接骨木中的酚酸类化合物及其对大鼠类成骨细胞UMR106增殖及分化的影响

目的研究接骨木Sambucus williamsii Hance中抗骨质疏松的活性成分,及其对UMR106类成骨细胞增殖和分化的影响。方法以大鼠类成骨细胞UMR106的增殖为指导活性成分分离的指标,利用各种分离手段追踪分离接骨木茎枝60%乙醇提取物活性部位的化学成分,并利用光谱学方法鉴定其结构,检测对UMR106细胞增殖和分化的影响。结果从接骨木中分离得到了7个酚酸类化合物,分别鉴定为香草醛(vanillin,)、香草乙酮(aceto-vanillone,)、松柏醛(coniferyl aldehyde,)、丁香醛(syringaldehyde,)、对羟基苯甲酸(4-hydroxybenzoic acid,)、对羟基桂皮酸(4-hydroxycinnamic acid,)、原儿茶酸(protocatechuic acid,)。检测了化合物、～和对UMR106细胞活性的影响。结论7个酚酸类化合物均为首次从接骨木中分离得到,化合物可同时促进UMR106细胞的增殖和分化,化合物和可促进细胞的增殖,化合物和可促进细胞碱性磷酸酶活性。

接骨木中的三萜类化合物及其对类成骨细胞UMR106的作用

目的用大鼠类成骨细胞UMR106的增殖作为活性追踪指标,对接骨木茎枝的体积分数为60%的乙醇提取物进行抗骨质疏松活性成分的追踪分离;初步考察化合物对UMR106细胞增殖、分化的影响.方法运用各种现代分离手段对活性部位进行追踪分离,用光谱学方法对得到的化合物进行结构鉴定;用比色法测定UMR106细胞的增殖和碱性磷酸酶活性.结果分离得到了5个三萜苷元类化合物,包括白桦醇(betulin,1)、白桦酸(betulinic acid,2)、齐墩果酸(oleanolic acid,3)、熊果酸(ursolic acid,4)、α-香树脂醇(α -amyrin,5),同时还分离到了2个甾醇类化合物,豆甾醇(stigmasterol,6)、胡罗卜苷(sitosterol-3-glucoside,7).结论化合物1～3均为首次从接骨木中分离得到,其中化合物1、2可以促进大鼠类成骨细胞UMR106的增殖,化合物1对UMR106细胞碱性磷酸酶的活性也有促进作用.

葛根素对UMR106细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

目的:研究葛根素对UMR106细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响。方法:UMR106细胞培养于-αMEM培养基中,葛根素处理后光学显微镜下观察其形态学变化,绘制细胞生长曲线,并采用对硝基苯磷酸钠基质动力学法测定UMR106细胞内、外碱性磷酸酶活性。结果:UMR106细胞经葛根素和10-8mol.L-1雌二醇处理后d1,d2和d3,与空白对照组相比,增殖速度均加快,d2差异最显著。与对照组相比,10-8,10-7,10-6mol.L-1葛根素组的增殖率分别为9.3%,23.3%和40.9%,10-8mol.L-1雌二醇组增殖率为49.7%。与对照组相比,细胞经10-6mol.L-1葛根素处理后1 d和2 d时,细胞内ALP活性显著增加(P<0.01);细胞经10-6mol.L-1葛根素处理1 d后,细胞外ALP活性显著增加(P<0.05)。结论:葛根素可以促进成骨样细胞UMR106细胞合成和分泌ALP,提示其具有促进成骨细胞增殖和分化的作用。

