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潜伏相关抗原UL138蛋白的制备及其用于人巨细胞病毒感染血清学检测的评价 被引量:4
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作者 陈文静 黄崇安 +5 位作者 陈静 郭刚强 谢旺凯 林刻智 沈贤 薛向阳 《温州医科大学学报》 CAS 2015年第10期703-708,共6页
目的:探讨基于人巨细胞病毒(HCMV)潜伏相关抗原UL138蛋白的ELISA方法用于HCMV感染血清学检测的意义。方法:生物信息学分析HCMV UL138蛋白的跨膜区结构,选择胞内区序列,经原核密码子优化后全基因合成,克隆至p ET21a(+)原核载体,将成功构... 目的:探讨基于人巨细胞病毒(HCMV)潜伏相关抗原UL138蛋白的ELISA方法用于HCMV感染血清学检测的意义。方法:生物信息学分析HCMV UL138蛋白的跨膜区结构,选择胞内区序列,经原核密码子优化后全基因合成,克隆至p ET21a(+)原核载体,将成功构建的重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),诱导蛋白表达后,SDS-PAGE及Western blot法鉴定目的蛋白表达,采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。将纯化的UL138蛋白包被ELISA板,检测173例人血清UL138特异性抗体,并与临床上使用的罗氏公司cobas 8000分析系统及配套试剂盒进行血清HCMV Ig G抗体检测比较,评价UL138蛋白作为HCMV感染血清学检测工具的效能。结果:利用原核表达系统成功表达了UL138蛋白,经镍柱亲和纯化后获得高纯度的目的蛋白;健康成人血清UL138特异性抗体的ELISA法检测结果显示,几乎所有的健康成人都存在UL138特异性抗体,与罗氏公司的化学发光(CLIA)法Ig G检测结果比较,灵敏性为100.0%,符合率为98.8%,差异无统计学意义(x2=0.5,P>0.05),而且具有较好的一致性(Kappa=0.496,P<0.001)。结论:潜伏相关抗原UL138是HCMV感染血清学检测重要候选抗原,可望为基于此蛋白的HCMV血清学检测试剂的研制提供依据。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 ul138蛋白 血清学检测 酶联免疫吸附试验
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人巨细胞病毒UL138基因在临床低传代分离株中的多态性研究 被引量:2
2
作者 马艳萍 阮强 +5 位作者 齐莹 何蓉 卢颖 吉耀华 刘庆 陈淑荣 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期193-196,共4页
目的 :研究人巨细胞病毒 (HCMV)UL1 38基因在临床低传代分离株中的多态性及其与HCMV先天感染不同致病性之间的关系。方法 :对 30株经荧光定量PCR方法检测HCMV DNA为阳性的临床低传代分离株进行HCMV UL1 38全序列PCR扩增 ,对 1 6株进行HC... 目的 :研究人巨细胞病毒 (HCMV)UL1 38基因在临床低传代分离株中的多态性及其与HCMV先天感染不同致病性之间的关系。方法 :对 30株经荧光定量PCR方法检测HCMV DNA为阳性的临床低传代分离株进行HCMV UL1 38全序列PCR扩增 ,对 1 6株进行HCMV UL1 38基因全序列测序及结果分析。结果 :30株临床分离株中有 2 0株UL1 38基因PCR扩增阳性。 1 6株临床分离株HCMV UL1 38开放阅读框架及编码蛋白的重要功能基团均高度保守。核苷酸序列进化树的分析结果表明 :除 2 0M外 ,先天性巨结肠株只存在于 2a型 ,而小头畸形株仅存在于 2b型。结论 :HCMVUL1 38基因高度保守 ,但存在一定的多态性。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 ul138基因 多态性
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诱导性表达人巨细胞病毒UL138蛋白的胃癌细胞株构建及其效应评价
3
作者 张良 陈文静 +6 位作者 郭刚强 孙祥威 叶璐璐 胡畅远 金劲激 沈贤 薛向阳 《温州医科大学学报》 CAS 2017年第2期79-84,共6页
目的:构建可诱导表达人巨细胞病毒(HCMV)UL138蛋白的稳定遗传胃癌细胞系,并评价UL138对胃癌细胞的生物学效应。方法:将p CMV-tet3G质粒转染BGC-823胃癌细胞,通过G418及荧光素酶活性检测筛选BGCTet-on细胞株。再将含有UL138外源基因的p T... 目的:构建可诱导表达人巨细胞病毒(HCMV)UL138蛋白的稳定遗传胃癌细胞系,并评价UL138对胃癌细胞的生物学效应。方法:将p CMV-tet3G质粒转染BGC-823胃癌细胞,通过G418及荧光素酶活性检测筛选BGCTet-on细胞株。再将含有UL138外源基因的p TRE3G-UL138质粒转染稳定BGCTet-on细胞株,通过G418及潮霉素双抗筛选,获得诱导性表达UL138基因的胃癌细胞(BGC-UL138_(Tet-on))。强力霉素(DOX)诱导后,采用Western blot验证UL138蛋白表达,采用流式细胞术及CCK8试剂盒检测UL138蛋白表达对胃癌细胞的生长周期及增殖的影响。