Bcl2促进UMR-106细胞BMP-2、OPG表达及补肾健脾活血方对其影响

目的基于构建Bcl2沉默和过表达腺病毒观察Bcl2对成骨细胞骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)蛋白的调节作用及补肾健脾活血方对其影响。方法将培养的UMR-106细胞分为空载腺病毒组(沉默Bcl2空载腺病毒NC-bcl2,过表达Bcl2空载腺病毒WT-bcl2)、Bcl2腺病毒组(沉默Bcl2腺病毒sh-bcl2,过表达Bcl2腺病毒Ad-bcl2),空载腺病毒+空白血清组(NC-bcl2,WT-bcl2)、空载腺病毒+补肾健脾活血方含药血清组(NC-bcl2+ME,WT-bcl2+ME)、腺病毒+空白血清组(sh-bcl2,Ad-bcl2)、腺病毒+补肾健脾活血方血清组(sh-bcl2+ME,Ad-bcl2+ME),用RT-q PCR检测Bcl2、OPG mRNA的变化、应用免疫印迹(Western Blot)检测Bcl2、OPG、BMP-2的变化。结果 (1)荧光倒置显微镜观察包装腺病毒转染UMR-106细胞;(2)在正常培养基中,与NC-bcl2比较,sh-bcl2可以降低Bcl2、OPG、BMP-2蛋白的表达(P均<0.05),与WT-bcl2比较,Ad-bcl2可以提高Bcl2、OPG、BMP-2蛋白的表达(P均<0.05);(3)与NC-bcl2比较,RTq PCR显示sh-bcl2可以降低Bcl2 mRNA的表达,但OPG mRNA无统计学意义;(4)在大鼠血清干预中,与空载腺病毒比较,补肾健脾活血方含药血清均可以增加BMP-2、OPG蛋白表达(P均<0.05);在sh-bcl2干预的细胞中,补肾健脾活血方含药血清提高BMP-2、OPG蛋白的表达(P均<0.05);在Ad-bcl2干预的细胞中,中药干预后,BMP-2、OPG未见明显变化。结论 Bcl2可以影响BMP-2、OPG蛋白的表达,补肾健脾活血方可能通过作用于Bcl2影响成骨细胞成骨相关蛋白的表达。

葛根素对UMR106细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

目的:研究葛根素对UMR106细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响。方法:UMR106细胞培养于-αMEM培养基中,葛根素处理后光学显微镜下观察其形态学变化,绘制细胞生长曲线,并采用对硝基苯磷酸钠基质动力学法测定UMR106细胞内、外碱性磷酸酶活性。结果:UMR106细胞经葛根素和10-8mol.L-1雌二醇处理后d1,d2和d3,与空白对照组相比,增殖速度均加快,d2差异最显著。与对照组相比,10-8,10-7,10-6mol.L-1葛根素组的增殖率分别为9.3%,23.3%和40.9%,10-8mol.L-1雌二醇组增殖率为49.7%。与对照组相比,细胞经10-6mol.L-1葛根素处理后1 d和2 d时,细胞内ALP活性显著增加(P<0.01);细胞经10-6mol.L-1葛根素处理1 d后,细胞外ALP活性显著增加(P<0.05)。结论:葛根素可以促进成骨样细胞UMR106细胞合成和分泌ALP,提示其具有促进成骨细胞增殖和分化的作用。

胫骨内移植UMR-106成瘤组织块构建裸鼠骨肉瘤模型

目的获得UMR-106成瘤组织块,构建裸鼠骨肉瘤模型。方法采用组织块移植的方法,在受体动物的胫骨髓腔内移植UMR-106骨肿瘤细胞株,观察裸鼠行为特征变化、体质量变化、肿瘤生长状况、成瘤率、肿瘤包块的病理学、血清指标,构建裸鼠骨肉瘤模型。结果造模后,模型组裸鼠活动量明显减少,精神状态变差,觅食性变差;模型组裸鼠体质量随着天数的增加逐渐增大;肿瘤体积随着天数的增加逐渐增大,成瘤率91.67%;模型组皮下肿瘤形体可见明显包膜,较大,瘤体质地较硬,表面呈结节状,表面大量血管分布,显微镜下可见丰富的毛细血管,细胞核有异型且大小不等,核仁约1～4个,核分裂相较多;模型组与对照组相比,碱性磷酸酶和磷酸差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用组织块移植的方法,在受体动物的胫骨髓腔内移植UMR-106骨肿瘤细胞株,构建骨肉瘤动物模型,为骨肉瘤的进一步研究、治疗等奠定了实验基础。

