Simultaneous determination of typical toxic aldehydes formed during food frying and digestion using isotope dilution UHPLC-QqQ-MS/MS

An isotope dilution ultra-performance liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry method was developed to simultaneously detect two typical kinds ofα,β-unsaturated aldehydes,namely 4-hydroxy-2-hexenal(4-HHE)and 4-hydroxy-2-nonenal(4-HNE),in foods.The proposed method exhibited a linear range of 10-1000 ng/mL with a limit of detection of 0.1-2.0 ng/g and a limit of quantification of 0.3-5.0 ng/g.The recovery rates of these typical toxic aldehydes(i.e.,4-HHE,4-HNE)and their d3-labeled analogues were 91.54%-105.12%with a low matrix effect.Furthermore,this proposed method was successfully applied to a real frying system and a simulated digestion system,wherein the contents of 4-HHE and 4-HNE were determined for both.Overall,the obtained results provide strong support for further research into the production of 4-HHE and 4-HNE resulting from foods during oil digestion and frying.

基于UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS、GC-MS和UHPLC-QQQ-MS/MS技术的散寒化湿方化学成分轮廓分析

该研究采用定性定量质谱技术全面分析散寒化湿方药效成分,为阐明其药效物质基础奠定依据。采用UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS与GC-MS技术分析鉴定了散寒化湿方中挥发性和非挥发性成分;采用UHPLC-QQQ-MS/MS技术同时测定散寒化湿方27个主要药效成分的含量。结果显示从散寒化湿方中分析鉴定了308个主要化学成分,其中60个化合物经对照品比对,主要包括生物碱类、黄酮类、香豆素类、三萜皂苷类、氨基酸类和核苷类等。GC-MS技术初步鉴定了52个挥发性化合物,其中γ-桉叶醇、β-桉叶醇为主要成分。液质定量结果表明,27个活性成分线性关系良好(r>0.99),所建立的方法稳定,操作简单,结果可靠,其中苦杏仁苷、紫花前胡苷、槟榔碱、麻黄碱和伪麻黄碱含量较高,可能是发挥作用的主要药效物质。综上所述,该研究系统、全面地表征了散寒化湿方药味所含主要化成分及模式,为散寒化湿方的药效机制及临床应用提供依据。

基于UHPLC-QqQ-MS的四逆散水提液中16种主要化学成分的定量研究

目的建立同时测定四逆散水提液中16种化学成分含量的方法。方法应用UHPLC-QqQ-MS技术,采用负离子模式进行扫描,以MRM配对离子方式进行定量。结果柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D、橙皮素、儿茶素、甘草苷、甘草酸、甘草素、绿原酸、没食子酸、芍药苷、芍药内酯苷、异甘草素、异绿原酸A、橙皮苷在负离子模式下响应良好。结论本实验所建立的同时测定四逆散水提液中16种化学成分含量的分析方法专属性强、快速、灵敏且准确可靠,在完成含量测定的同时又可以准确给出化合物质量数信息,从而达到成分鉴别的效果,该方法可以为四逆散水提液的全面质量控制提供技术支持。