构建荷瘤裸鼠模型,体内验证UL138蛋白表达对胃癌细胞增殖的影响。结果:成功构建了DOX诱导性表达的、携带UL138基因的BGC-UL138_(Tet-on)稳转细胞株。UL138蛋白表达可显著抑制胃癌细胞增殖;流式细胞术检测显示UL138蛋白表达阻滞BGC-823细胞周期在G_1期。荷瘤裸鼠模型体内实验发现,DOX腹腔注射诱导UL138蛋白表达后,BGC-UL138_(Tet-on)移植瘤体积缩小甚至消失。结论:成功构建可诱导表达UL138蛋白的胃癌细胞株,进一步证实HCMV基因UL138的表达可在体内和体外抑制胃癌细胞的增殖,细胞实验提示细胞周期阻断在G_1期。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 ul138 Tet-on系统 胃肿瘤 基因 肿瘤抑制
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人巨细胞病毒UL138基因表达对胃癌细胞免疫相关功能的影响 被引量:2
4
作者 叶乐乐 张佳丽 +4 位作者 陈文静 沈贤 胡畅远 丁宁 薛向阳 《温州医科大学学报》 CAS 2018年第7期474-478,共5页
目的:探讨人巨细胞病毒UL138基因表达对胃癌细胞免疫相关功能的影响。方法:构建UL138基因真核表达重组质粒,转染BGC-823胃癌细胞,经Westernblot及免疫荧光验证UL138表达,通过基因芯片结合生物信息学技术分析UL138表达对胃癌细胞功能的影... 目的:探讨人巨细胞病毒UL138基因表达对胃癌细胞免疫相关功能的影响。方法:构建UL138基因真核表达重组质粒,转染BGC-823胃癌细胞,经Westernblot及免疫荧光验证UL138表达,通过基因芯片结合生物信息学技术分析UL138表达对胃癌细胞功能的影响,荧光定量PCR进一步验证胃癌细胞中免疫相关分子的表达,Westernblot分析免疫原性死亡相关蛋白的变化。结果:Westernblot及免疫荧光证实重组质粒转染后胃癌细胞表达UL138;基因芯片差异基因分析显示UL138的表达上调了370个基因表达,下调了206个基因的表达;生物信息学分析提示这些差异基因的表达参与了胃癌细胞骨架重构、细胞黏附等并与消化系统疾病相关。荧光定量PCR分析显示UL138的表达上调了IL1A、IL6、IL11、IL8、IL1RL1、IL7R、IL13RA2、CCL3L1、CCL5、TNFAIP3、TNFRSF21、VEGFA、CD44、CD55、CD59、CD27416种炎症相关细胞因子基因表达并下调了CXCL10、IFNAR1基因的表达。此外,Westernblot结果显示UL138的表达上调了免疫原性死亡相关蛋白ERp57的表达(P<0.01),不影响HSP70的表达(P>0.05)。结论:UL138基因的表达能促进胃癌细胞促炎相关细胞因子表达并诱导免疫原性细胞死亡的特征。 展开更多
关键词 胃肿瘤 巨细胞病毒 ul138 细胞因子类
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Human Cytomegalovirus UL138 Open Reading Frame Is Highly Conserved in Clinical Strains 被引量:6
5
作者 Ying Qi Rong He Yan-ping Ma Zheng-rong Sun Yao-hua Ji Qiang Ruan 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2009年第2期107-111,共5页
Objective To investigate the variability of human cytomegalovirus (HCMV) UL138 open reading frame (ORF) in clinical strains. Methods HCMV UL138 ORF was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and PCR amplif... Objective To investigate the variability of human cytomegalovirus (HCMV) UL138 open reading frame (ORF) in clinical strains. Methods HCMV UL138 ORF was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and PCR amplification products were sequenced directly, and the data were analyzed in 19 clinical strains. Results LIL138 ORF in all 30 clinical strains was amplified successfully. Compared with that of Toledo strain, the nucleotide and amino acid sequence identifies of LIL138 ORF in all strains were 97.41% to 99.41% and 98.24% to 99.42%, respectively. All of the nucleofide mutations were