急性髓细胞白血病患者血清UL16结合蛋白3(ULBP3)水平升高并抑制NK细胞的杀伤活性

目的检测急性髓细胞白血病(AML)患者血清可溶性UL16结合蛋白3(s ULBP3)的水平,探讨其对AML患者免疫细胞功能的调节作用。方法通过时间分辨免疫荧光技术检测健康对照组(n=20)、AML初发组患者(n=30)及AML完全缓解组患者(n=30)血清中s ULBP3的水平;通过细胞杀伤实验(乳酸脱氢酶释放法)分析s ULBP3对自然杀伤(NK)细胞杀伤活性的影响;通过异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7-AAD)双染色结合流式细胞术分析NK细胞凋亡率。结果与对照组相比,AML初发组患者血清中s ULBP3水平明显增高;AML完全缓解组患者血清中s ULBP3水平也增高,但较初发组患者则明显降低。AML初发组患者血清中s ULBP3水平与NK细胞比例呈负相关,与γδT细胞比例不相关。体外实验显示,添加外源性ULBP3蛋白增加NK细胞的凋亡率,抑制NK细胞对靶细胞的杀伤率。结论 AML患者血中s ULBP3水平增加与NK细胞比例有关,s ULBP3通过增加细胞凋亡抑制NK细胞的杀伤活性。

IMP3、P16蛋白、HE4、P53蛋白在卵巢浆液性肿瘤中表达及其临床意义

目的探究胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3(IMP3)、P16蛋白、人附睾蛋白4(HE4)、P53蛋白在卵巢浆液性肿瘤中表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法对2010年11月至2017年11月该院卵巢浆液性囊腺瘤204例(良性组),卵巢交界性浆液性肿瘤42例(交界性组),卵巢浆液性癌64例(恶性组)组织进行IMP3、P16蛋白、HE4及P53蛋白检测并分析临床病理意义。结果 IMP3、P16蛋白、HE4在良性组中的阳性表达率(15.20%、24.02%和25.00%)明显低于交界性组(54.76%、71.43%和71.43%)和恶性组(73.44%、85.94%和75.00%),差异均有统计学意义(P<0.05);P53蛋白在良性组(4.90%)和交界性组(4.76%)阳性表达率明显低于恶性组(42.19%),差异均有统计学意义(P<0.05);IMP3、HE4和P53蛋白阳性表达率在不同分化程度卵巢浆液性癌间比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);HE4阳性表达率在盆腔淋巴结有无转移者间比较,差异具有统计学意义(P<0.05);四项指标联合检测卵巢浆液性囊腺癌灵敏度(92.19%)和特异度(96.88%),显著高于IMP3(分别为42.19%和60.94%)和P16蛋白单项检测(分别为40.62%和45.31%),差异均有统计学意义(P<0.05)。IMP3、P16蛋白、HE4和P53蛋白联合检测的受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积0.869显著高于各指标单独检测的曲线下面积(P<0.05);在四项指标的单独检测中,HE4的ROC曲线下面积0.816最大(P<0.05)。结论 IMP3、P16蛋白、HE4和P53蛋白联合检测能够提升临床卵巢浆液性癌的诊断率,有望成为卵巢浆液性癌检测良好指标。