高频超声在构建SD大鼠皮下移植性乳腺癌模型中的应用

目的:应用MADB-106大鼠乳腺癌细胞悬液皮下移植法建立SD大鼠乳腺癌移植性肿瘤动物模型,并使用高频超声监测肿瘤生长情况。方法:选取7~8周龄雌性SD乳鼠16只,将处于对数生长期的MADB-106大鼠乳腺癌细胞悬液于大鼠腹股沟皮下接种,应用高频超声观察成瘤率、肿块大小、血供情况及其它声像图特征。结果:SD大鼠接种成功率为100%,死亡2只,剩余14只生长良好;超声检查肿块为类圆形,内部低回声且稍不均匀,边界尚清,后方回声衰减,彩色多普勒扫查肿块内部及周边可见较丰富血流信号;3周后切除瘤体组织,大体观肿块成灰白色,多呈椭圆形,部分边缘呈分叶状改变,肿瘤血管较丰富,镜下可见肿瘤细胞大小形状各异,核大深染,异型性明显。结论:通过MADB-106大鼠乳腺癌细胞接种于雌性SD大鼠腹股沟皮下,成功建立了大鼠乳腺癌移植性肿瘤动物模型。高频超声技术可以在SD大鼠乳腺癌皮下成瘤过程中对肿物的大小、形态、边界、内部回声及血流等生物学情况进行动态检测,是观察和评价瘤体动态变化过程的重要技术手段。

鹿茸中促大鼠成骨样细胞增殖活性组分的纯化与表征

目的:通过鹿血清白蛋白对大鼠成骨样细胞系UMR-106增殖活性和促胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)分泌水平的研究,为阐明鹿茸强筋健骨的作用机理及对骨质疏松的防治提供研究线索。方法:运用SephacrylS-200HR凝胶色谱、POROS20QE阴离子交换色谱和TSKG3000SW高效液相色谱等分离手段,从冷冻干燥鹿茸粉粗提液中分离纯化得到鹿血清白蛋白。并用MTT法检测其对UMR-106细胞的增殖活性;用平衡饱和竞争放射免疫分析法(RIA)测定其促IGF-Ⅰ分泌水平。结果:经分离纯化得到的鹿血清白蛋白分子质量为56.3kDa,在蛋白含量为0.149μg·mL-1时,其促大鼠成骨样细胞增殖率为241.03%,IGF-Ⅰ分泌量为66.89ng·mL-1。结论:鹿茸中的鹿血清白蛋白在14.9ng·mL-1-14.90μg·mL-1具有显著的促大鼠成骨样细胞增殖和IGF-Ⅰ分泌等活性。

苍术挥发油对成骨样细胞增殖的作用

目的研究苍术挥发油对成骨样细胞UMR-106的增殖作用。方法苍术挥发油和UMR-106成骨样细胞体外共同培养,用MTT法检测细胞增殖。结果挥发油在0.001 mg/ml培养48h具有最强的促进细胞增殖作用。结论苍术挥发油中可能含有促进成骨细胞增殖的活性成分。

逍遥丸含药血清依赖雌激素受体促进鼠成骨细胞增殖作用的研究

目的:采用中药血清药理学的方法,制备逍遥丸含药血清(XCS),体外培养鼠成骨细胞株UMR-106,观察XCS对成骨细胞增殖影响及其是否与雌激素受体相关,以便为开展更广泛的临床实验提供理论基础。方法:选择Wistar大鼠30只,以2.7g/(kg·d)剂量灌胃逍遥丸,连续3周,第22日取动物血离心,将XCS冻存备用;体外培养UMR-106细胞,将细胞分为空白组、空白血清组、妊马雌酮(conjugated estrogens)含药血清组、XCS(20%,10%,5%,2.5%,1.25%,0.625%)不同浓度组,MTT法检测细胞增殖率,同时观察雌激素受体拮抗剂(ICI 182780)与细胞共孵育后细胞增殖能力。结果:与空白血清组相比,妊马雌酮含药血清和XCS(20%,10%,5%,2.5%)对UMR-106细胞的增殖有明显促进作用(P<0.05),最大增殖率达到(10.67±2.34)%;但在ICI 182780干预下,妊马雌酮含药血清和各浓度XCS对细胞增殖率无明显影响。结论:XCS对UMR-106细胞的增殖有明显促进作用,此作用需依赖雌激素受体才能发挥。

女贞子对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

为探讨女贞子Fructus Ligustri Lucidi体外对大鼠成骨样细胞UMR-106增殖与分化的影响,女贞子水提物（LWE）以不同浓度加入细胞培养体系,用Am-Blue细胞增殖与活性检测试剂检测成骨细胞的增殖情况;以检测细胞内碱性磷酸酶的活性为指标考察成骨细胞的分化情况。结果表明,LWE在100μg/mL作用48 h能促进细胞的增殖,作用24~48 h能明显促进细胞的分化。在转染了5×ERE-Luc荧光素酶报告基因质粒的乳腺癌细胞MCF-7中检测到LWE能促进雌激素受体反应元件调控下的荧光素酶的表达;且LWE促UMR-106细胞分化的作用能被雌激素受体拮抗剂ICI18270所抑制,表明女贞子很可能是通过雌激素受体信号途径对成骨细胞的分化起作用的。