补肾方药含药血清对UMR106细胞增殖及碱性磷酸酶活性影响

目的：研究补肾方药含药血清对UMR106细胞增殖及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：将实验动物随机分成空白血清组、低剂量血清组、中剂量血清组、高剂量血清组、阳性对照组,予以分别灌胃制备含药血清。运用CCK8法测定空白血清组、低剂量血清组、中剂量血清组、高剂量血清组、阳性对照组对UMR106细胞24、48、72 h增殖情况的影响;并测定UMR106细胞24、48、72 h的ALP活性情况。结果：各组自身比较后,加药干预24、48、72 h后各组细胞吸光度值与ALP活性均有增加,差异有统计学意义（P〈0.05）;各组与空白血清组比较,中、高剂量血清组和阳性对照组加药干预24、48、72 h后,细胞吸光度值之间均较低,差异有统计学意义（P〈0.05）,而低剂量血清组与空白血清组分别加药干预24、48、72 h的吸光度值比较均无显著差异（P〉0.05）。与空白血清组比较,低、中、高剂量血清组和阳性对照组加药干预24、48、72 h后,细胞ALP活性均较高,差异有统计学意义（P〈0.05）,且剂量浓度越高,ALP活性越高。结论：表明补肾方药（骨康方）含药血清有促进UMR106细胞增殖及ALP活性的作用。随着补肾方药（骨康方）浓度的增高,其含药血清促进UMR106细胞增殖作用减弱,但ALP活性随着浓度增高而增高。

补肾中药对成骨样细胞UMR106增殖的影响(I)

目的 :探索补肾中药对成骨样细胞 UMR10 6增殖的作用。方法 :用各种补肾中药的醇提取物和成骨样细胞 UMR10 6共同体外培养 ,以 MTT法检测细胞的增殖。结果 :在所筛选的 7种补肾中药中 ,仙茅 ,地骨皮、牛膝、山茱萸对成骨样细胞的增殖具有显著的促进作用。结论 :补肾中药可通过促进成骨细胞的增殖来发挥健骨及抗骨质疏松的作用。

补肾中药对成骨样细胞UMR106增殖的影响(Ⅱ)

目的 :探索补肾中药对成骨样细胞 UMR10 6增殖的作用。方法 :用各种补肾中药的醇提取物和成骨样细胞 UMR10 6共同体外培养 ,以 MTT法检测细胞的增殖。结果 :在所筛选的 15种补肾中药中 ,骨脂、蛇床子、锁阳对成骨样细胞的增殖具有显著的促进作用。结论

重组人甲状旁腺激素(1-34)在体外对UMR106细胞增殖、分化功能的影响

目的:观察重组人甲状旁腺激素(1-34)[recombinant human parathyroid hormone(1-34),rhPTH(1-34)]对成骨样细胞 UMR106细胞增殖、分化功能的影响,初步探讨其作用机理。方法:采用体外培养的 UMR106细胞,在连续或间歇2种给药方式下,以1×10^(-12)～1×10^(-7)mol·L^(-1)rhPTH(1-34)作用于细胞,选择 MTT 法考察 rhPTH(1-34)对成骨细胞分裂和增殖的影响,同时测定细胞裂解液中代表成骨细胞分化功能的碱性磷酸酶活性。结果:rhPTH(1-34)连续作用于 UMR106细胞时,能抑制增殖和分化,且浓度越高,抑制作用越强;间歇作用于 UMR106细胞时,能够促进细胞的增殖和碱性磷酸酶活性的升高,并且浓度为1×10^(-10)mol·L^(-1)时,促进作用最强,而高于或低于该浓度,作用减弱。结论:rhPTH(1-34)对 UMR106细胞增殖和分化功能的影响与给药方式和药物浓度有关。连续给药时,抑制 UMR106成骨样细胞的增殖和分化,浓度越高,抑制作用越强;而间歇给药时,促进成骨样细胞的增殖和分化,其剂量反应曲线呈类似钟形曲线。