基于UHPLC-QqQ-MS和网络药理学的二冬汤潜在活性成分含量测定及作用机制分析

目的:建立二冬汤中活性成分含量测定的超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱法(UHPLC-Qq Q-MS),并对该方进行抗胰岛素抵抗作用靶点和通路的预测。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~3 min,90%~87%A;3~6 min,87%~86%A;6~9 min,86%~83%A;9~11 min,83%~75%A;11~18 min,75%~70%A;18~19 min,70%~52%A;19~22 min,52%A;22~25 min,52%~5%A;25~27 min,5%~90%A;27~30 min,90%A);利用电喷雾离子源(ESI),多反应监测(MRM)模式,正、负离子模式检测其含量。在此基础上,运用网络药理学方法预测二冬汤发挥抗胰岛素抵抗作用的靶点和通路。结果:二冬汤中20个活性成分在一定质量浓度范围内线性关系良好,精密度、稳定性、重复性及加样回收率良好。含量测定结果显示,15批样品中高质量浓度的成分为黄芩素(1259.39~1635.78 mg·L^(-1))、黄芩苷(1078.37~1411.52 mg·L^(-1));中质量浓度的成分为知母皂苷BⅡ(245.10~604.89 mg·L^(-1))、芒果苷(148.59~217.04 mg·L^(-1))、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷(89.30~423.26 mg·L^(-1))、芦丁(46.91~1553.61 mg·L^(-1))、甘草酸(55.97~391.47 mg·L^(-1))、新芒果苷(37.45~127.03 mg·L^(-1))、荷叶碱(0.89~63.48 mg·L^(-1))、金丝桃苷(6.96~136.78 mg·L^(-1))、甘草苷(30.89~122.78 mg·L^(-1))、甘草素(26.64~110.67 mg·L^(-1))、原薯蓣皂苷(58.57~284.26 mg·L^(-1));低质量浓度的成分为伪原薯蓣皂苷(5.49~22.96 mg·L^(-1))、汉黄芩素(7.16~20.74 mg·L^(-1))、人参皂苷Rb1(7.31~23.87 mg·L^(-1))、人参皂苷Rg1(10.78~28.33 mg·L^(-1))、甲基麦冬黄烷酮A(0.74~1.67 mg·L^(-1))、人参皂苷Re(7.78~24.76 mg·L^(-1))、麦冬皂苷D(2.08~4.29 mg·L^(-1))。网络药理学结果表明,二冬汤发挥抗胰岛素抵抗作用机制可能与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路有关。结论:建立的UHPLC-Qq Q-MS可为二冬汤复方制剂的开发奠定基础。网络药理学研究结果可为二冬汤治疗2型糖尿病的作用机制研究提供参考。

基于含量测定与药效活性相结合的川楝子质量评价

目的分析比较不同批次川楝子代表性成分川楝素、异川楝素含量及颜色值,分析比较不同批次川楝子提取物对TRAIL诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的增效作用和对非小细胞肺癌细胞膜死亡受体DR5表达的影响,二者相结合共同评价川楝子的质量。方法采用UHPLC-QqQ-MS/MS对其所含川楝素、异川楝素进行含量测定,色谱柱为Poroshell 120 SB C18柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈,流速为0.3 mL/min,进样量为1μL,柱温为35℃;同时采用分光测色仪测定川楝子饮片的颜色值。采用流式细胞仪检测非小细胞肺癌A549细胞凋亡率与细胞膜死亡受体DR5的表达。结果10批川楝子中川楝素、异川楝素的含量分别为1.024~4.128,0.010~0.045 mg/g;平均颜色值(L*,a*,b*)为68.56,5.27,25.12。10批川楝子均能显著增加非小细胞肺癌细胞膜死亡受体DR5表达,增强TRAIL诱导非小细胞肺癌细胞凋亡。结论建立川楝子饮片的含量测定与颜色检测方法,结合细胞药效活性,可准确用于川楝子的质量控制。

六种柚果实不同部位次生代谢产物的靶向筛查及其差异研究

通过采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法对6种柚果实黄皮层、白皮层和果肉3个部位的酚酸、类黄酮和香豆素类物质进行靶向筛查和定量分析,测定出样品中8种酚酸、20种类黄酮和11种香豆素的含量,鉴定出文旦柚、通贤柚、虎蜜柚和强德勒红心柚果实中之前未被报道的5-羟基-7,8,4′-三甲氧基黄酮,并对数据进行了多角度分析和差异性研究。结果表明:6种柚果实的3个测定部位中均能检出8种酚酸和20种类黄酮化合物,其中包括川陈皮素、橘皮素、甜橙黄酮和5-羟基-7,8,4′-三甲氧基黄酮4种多甲氧基黄酮。黄皮层和白皮层的酚酸含量以p-香豆酸、阿魏酸为主,果肉则以芥子酸和阿魏酸为主,且黄皮层所测酚酸总量高于白皮层和果肉。3个部位的类黄酮含量均以柚皮苷最高,且白皮层中的类黄酮含量远高于黄皮层和果肉。6种柚果实的黄皮层均能检测出11种香豆素,白皮层中能检测出8种,二者均以异欧前胡素和异橙皮内酯为主;果肉中只检出7种香豆素,以香柑醇和6′,7′-环氧香柠檬亭为主。就柚品种而言,酚酸总含量最高的为通贤柚;香豆素总含量最高的为文旦柚;而类黄酮总含量最高的为琯溪蜜柚,文旦柚次之。本研究证实了柚果实中富含的生物活性成分以及白皮层、黄皮层和果肉中活性成分之间的差异性,研究结果对柚果实的加工利用及柚产业发展具有借鉴意义。