substitutions. The spatial structure and post-translational modification sites of HL138 encoded proteins were conserved. The result of phylogenetic tree showed that HCMV HL138 sequence variations were not definitely related with different clinical symptoms. Conclusion HCMV UL138 ORF in clinical strains is high conservation, which might be helpful for UL138 encoded protein to play a role in latent infection of HCMV. 展开更多
关键词 human cytomegalovirus UL 138 CONSERVATION
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广州地区人巨细胞病毒临床低传代株UL138基因的序列特征及多态性分析 被引量:4
6
作者 蔡丽君 胡兢晶 +4 位作者 王波 苏海浩 伍苑宾 密英鸽 郭梦杰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期407-413,共7页
目的研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代分离株UL138基因序列特征与多态性。方法从10例被证实为临床HCMV感染的新生儿尿液标本中分离HCMV低传代临床病毒株,进行多重PCR鉴定。对临床分离株进行HCMVUL138基因扩增、... 目的研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代分离株UL138基因序列特征与多态性。方法从10例被证实为临床HCMV感染的新生儿尿液标本中分离HCMV低传代临床病毒株,进行多重PCR鉴定。对临床分离株进行HCMVUL138基因扩增、克隆、鉴定、测序及呈报GenBank;同时在GenBank搜索HCMVUL138同源序列,行序列分析,应用生物信息学在线软件分析UL138基因翻译后修饰位点、二级结构及等电点。结果成功分离3株HCMV临床病毒株,分别命名为HCMVD3、D2和D52。克隆测序后呈报GenBank并被收录。收录序列号分别为:DQ180375、DQ180387和DQ180359。分析结果显示在HCMV临床低传代D3、D2和D52病毒株UL138基因全序列841个碱基中,存在16个位点变异,可能编码的蛋白质氨基酸残基总数为169个,其基因序列高度保守,核苷酸变异均为碱基替换,无插入或缺失,碱基替换导致了7处氨基酸的改变。HCMVUL138蛋白翻译后修饰位点在除Toledo株外的所有分离株中均高度保守;所有分离株UL138蛋白的预测等电点均为6.51。结论广州地区感染婴儿的HCMVUL138基因及其编码的氨基酸序列极为保守,但仍具有一定的多态性,这在HCMV临床感染与致病机制研究中具有重要意义。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 临床病毒株 ul138 基因序列 多态性
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人巨细胞病毒UL138~142基因在临床低传代分离株中的多态性研究 被引量:5
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作者 齐莹 卢颖 +5 位作者 马艳萍 阮强 何蓉 吉耀华 刘庆 陈淑荣 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期230-234,共5页
目的 研究人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus ,HCMV)UL138~UL14 2基因在临床低传代分离株中的多态性及其与HCMV先天感染致病性之间的关系。方法 对经荧光定量PCR方法检测HCMV DNA为阳性的临床分离株进行UL138~UL14 2基因全序列PC... 目的 研究人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus ,HCMV)UL138~UL14 2基因在临床低传代分离株中的多态性及其与HCMV先天感染致病性之间的关系。方法 对经荧光定量PCR方法检测HCMV DNA为阳性的临床分离株进行UL138~UL14 2基因全序列PCR扩增 ,对扩增阳性的标本进行全序列的测序及结果分析。结果 HCMV临床分离株的UL138、UL14 2ORF(openreadingframe)高度保守 ;UL139ORF呈现高度多态性 ,可被明确划分为 3个基因型 ,且核苷酸及氨基酸的变异主要集中在序列的 5′端 ;所有临床分离株的UL14 0ORF在Toledo株第 174位核苷酸处插入 1个胞嘧啶核苷酸 ,其ORF较Toledo株增加了 2 31个核苷酸 ;所有临床分离株的UL14 1ORF在Toledo株第 2 2 7位核苷酸处缺失了 1个胸腺嘧啶核苷酸 ,故形成UL14 1a及UL14 1b 2个新的ORF。HCMV临床分离株的UL14 0蛋白较Toledo株新增了ScAMP磷酸化和酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点 ,其它基因编码蛋白的重要功能区域相对保守。结论 HCMV临床分离株UL139ORF的 5′端呈现高度多态性 ,而且被明确地分成 3个基因型 ,故其可能在HCMV先天感染的致病性差异方面起一定作用 ;尚未发现UL138~UL14 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 ULl38~142基因 基因多态性 先天感染 聚合酶链反应
