鸭肠炎病毒UL41、UL42基因的克隆与分析

依据GenBank登录的鸭肠炎病毒(DEV)核苷酸序列设计引物,利用长片段PCR技术扩增了DEV基因组UL36与UL43基因之间的未知序列,扩增所得片段长度约为15kb,经EcoRⅤ单酶切,将其中的3.9kb片段克隆到pUC18中。序列分析表明该3.9kbEcoRⅤ片段含有2个完整的转录方向相反的与单纯疱疹病毒(HSV)UL41和UL42基因同源的ORF,命名为DEV UL41和UL42基因。通过氨基酸序列比对发现:DEVUL41基因含有5个高度保守位点,而UL42含有2个,进化树分析表明DEV与疱疹病毒科α疱疹病毒亚科的马立克病毒、火鸡疱疹病毒的进化关系非常相近,为DEV的分类提供了参考依据。

高温超氧化物歧化酶基因的克隆及真核重组转移载体pVL-sod的构建

从高温塘泥中分离得到一株耐高温菌株,推定其属于Geobacillus属,根据该属已知的超氧化物歧化酶基因(sod)序列,用PCR的方法扩增得到该菌的sod基因。序列分析表明,该基因全长1236bp,编码411个氨基酸。本试验构建了用于家蚕杆状病毒表达的重组转移载体pVL-sod,为下一步在家蚕杆状病毒中高效表达超氧化物歧化酶奠定了基础。

非洲猪瘟病毒DP96R蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

本研究旨在采用原核表达系统表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)Georgia 2007/1毒株毒力基因UK,获得重组蛋白(DP96R),进一步制备并鉴定DP96R重组蛋白的多克隆抗体。首先构建原核重组表达质粒pET-28a-UK并转化BL21感受态细胞,在16℃、0.4 mmol/L IPTG条件下诱导10 h后,检测到目的蛋白以可溶性表达为主,蛋白分子量约为15 kDa。然后采用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗DP96R蛋白多克隆抗体。ELISA结果表明制备的多抗具有良好反应性,Western blot和免疫荧光实验(immunofluorescence assay,IFA)表明制备的多抗能特异性识别真核表达的DP96R蛋白。DP96R重组蛋白及多克隆抗体的制备为进一步研究DP96R蛋白的生物学功能以及建立ASFV毒株鉴别诊断的血清学检测方法奠定了基础。