黄烷-3-醇类化合物及其代谢产物的靶向定量方法研究

黄烷-3-醇类化合物作为重要的膳食多酚,其生物利用度不仅局限于母体化合物,更重要的是其经过体内肠道微生物代谢后的产物。为了明确体内代谢情况及代谢产物对生物利用度的贡献,本研究探究了黄烷-3-醇类化合物及其代谢产物的靶向定量分析方法。根据各化合物子离子响应值的差异,确定其在混合标准溶液中适合的浓度,并建立了超高效液相色谱-三重四极杆-串联质谱(UHPLC-QQQ-MS)定量分析方法,在15 min分析时间内所有化合物的分离度良好,并有适宜的响应值。方法学验证结果表明,定量化合物具有良好的线性关系;并以尿液、粪便和血浆为研究材料考察方法的稳定性,日内和日间精密度RSD值均在15%以下,基质效应介于±20%之间,回收率在70%~120%之间。该方法快速、灵敏、准确、稳定,可用于黄烷-3-醇类化合物在体内的靶向定量研究。

基于UHPLC-ESI-QQQ-MS/MS技术对复方景川片中多药效成分的质量控制研究

目的:探讨分析复方景川片多药效成分质量控制的有效方法。方法:采用基于UHPLC-ESI-QQQ-MS/MS技术的方法对复方景川片进行梯度洗脱,采用正负离子多反应监测模式对药物成分的特定离子进行监测,测定复方景川片中的药物成分含量。结果:UHPLC-ESI-QQQ-MS/MS技术用于复方景川片中的药物成分进行分析在15 min内即可得出结果,药物中的峰面积与质量浓度有良好的线性关系。结论:采用UHPLC-ESI-QQQ-MS/MS技术可快速的对景川片中的药物成分进行分析,对质量的控制有一定的帮助。

杜仲盐炙前后主要活性成分在肾纤维化大鼠体内的药代动力学研究

建立杜仲生、盐炙品提取物中6种主要活性成分(桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷酸、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷和松脂醇单葡萄糖苷)在腺嘌呤致肾纤维化模型大鼠血浆中的定量分析方法,并对比研究其体内药代动力学行为。应用UHPLC-Qq Q-MS/MS技术,采用负离子模式进行扫描,以MRM配对离子方式进行定量,同时对其专属性、线性范围、准确度、精密度、稳定性、提取回收率及基质效应进行考察,方法学考察结果均符合生物样本的分析要求。成功建立了一种可同时测定杜仲生、盐炙品提取物中6种活性成分在大鼠血浆中快速、灵敏、准确的定量分析方法,并对肾纤维化大鼠单次给予杜仲生、盐炙品提取物后不同时间点各成分的血药浓度进行检测,计算各成分的药代动力学参数并构建药-时曲线。本实验获得南京中医药大学实验动物伦理委员会批准(批准号:202103A008)。结果表明,与杜仲生品组相比,杜仲盐炙品组大鼠血浆中桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷和松脂醇单葡萄糖苷等化合物的tmax值均显著小于生品组(P<0.05,P<0.01);绿原酸的Cmax、AUC0-48 h,松脂醇二葡萄糖苷的Cmax、AUC0-48 h和AUC0-∞,京尼平苷以及松脂醇单葡萄糖苷的Cmax均显著高于生品组(P<0.05,P<0.01)。研究发现,相较于杜仲生品,多种活性成分在杜仲盐炙品的给药环境下可发挥速效作用,有更高的血药浓度峰值与生物利用度,进一步验证了“入盐走肾脏”的中医理论,为杜仲生品及其盐炙品质控指标的选择、炮制机制的阐明和体内代谢规律的深入研究提供了实验参考依据。