NLRP3、AIM2、IFI16炎症小体在慢性乙型病毒性肝炎患者PBMC中的活化水平和与HBV感染的相关性分析

目的:探讨乙肝病毒(HBV)是否激活了慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMCs)内核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)和干扰素诱导蛋白16(IFI16)炎症小体,分析HBV影响炎症小体活化的可能机制.方法:收集感染内科临床确诊CHB患者35例.同时选取健康住院医师28例为对照.以常规淋巴细胞分层液密度梯度离心法分离健康对照组和CHB患者组静脉血得到PBMCs,采用逆转录、实时荧光定量PCR检测CHB患者组和健康对照组PBMCs NLRP3、AIM2、IFI16、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶1(CASP1)、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平,ELISA法检测两组血清中IL-1β蛋白分泌水平.结果:CHB患者组和健康对照组PBMCs ASC、NLRP3、AIM2、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平及两组血清IL-1β蛋白分泌水平无显著性差异.CHB患者组PBMCs IFI16、CASP1 mRNA表达水平显著上调,且IFI16 mRNA表达水平与患者血清HBV DNA载量显著正相关(r=0.699 8,P<0.01).结论:慢性HBV感染未导致CHB患者PBMCs NLRP3、AIM2炎症小体的活化;尽管HBV DNA可能诱导了CHB患者IFI16炎症小体的高表达,但通过抑制pro-caspase-1的活化、IL-1β的表达,HBV阻断了IFI16炎症小体的活化效应.

IMP3、P16、HE4、Ki67、P53在卵巢浆液性肿瘤中表达的生物学意义、鉴别诊断及预后的研究

目的研究胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3(IMP3)、P16、人附睾分泌蛋白4(HE4)、Ki67、P53在卵巢浆液性肿瘤表达、鉴别诊断、预后表达的生物学意义。方法采用回顾性分析,收集秦皇岛市妇幼保健院2010年10月至2017年10月住院的卵巢浆液性肿瘤患者183例肿瘤组织标本,根据病理结果分为3组:卵巢浆液性癌组(恶性组)42例,卵巢交界性浆液性肿瘤组(交界性组)61例和卵巢浆液性囊腺瘤组(良性组)80例。行免疫组织化学染色检测IMP3、HE4、Ki67、P16、P53表达,比较3组各蛋白阳性表达率;比较卵巢浆液性癌组不同分期、是否伴有盆腔淋巴结转移组IMP3、P16、HE4、Ki67、P53表达阳性表达率;比较各指标单独检测、联合检测对卵巢浆液性肿瘤鉴别诊断的敏感度和特异度。结果恶性组IMP3、HE4、Ki67、P16、P53阳性率为73.81%、76.19%、54.76%、83.33%、40.48%,均高于良性组(15.00%、26.25%、0.00%、23.75%、5.00%),恶性组IMP3、Ki67、P16、P53阳性率高于交界性组(52.46%、11.48%、70.49%、4.92%),交界性组IMP3、HE4、Ki67、P16高于良性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。IMP3、HE4、Ki67、P16、P53诊断卵巢浆液性肿瘤的敏感度分别为73.81%、76.19%、54.76%、83.33%、40.48%,特异度分别为68.79%、54.61%、95.04%、56.03%、95.04%。联合检测的敏感度为92.86%,明显高于各指标单一检测,差异有统计学意义(P<0.05)。联合检测的特异度为95.74%,高于IMP3、HE4、P16的特异度,差异有统计学意义(P<0.05),与Ki67、P53特异度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。FIGO分期Ⅲ期及以上组患者IMP3、HE4、Ki67阳性率明显高于Ⅰ期组,Ⅱ期组;Ⅱ期组IMP3、Ki67、P53阳性率明显高于Ⅰ期组,差异有统计学意义(P<0.05)。FIGO分期Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期及以上组P16阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。有盆腔淋巴结转移组IMP3、HE4、Ki67、P16、P53阳性率明显高于无盆腔淋巴结转移组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论IMP3、P16、HE4、Ki67、P53阳性表达增加可能在卵巢浆液性囊腺瘤向卵巢浆液性癌进展、肿瘤的分化转移中起着重要作用。5种指标联合检测可提高卵巢浆液性肿瘤的鉴别诊断准确率。