小檗胺对大鼠骨肉瘤UMR-106细胞凋亡的影响

目的:探讨小檗胺体外对大鼠骨肉瘤UMR-106细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法:用不同浓度的小檗胺(0,2,4,8,16,32mg.L-1)分别处理UMR-106细胞,作用时间分别为24,48,72h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测小檗胺对UMR-106细胞增殖的抑制作用。用不同浓度的小檗胺(0,4,8,16mg.L-1)分别处理UMR-106细胞24h后,采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率(Annexin/PI染色),采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞内Bcl-2、Bax水平,采用分光光度法检测caspase-3的活性。结果:小檗胺对UMR-106细胞的作用呈时间-剂量依赖性,孵育72h、32mg.L-1的小檗胺对UMR-106细胞的作用最强,抑制率接近90%;24,48,72h的IC50分别为24.69、8.03和3.54mg.L-1。空白对照组和小檗胺处理组细胞凋亡率分别为(1.64±0.29)%,(3.58±0.31)%,(6.3±0.5)%和(11.3±1.1)%。同时,小檗胺可以诱导细胞坏死;此外,小檗胺剂量依赖性地降低Bcl-2,增高Bax,降低Bcl-2/Bax比值,并增强caspase-3的活性。结论:小檗胺体外能抑制UMR-106细胞增殖并诱导细胞凋亡或坏死,其诱导凋亡的机制可能与降低Bcl-2/Bax比值,增强caspase-3的活性有关。

电磁刺激对成骨样细胞UMR-106 DNA合成的作用

为了从细胞水平研究低频电磁场影响成骨样细胞增殖的有效物理参数 ,并为其作用机制的解释提供依据 ,论文就几种类型电磁场对成骨样细胞 UMR- 10 6DNA合成的作用进行了一系列实验 ,通过 3 H-脱氧胸苷掺入检测 DNA合成的改变 ,发现特定频率、场强 (或磁感应强度 )组合的电磁场 (脉宽 0 .2 m s,10 V/cm,12 5 Hz附近的脉冲电场 ;1V/cm,10 Hz附近的交变电场 ;0 .5 m T,5 Hz附近的交变磁场 )能促进细胞 DNA合成水平显著提高 ,表明刺激骨细胞生长的电磁场无需复杂的波形。场强对 DNA合成有重要作用 ,只有在合适的场强范围内 ,一定频率的电磁场对细胞才有刺激作用。交变磁场所诱导的电场很微弱 ,表明磁场不只是通过诱导电场发挥作用的 ,研究磁场对细胞的作用应考虑包括磁场直接作用等全部可能的机制。

淫羊藿低糖苷组分对UMR-106细胞及骨质疏松斑马鱼作用的研究

目的研究淫羊藿低糖苷组分(LGFEH)对UMR-106细胞和波尼松龙诱导的骨质疏松斑马鱼的作用。方法将不同质量浓度的LGFEH与UMR-106细胞共同培养后,MTT法测定LGFEH对UMR-106细胞增殖的影响,通过测定细胞内外碱性磷酸酶(ALP)活性评价LGFEH对细胞分化的影响。将受精后3 d的斑马鱼幼鱼分为空白培养基组、0.5%DMSO溶媒对照组、泼尼松龙组、依替膦酸二钠组、LGFEH(1、2、4、8、16μg/m L)组。每天换液至受精后9 d,处死,采用茜素红对各组斑马鱼幼鱼骨骼染色,并以显微检测、数码成像方法定量分析骨骼染色区域。结果 LGFEH不仅可以促进成骨样细胞UMR-106细胞的增殖,促进其合成和分泌ALP,而且能够显著增加斑马鱼头部骨骼染色面积(矿化面积)和染色累积吸光度值(骨密度)。结论 LGFEH体内及体外具有较好的抗骨质疏松作用。

低强度超声联合5-氨基酮戊酸对大鼠骨肉瘤UMR-106细胞的杀伤机制研究

目的研究低强度超声结合5-氨基酮戊酸(5-ALA)对大鼠骨肉瘤UMR-106细胞的杀伤机制。方法将处于对数生长期的大鼠骨肉瘤UMR-106细胞分成对照组、5-ALA组、超声组和超声+5-氨基酮戊酸组(SDT组)。流式细胞仪检测细胞凋亡率,活性氧(ROS)的产生,线粒体膜电位(MMP)的改变;荧光显微镜观察33342染色细胞核的形态改变;透射电镜观察超微结构改变。结果当超声频率为1.0 MHz,声强2.0 W/cm2,5-ALA浓度2 mmol/L,SDT组与对照组、超声组及5-ALA组比较,其凋亡率(32.2±1.4)%,明显增高(P<0.05)。同时伴有ROS(34.4±2.4)%的产生和MMP(42.2±2.6)%的降低。通过33342染色荧光显微镜观察到超声联合5-ALA组的细胞核发生浓缩和碎裂。透射电镜观察到细胞膜、线粒体、高尔基体等细胞器改变及凋亡小体的形成。结论低强度超声联合5-ALA对UMR-106细胞的杀伤作用明显,细胞以凋亡为主,其线粒体途径对UMR-106细胞凋亡起着重要作用。

