潜伏相关抗原UL138蛋白的制备及其用于人巨细胞病毒感染血清学检测的评价

目的:探讨基于人巨细胞病毒(HCMV)潜伏相关抗原UL138蛋白的ELISA方法用于HCMV感染血清学检测的意义。方法:生物信息学分析HCMV UL138蛋白的跨膜区结构,选择胞内区序列,经原核密码子优化后全基因合成,克隆至p ET21a(+)原核载体,将成功构建的重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),诱导蛋白表达后,SDS-PAGE及Western blot法鉴定目的蛋白表达,采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。将纯化的UL138蛋白包被ELISA板,检测173例人血清UL138特异性抗体,并与临床上使用的罗氏公司cobas 8000分析系统及配套试剂盒进行血清HCMV Ig G抗体检测比较,评价UL138蛋白作为HCMV感染血清学检测工具的效能。结果:利用原核表达系统成功表达了UL138蛋白,经镍柱亲和纯化后获得高纯度的目的蛋白;健康成人血清UL138特异性抗体的ELISA法检测结果显示,几乎所有的健康成人都存在UL138特异性抗体,与罗氏公司的化学发光(CLIA)法Ig G检测结果比较,灵敏性为100.0%,符合率为98.8%,差异无统计学意义(x2=0.5,P>0.05),而且具有较好的一致性(Kappa=0.496,P<0.001)。结论:潜伏相关抗原UL138是HCMV感染血清学检测重要候选抗原,可望为基于此蛋白的HCMV血清学检测试剂的研制提供依据。