ULBP3联合CEA、CA125、SCCA在肺癌中的诊断价值

目的研究肿瘤标志物UL-16结合蛋白3(ULBP3)联合癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCCA)在肺癌中的诊断价值。方法选择2018年3月至2019年12月在江苏大学附属医院病理确诊的106例肺癌(腺癌70例、鳞癌36例)患者作为肺癌组,57例良性肺病患者作为对照组。采用时间分辨免疫荧光法检测血清ULBP3水平,采用化学发光法检测血清CEA、CA125、SCCA水平。比较两组血清ULBP3、CEA、CA125、SCCA水平,绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析ULBP3、CEA、CA125、SCCA对肺癌的诊断价值。结果肺癌组患者血清CEA、CA125、SCCA、ULBP3的水平显著高于对照组[(52.1±15.3)μg/L比(3.9±0.5)μg/L,(65.8±8.8)kU/L比(27.6±3.2)kU/L,(5.4±1.0)μg/L比(2.3±0.4)μg/L,(18.6±5.8)μg/L比(2.5±0.3)μg/L](P<0.05或P<0.01)。不同性别、年龄、病理类型、临床分期以及有无吸烟史的肺癌患者血清ULBP3水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线结果显示,CEA、CA125、SCCA、ULBP3诊断肺癌的曲线下面积(AUC)分别为0.712(95%CI 0.633~0.790)、0.625(95%CI 0.539~0.712)、0.667(95%CI 0.579~0.755)、0.891(95%CI 0.841~0.942),ULBP3联合CEA、CA125、SCCA检测的AUC为0.926(95%CI 0.888~0.964)。CEA、CA125、ULBP3诊断肺腺癌的AUC分别为0.805(95%CI 0.724~0.887)、0.707(95%CI 0.608~0.807)、0.891(95%CI 0.834~0.949),ULBP3联合CEA、CA125诊断肺腺癌的AUC为0.956(95%CI 0.922~0.989)。SCCA、ULBP3诊断肺鳞癌的AUC分别为0.716(95%CI 0.604~0.827)、0.874(95%CI 0.804~0.943),ULBP3联合SCCA诊断肺鳞癌的AUC为0.890(95%CI 0.825~0.954)。结论肺癌患者血清ULBP3、CEA、CA125、SCCA表达异常,四项指标联合检测对肺癌的诊断效能较高。CEA、ULBP3、CA125联合检测对肺腺癌诊断效能较高,ULBP3、SCCA联合检测对肺鳞癌诊断效能较高。

miR-10b介导NKG2D调节脑胶质瘤细胞免疫效应的实验研究

目的:观察微小核糖核酸-10b(miR-10b)对脑胶质瘤细胞免疫效应的调节作用并探讨其作用机制。方法:取人脑胶质瘤细胞U251进行培养和传代,获得处于对数生长期的细胞。按照1.0×105个/ml浓度制备细胞悬液,并设置对照组、过表达组、低表达组、空白组,每组6个复孔。对照组、过表达组、低表达组分别采用脂质体转染法转染阴性对照、miR-10b模拟物、miR-10b抑制剂,空白组予以等量无菌生理盐水。分离和培养1例健康志愿者外周血自然杀伤(NK)细胞。MTT法检测不同效靶比时NK细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测各组NK细胞表面NK细胞激活受体(NKG2D)表达,并检测各组人脑胶质瘤细胞U251表面主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A(MICA)、UL16结合蛋白2(ULBP2)、UL16结合蛋白3(ULBP3)表达。结果:对照组、过表达组、低表达组转染效率分别为(93.55±2.05)%、(95.67±3.14)%、(94.18±3.26)%;与对照组和空白组相比,过表达组miR-10b表达升高,低表达组miR-10b表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组和空白组miR-10b表达差异无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均降低、NKG2D表达降低,低表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均增高、NKG2D表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05),各组NK细胞杀伤活性均随效靶比增加而增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组相比,相同效靶比NK细胞杀伤活性、NKG2D表达差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均降低,低表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制miR-10b表达能够增加NK细胞表面NKG2D和人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达,增强NK细胞对人脑胶质瘤细胞U251的杀伤活性。

