品,多种活性成分在杜仲盐炙品的给药环境下可发挥速效作用,有更高的血药浓度峰值与生物利用度,进一步验证了“入盐走肾脏”的中医理论,为杜仲生品及其盐炙品质控指标的选择、炮制机制的阐明和体内代谢规律的深入研究提供了实验参考依据。