液氮对Wistar大鼠股骨斜型骨折愈合的影响

目的:利用低温液氮冷冻处理从6周龄正常Wistar大鼠股骨中上段截取的实验骨块20 min后,快速复温取下的骨块,经过常规消毒处理复位,观察低温液氮对Wistar大鼠股骨斜型骨折愈合的影响。方法:6周龄Wistar大鼠10只随机分成两组,A组空白对照组5只,B组实验处理组。通过常规无菌手术处理两组Wistar大鼠右后肢股骨中上段,A组手术制造斜型骨折模型取出骨折标本进行生理盐水浸泡20 min处理后常规消毒后复位,B组手术制造斜型骨折模型取出骨折标本进行低温液氮冷冻处理20 min后迅速27℃无菌生理盐水复温后再常规消毒后复位。结果:实验研究发现,实验组的股骨实验标本回植到Wistar大鼠体内后,数周后观察骨质正常生长,骨折线生长完好,与空白对照组生长恢复情况经过统计学分析,无明显差别,无统计学意义(P >0.05)。结论:通过实验研究发现液氮冷冻技术对Wistar大鼠正常骨骨折愈合的正常生长无影响,可以应用到未来临床研究。

Effects of Pulsed Electric Fields on DNA Synthesis in an Osteoblast-Like Cell Line (UMR-106)

WTFZ] The study of the bioeffects of electromagnetic fields (EMFs) is an important national task in biological physics. Using EMFs to treat bone diseases involves electrical technology, biology, and medicine. But the effects of EMFs are still controversial and the mechanisms are not yet clear. Therefore, more effect is needed to detect the effects at the cellular and molecular levels. This paper investigates the effects of low-energy, low-frequency pulsed capacitively coupled electric fields (PCCEFs) on DNA synthesis in UMR-106 osteoblast-like cells. The equipment can generate 25250Hz frequency, 0300V amplitude and 0.2ms pulse width signal. DNA synthesis is judged by the uptake of 3 H-thymidine ( 3 H-TdR). The results showed that the response of UMR-106 cells to electric field exposure are characterized by: (a) a frequency window for increased DNA synthesis, with a peak near 125Hz; (b) decreased synthesis with increasing electric intensity with repression at 100V/cm and 25Hz.[

microRNA-23a对氟暴露大鼠成骨肉瘤细胞成骨活性的影响及靶基因验证

目的探讨miR-23a对染氟大鼠成骨肉瘤(UMR-106)细胞成骨活性的影响并验证其靶基因。方法体外培养UMR-106细胞,分别转染miR-23a的激动剂(mimics)和抑制剂(inhibitor),再以0、80μmol/L NaF对细胞进行染毒,培养24 h后利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-23a、Ⅰ型胶原(COL1)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)mRNA的表达水平;培养96 h后利用免疫蛋白印记法(Western blot)检测COL1、OPN、Runx2蛋白的表达水平;体外培养人胚胎肾细胞(293T),利用双荧光素酶报告基因法验证miR-23a可能的靶基因。结果与空白对照组相比,NaF组UMR-106细胞miR-23a、COL1、OPN、Runx2 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);与激动剂对照组比较,过表达组miR-23a mRNA表达水平明显上升、COL1 mRNA表达明显降低(P<0.05),Runx2、OPN mRNA表达变化不显著(P>0.05);与抑制剂对照组相比,抑制组miR-23a、COL1、OPN、Runx2 mRNA表达明显降低(P<0.05)。与激动剂对照组比较,过表达组Runx2、OPN蛋白表达水平明显升高(P<0.05),COL1蛋白表达水平变化不显著(P>0.05);与抑制剂对照组相比,抑制组COL1、OPN、Runx2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与过表达组比较,过表达+NaF组OPN mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05),COL1、Runx2变化不显著;与抑制组比较,抑制+NaF组COL1、OPN、Runx2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。过表达miR-23a后的293T细胞中双特异性磷酸酶5(DUSP5 mRNA)和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),抑制mi R-23a后DUSP5表达水平均明显升高(P<0.05);双荧光素酶报告确定DUSP5为miR-23a的靶基因。结论miR-23a能促进染氟UMR-106细胞中成骨活性基因的表达;DUSP5是miR-23a的靶基因。