人ULBP3在不同肿瘤细胞和肿瘤组织的检测及分析

目的研究UL16结合蛋白3(ULBP3)在不同类型肿瘤细胞和不同实体肿瘤中的表达。方法流式细胞术检测膜型ULBP3在SW620结直肠癌细胞、SGC7901胃癌细胞、A549肺癌细胞和结肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌组织中的表达情况,免疫组织化学染色检测肿瘤组织中ULBP3的表达;时间分辨荧光免疫分析法检测肿瘤细胞株培养上清和肿瘤患者血清可溶性ULBP3(sULBP3)的水平。反转录PCR方法检测ULBP3 mRNA在肿瘤中的表达。结果 ULBP3在SW620细胞、SGC7901细胞中表达,在A549细胞中不表达;ULBP3在结直肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌组织中广泛分布;sULBP3存在于SW620细胞、SGC7901细胞培养上清液和结直肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌患者血清中。结论 ULBP3可在不同实体中肿瘤细胞表达,血清sULBP3是潜在的肿瘤标志物。

食管鳞状细胞癌组织ULBP3的表达及与NK细胞的相关性

目的探讨食管鳞状细胞癌组织UL16结合蛋白(ULBP)3的表达及与自然杀伤(NK)细胞的相关性。方法选取2012年1月至2013年12月在该院就诊的食管鳞状细胞癌患者48例,取食管鳞状细胞癌组织、癌旁组织标本及外周血,采用免疫组化技术检测标本中ULBP3的表达,采用流式细胞术测定NK细胞的含量,分析ULBP3在食管鳞状细胞癌组织中的表达及与NK细胞的相关性。结果 ULBP3在食管鳞状细胞癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05);食管鳞状细胞癌组织中ULBP3的表达与外周血NK细胞含量呈正相关(r=0.596,P<0.05);ULBP3的表达与食管鳞状细胞癌的临床分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05)。结论食管鳞状细胞癌组织ULBP3高表达,且可能和NK细胞的免疫调节过程相关。

lncRNA SLC16A1-AS1调节miR-532-3p/TAGLN2信号通路对脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA溶质载体家族16成员1反义RNA 1(lncRNA SLC16A1-AS1)调节微小RNA-532-3p(miR-532-3p)/肌动蛋白结合蛋白2(TAGLN2)信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法实时荧光定量PCR检测胶质瘤细胞中lncRNA SLC16A1-AS1表达水平,筛选最佳干预细胞系;通过荧光原位杂交实验、下拉实验、双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA SLC16A1-AS1、TAGLN2与miR-532-3p的靶向调控关系。①将U251细胞分为小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、si-SLC16A1-AS1组、si-SLC16A1-AS1+NC inhibitor组、si-SLC16A1-AS1+miR-532-3p inhibitor组、miR-NC组、miR-532-3p mimics组、miR-532-3p mimics+pcDNA组、miR-532-3p mimics+TAGLN2组:检测U251细胞的增殖、迁移和侵袭变化;Western blot检测TAGLN2、E-钙黏附蛋白、波形蛋白表达水平。②小鼠体内肿瘤形成实验:验证lncRNA SLC16A1-AS1对胶质瘤生长的影响。结果lncRNA SLC16A1-AS1在胶质瘤细胞中表达水平升高(P<0.05);U251细胞FISH实验、下拉实验、双荧光素酶基因实验证实lncRNA SLC16A1-AS1,TAGLN2与miR-532-3p存在靶向调控关系;抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达或过表达miR-532-3p可显著抑制U251细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(P<0.05);抑制miR-532-3p表达或过表达TAGLN2可逆转抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达或过表达miR-532-3p对U251细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化的抑制作用(P<0.05)。小鼠体内实验显示,抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达可显著抑制移植瘤的生长(P<0.05)。结论lncRNA SLC16A1-AS1在胶质瘤细胞中表达水平上调,抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达可通过调节miR-532-3p/TAGLN2信号通路,进而抑制胶质瘤的恶性进展。