朝鲜淫羊藿中的木脂素类化合物及其对大鼠骨肉瘤细胞UMR106增殖及分化的影响

目的研究朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum中具有抗骨质疏松活性的成分,考察化合物对大鼠骨肉瘤细胞UMR106的增殖和分化的影响。方法以大鼠骨肉瘤细胞UMR106的增殖作为活性追踪指标,运用各种现代分离手段对朝鲜淫羊藿的水提取物进行活性成分的追踪分离,用光谱学方法对得到的化合物进行结构鉴定,同时检测化合物的活性。结果分离得到5个木脂素类化合物,分别鉴定为:9′-(α-吡喃鼠李糖基)-3,5′-二甲氧基-3′:7,4′:8-二环氧新木脂素-4,9-二醇(Ⅰ)、柏木苷A(Ⅱ)、(+)-环合橄榄树脂素(Ⅲ)、(+)-南烛木树脂酚(Ⅳ)、(+)-异落叶松树脂醇(Ⅴ)。检测了化合物Ⅰ～Ⅴ对UMR106细胞增殖和分化的影响。结论化合物Ⅰ为新化合物,命名为柏木苷C;化合物Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ均为首次从该属植物中分离得到。化合物Ⅱ～Ⅴ对UMR106细胞的增殖及碱性磷酸酶的活性都呈现一定程度的促进作用,化合物Ⅰ只促进细胞的增殖。

补肾健脾活血方含药血清对UMR106细胞成骨分化和骨形成相关蛋白的影响

目的观察补肾健脾活血方含药血清对UMR106细胞成骨分化和骨形成相关蛋白的影响。方法将实验动物随机分成空白血清组、低剂量血清组、中剂量血清组、高剂量血清组、阳性对照组,分别予以灌胃制备含药血清,并对其细胞进行加药培养,测定UMR106细胞培养72 h后的检测增殖、ALP活性以及各组细胞OPN、RUNX2、BMP-2蛋白表达情况。结果与空白血清组比较,低、中、高剂量血清组和阳性对照组加药干预72 h后,细胞吸光度值均较低(P<0.05),而细胞ALP活性均较高(P<0.05),且随着中药血清水平升高,ALP活性提高;与空白血清组相比,经中药含药血清培养后UMR106细胞OPN、RUNX2、BMP-2均显著上调(P<0.05),且呈浓度梯度性变化,各中药含药血清组以高剂量组表达最为明显。结论表明补肾健脾活血方(骨康方)含药血清有促进UMR 106细胞成骨分化和调节骨形成相关蛋白;且随着补肾健脾活血方(骨康方)水平的增高,成骨分化更明显。

青娥丸提取物对成骨样细胞UMR106增殖分化作用的研究

目的 :研究青娥丸提取物对成骨样细胞UMR10 6增殖分化的作用 ,筛选青娥丸防治骨质疏松的有效部位。方法 :利用MTT法和对硝基磷酸盐法 ,考察青娥丸不同提取液对UMR10 6的增殖和分化作用。结果 :青娥丸乙醇提取物在 4.8× 10 -4mg/ml和 4.8× 10 -3 mg/ml浓度时 ,有最强的促细胞增殖和分化的活性 ,萃取后的各个部分均有显著地促细胞增殖作用 ,而只有乙酸乙酯层具有显著的促细胞分化作用。结论 :青娥丸乙醇提取物具有显著促细胞增殖和分化的活性 ,乙酸乙酯层是青娥丸促细胞增殖和分化的主要活性部位。

中药固真方对成骨样细胞UMR106增殖分化的影响

中药固真方具有补肾益精、延缓衰老的作用 .为了进一步探讨其作用机理 ,研究观察了固真方对成骨样细胞 UMR1 0 6DNA合成、原癌基因 c- fos,c- ki- ras m RNA表达以及骨钙素 (osteocal-cin)基因 m RNA表达的影响 .结果表明 :固真方可明显促进 DNA合成 ,且在 1 0 -5稀释度时达高峰 ;增殖相关的原癌基因 (c- fos,c- ki- ras) m RNA表达增强 ;成熟成骨细胞特征性标志蛋白——骨钙素基因 m RNA表达增强 .结果提示 :中药固真方可能通过影响一些与增殖相关的原癌基因及骨钙素基因表达而促成骨样细胞 UMR1 0