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HCMV潜伏相关UL138基因重组腺病毒的构建及其对THP-1单核细胞功能的影响
8
作者 郭刚强 陈静 +8 位作者 陈文静 叶璐璐 孙祥威 张良 章慧娣 林巧爱 沈贤 张丽芳 薛向阳 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期667-675,共9页
目的:构建含人巨细胞病毒( HCMV)潜伏相关 UL138基因的重组腺病毒,探讨UL138基因对THP-1单核细胞功能的影响。方法构建携带UL138基因的重组腺病毒,利用TCID50法确定重组腺病毒滴度。重组腺病毒以不同MOI比值感染THP-1细胞,通过绿色... 目的:构建含人巨细胞病毒( HCMV)潜伏相关 UL138基因的重组腺病毒,探讨UL138基因对THP-1单核细胞功能的影响。方法构建携带UL138基因的重组腺病毒,利用TCID50法确定重组腺病毒滴度。重组腺病毒以不同MOI比值感染THP-1细胞,通过绿色荧光蛋白表达确定感染THP-1细胞最佳MOI值;定量PCR分析UL138表达对THP-1细胞前炎症细胞因子表达变化,通过定量PCR芯片分析趋化因子及受体的表达变化。结果成功构建了携带UL138基因的重组腺病毒,TCID50法测定病毒的滴度达1x1011 PFU/ml。利用重组腺病毒携带的绿色荧光蛋白表达检测THP-1细胞的感染率,结果显示,重组腺病毒以MOI=1∶100感染THP-1细胞,感染率为60%, RT-PCR和Western blot证实了THP-1细胞能够表达UL138,且随着时间的延长,蛋白表达量逐渐增多。定量PCR检测发现,THP-1细胞 UL138过表达后,可明显抑制IL-18、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等前炎性细胞因子的表达。定量PCR芯片分析显示,UL138表达明显改变THP-1单核细胞内趋化因子及受体的表达,除外 CCL17、CCL21、CCL22、XCL2等趋化因子以及 CCR2、CXCR1、CXCR2、 CXCR4及CX3CR1等趋化因子受体在不同时间点上调表达外, CXCL1、CXCL3、CXCL9、CXCL10、CXCL11等大部分趋化因子及受体的表达均显著减少。结论成功构建了可感染THP-1单核细胞的UL138基因重组腺病毒;THP-1单核细胞过表达UL138可明显影响其功能。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 潜伏感染 ul138 重组腺病毒 THP-1 单核细胞 趋化因子及受体
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人巨细胞病毒感染与大肠癌临床相关性 被引量:2
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作者 叶梦思 何云 +3 位作者 杨守醒 林豪 薛战雄 蔡振寨 《世界华人消化杂志》 CAS 2016年第1期44-50,共7页
目的:探讨大肠癌患者人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染情况及其临床相关性.方法:采用化学发光(CLIA)法对大肠癌组(n=60)、大肠息肉组(n=60)及健康对照组(n=60)的外周血清进行HCMV免疫球蛋白G(immunoglobulin G,Ig G)、Ig ... 目的:探讨大肠癌患者人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染情况及其临床相关性.方法:采用化学发光(CLIA)法对大肠癌组(n=60)、大肠息肉组(n=60)及健康对照组(n=60)的外周血清进行HCMV免疫球蛋白G(immunoglobulin G,Ig G)、Ig M抗体检测;巢式PCR技术结合原位杂交方法检测32例大肠癌组织及癌旁正常肠黏膜组织中HCMV-UL138基因表达;用Fisher确切概率法比较两组间阳性率,均数比较采用t检验或单因素方差分析.P<0.05为差异有统计学意义.结果:大肠癌组、大肠息肉组、健康对照组血清H C M V-I g G阳性率为分别为95.0%(57/60)、98.3%(59/60)、96.7%(58/60);血清HCMV-Ig M阳性率分别为5.0%(3/60)、1.7%(1/60)、1.7%(1/60),3组血清H C M VIg G、Ig M差异无统计学意义(P>0.05).32例大肠癌组织巢式PCR检测HCMV-UL138阳性率为65.6%(19/32),相应癌旁正常肠黏膜组织中为12.5%(4/32),原位杂交法检测癌组织HCMV-UL138阳性率为62.5%(20/32),癌旁正常肠黏膜组织中为9.4%(3/32),大肠癌组织HCMV阳性检出率较癌旁正常组织显著升高(P<0.01).未发现HCMV感染与大肠癌患者的年龄、性别、肿块位置、肿块大小、组织病理分化类型、转移及Dukes分期有显著性关联.结论:大肠癌组织中存在HCMV感染,且H C M V相较于癌旁正常组织更倾向感染癌灶,提示HCMV感染可能参与大肠癌的发生发展过程. 展开更多