三氧化二砷通过毛细血管扩张性共济失调突变和RAD3相关激酶通路上调KG1a细胞UL16结合蛋白1的表达

目的观察三氧化二砷(ATO)对急性髓系白血病细胞KG1a细胞表面NKG2D配体UL16结合蛋白1(ULBP1)表达的影响,探讨其调节ULBP1表达的分子机制。方法常规体外培养KG1a细胞,采用细胞增殖/毒性检测试剂(CCK8)检测不同浓度ATO对KG1a细胞的增殖抑制率;应用实时荧光定量反转录(RT)-PCR方法检测KG1a细胞ULBP1 mRNA表达的影响;流式细胞术检测ATO对KG1a细胞表面ULBP1蛋白表达的影响。加入毛细血管扩张性共济失调突变和RAD3相关激酶(ATM/ATR)抑制剂咖啡因,观察其是否影响ATO对KG1a细胞ULBP1 mRNA及蛋白的表达。采用Western blot法观察ATO对KG1a细胞中CHK1、CHK2蛋白及其磷酸化表达的影响。结果不同浓度(1、2、3、4、5μmol/L)ATO均可抑制KG1a细胞的增殖,呈浓度依赖性,其对KG1a细胞的半数抑制浓度(IC50值)为2.7μmol/L。荧光定量RT-PCR法检测结果示ATO可使KG1a细胞ULBP1 mRNA的相对表达水平升高,ATO在浓度分别为1、2、3、4、5μmol/L时,与未加药组比较,ULBP1 mRNA相对表达水平分别升高至(1.86±0.30)倍、(3.02±0.71)倍、(3.16±0.75)倍、(4.80±0.70)倍、(3.70±0.89)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05);与未加药组相比,当ATO浓度分别为1、2、3、4、5μmol/L时,ULBP1蛋白相对表达水平均显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。咖啡因预先处理KG1a细胞2 h再联合ATO共同孵育KG1a细胞24 h,ULBP1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低。在咖啡因浓度为8 mmol/L时,ULBP1 mRNA相对表达水平由不用咖啡因处理组的(9.55±0.38)倍降为(6.36±0.93)倍,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果发现,当咖啡因浓度分别为2、4、8 mmol/L时,ULBP1蛋白相对表达水平由不用咖啡因处理组的(3.50±0.08)倍分别降为(2.17±0.07)倍、(2.02±0.06)倍、(1.75±0.06)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CHK1和CHK2蛋白相对表达水平均随ATO浓度的升高而降低,而CHK1和CHK2磷酸化蛋白的相对表达水平均随ATO浓度的升高而升高。结论ATO诱导上调KG1a细胞ULBP1 mRNA及蛋白的表达,ATM/ATR-CHK1/CHK2通路可能参与这一过程。

IMP3与p16在宫颈癌中的表达及其临床意义

目的 检测胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3（IMP3）与p16在宫颈癌的表达,探讨其临床意义.方法 采用免疫组织化学Envision二步法检测67例宫颈癌、58例宫颈上皮内瘤变及15例正常宫颈组织中IMP3及p16的表达情况.结果 IMP3在宫颈癌组织细胞质中表达,阳性表达率85.07％（57/67）,显著高于宫颈上皮内瘤变12.07％（7/58; χ^2 =66.32,P＜0.05）及正常宫颈组织的阳性表达率0（0/15;χ^2 =44.38,P＜0.05）.IMP3在宫颈腺癌及宫颈鳞状细胞癌中均呈高表达,两者差异无统计学意义（χ^2=0.35,P＞0.05）.p16在宫颈癌组织细胞质和细胞核均有表达,阳性表达率为83.58％（56/67）,显著高于宫颈上皮内瘤变41.37％（24/58;χ^2 =24.85,P＜0.05）及正常宫颈组织的阳性表达率0（0/15;χ^2 =42.61,P＜0.05）.结论 IMP3与p16在宫颈癌中高表达,可能作为预测宫颈癌转移潜能及预测宫颈上皮内瘤变进展为宫颈浸润癌的指标.

NK细胞免疫缺陷在急性白血病免疫逃逸中的研究进展

NK细胞免疫缺陷在肿瘤中表现多样、机制复杂。NK细胞免疫缺陷与急性白血病免疫逃逸关系密切。本文从NK细胞免疫缺陷的表现及发生原因角度探讨急性白血病免疫逃逸机制。