关键词 大肠癌 大肠息肉 人巨细胞病毒 ul138 临床病理特征
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人巨细胞病毒感染与系统性红斑狼疮的相关性 被引量:4
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作者 陈静 章慧娣 +4 位作者 楼威洋 邵蓉蓉 张丽芳 薛向阳 朱小春 《温州医学院学报》 CAS 2014年第5期318-323,共6页
目的:分析人巨细胞病毒(HCMV)在系统性红斑狼疮(SLE)患者中的感染状况及与SLE临床指标的相关性。方法:采集并分离60例SLE患者和111例健康体检者的外周血白细胞及血清标本,建立细胞内HCMV UL55及UL138基因高度敏感特异的PCR方法,并检测SL... 目的:分析人巨细胞病毒(HCMV)在系统性红斑狼疮(SLE)患者中的感染状况及与SLE临床指标的相关性。方法:采集并分离60例SLE患者和111例健康体检者的外周血白细胞及血清标本,建立细胞内HCMV UL55及UL138基因高度敏感特异的PCR方法,并检测SLE患者及健康体检者外周血白细胞内HCMV UL55及UL138基因,以确定HCMV感染情况,利用罗氏公司电化学发光法试剂盒检测血清HCMV IgG和IgM,比较SLE患者与健康体检者外周血白细胞内HCMV UL55、UL138检测及血清IgG、IgM检测的阳性率和相关性,统计分析外周血白细胞内HCMV感染与SLE常见临床指标的关系。结果:琼脂糖凝胶电泳及测序结果显示,建立的PCR方法能特异地检测外周血白细胞内HCMV UL55及UL138基因;血清HCMV IgG及细胞内HCMV UL138基因检测几乎全部呈阳性,SLE患者与健康体检者之间差异无统计学意义(P>0.05);血清HCMV IgM检测阳性率低,SLE患者血清HCMV IgM检测阳性率(为6.67%)略高于健康体检者(为0.90%)(P=0.052);SLE患者外周血白细胞内HCMV UL55基因检测的阳性率明显高于健康体检者(P<0.01)。HCMV感染4种检测方法的相关分析显示,细胞内HCMV UL138检测结果与血清HCMV IgG检测有较好的一致性。分析SLE患者外周血白细胞内HCMV感染状况与临床指标的相关性显示,与UL138基因不同,细胞内HCMV UL55检测呈阳性的SLE患者与检测呈阴性的SLE患者比较,存在多项明显差异的临床指标。结论:HCMV感染与SLE存在一定的相关性,但不同检测方法结果差异显著。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 系统性红斑狼疮 聚合酶链式反应 UL55 ul138
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HCMV感染的标志性蛋白研究进展 被引量:3
11
作者 李仲航 谢妮 齐素文 《热带医学杂志》 CAS 2015年第4期567-570,共4页
人巨细胞病毒(HCMV)感染可导致各种疾病,并常常导致严重的并发症。随着临床实验室技术的发展,检测与HCMV感染相关的特异蛋白生物标志物有利于快速准确诊断HCMV感染并对预后进行观察。本文对最近几年报道的HCMV标志性蛋白进行概述。
关键词 人巨细胞病毒 PUL21a ul138 US27
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人巨细胞病毒UL/b’区基因编码蛋白生物学功能的研究进展 被引量:1
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作者 刘畅(综述) 齐莹(审校) 《国际儿科学杂志》 2012年第6期591-595,共5页
人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在人群中感染广泛,不仅是免疫抑制患者的严重致病原,也是引起新生儿先天及围生期感染最常见、危害最大的一种病原体。近年来,针对区别于实验室株的一个特殊区域UL/b’区基因编码蛋白生... 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在人群中感染广泛,不仅是免疫抑制患者的严重致病原,也是引起新生儿先天及围生期感染最常见、危害最大的一种病原体。近年来,针对区别于实验室株的一个特殊区域UL/b’区基因编码蛋白生物学功能的研究是国内外HCMV研究领域的一个热点。目前已经发现该区域基因产物在HCMV的毒力、传播、组织细胞嗜性及免疫逃避等方面发挥重要作用,其中的UL133-UL138位点可能促进HCMV潜伏感染的建立和维持,而pUL138是目前病毒基因组中鉴定出的惟一明确与HCMV潜伏感染相关的决定因子。因此,HCMVUL/b’区基因产物在HCMV感染过程中发挥重要作用。该文就HCMVUL/b’区部分基因,尤其是与HCMV潜伏感染相关的UL138基因结构及其编码蛋白生物学功能进行综述,为阐明HCMV感染致病机制奠定基础。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 UL b’区域 ul138基因 潜伏感染 生物学功能
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