含密骨颗粒剂血清对UMR106成骨样细胞增殖及PKC活性的影响

目的 :探讨补肾中药抗骨质疏松的作用机制。方法 :采用血清药理学的方法 ,评价不同浓度下的含密骨颗粒剂血清对UMR10 6成骨样细胞的蛋白激酶C活性、亚型表达及增殖情况的影响。结论 :含密骨颗粒剂的血清可使UMR10 6成骨样细胞中PKC活性增强 ,且主要以cPKCβ 为主 。

骨肽原液促UMR106细胞增殖法的建立及验证

目的建立骨肽原液促UMR106细胞增殖法并进行方法学验证,确定方法的限值和判定标准,为建立骨肽原液的生物活性测定方法提供研究数据。方法1)选取2个厂家的骨肽原液进行UMR106细胞增殖方法建立;2)选用1批样品进行方法学验证;3)选取13个厂家39批的骨肽原液进行方法限值和判定标准的确定。结果1)建立了骨肽原液致UMR106细胞增殖方法;2)重复性、中间精密度和耐用性结果符合方法学验证的要求;3)13个厂家39批骨肽原液中:8个厂家的骨肽原液促UMR106细胞增殖率≥150%,5个厂家的骨肽原液促UMR106细胞增殖率<150%。结论骨肽原液促UMR106细胞增殖方案:以1.0 g·L^-1骨肽原液药物浓度作为限值剂量,增殖率≥150%作为符合规定的判定标准。

GDF11和维生素D对UMR106成骨样细胞增殖的影响

目的观察GDF11和维生素D对UMR106细胞增殖及成骨相关转录因子Runx2 mRNA、Osterix mRNA表达的影响。方法培养UMR106细胞,通过MTT法、ALP活性检测及q-PCR技术测定GDF11(50、100ng/m L)、维生素D(10-6mol/l)及联合应用对细胞增殖、Runx2 mRNA和Osterix mRNA的表达。结果 (1)维生素D(24 h)和GDF11均能促进细胞增殖,维生素D与低浓度GDF11联合应用24、48、72 h,对细胞增殖具有协同效应,而与高浓度GDF11联合应用,则为拮抗效应;(2)与对照相比,除维生素D组,各组ALP活性明显增加;(3)与对照相比,除维生素D组,各组细胞Runx2 mRNA表达均明显提高,Osterix mRNA只在24、48 h高表达。结论 (1)GDF11可通过提高Runx2 mRNA和Osterix mRNA的表达,促进细胞增殖及提高ALP活性;(2)维生素D仅在短时间内促进细胞增殖,可能并非通过Runx2信号通路发挥作用;(3)维生素D影响GDF11促进细胞增殖的作用。

RFP134对UMR106细胞膜脂流动性的影响

癌细胞具有与正常细胞不同的膜脂流动性，导致细胞对生长因子和癌基因产物反应敏感，引起细胞增殖失控。本实验室从植物中发现一种二萜类活性物质－RFP134，在细胞周期和信号传递等多方面表现出有抑制癌细胞增殖，促进细胞分化的作用。本文以大鼠成骨肉瘤细胞（UMR106）和下鼠成骨细胞为模型，研究其对癌细胞膜脂流动性的影响。细胞系UMR106由美国麻省总医院内分泌室赠送。成骨细胞由本实验室分离培养。以不同浓度（20、40、60、80、100μM／L）的RFP134，在同一时间处理细胞，或以最适浓度（50μM／L）在不同时间作用于细胞。DH为荧光标记物，测得的荧光偏值和微粘度值为膜膜流动性指标。结果显示，无论在恒定的时间、以不同浓度的RFP134作用于UMR106细胞(Fig.1B），或以恒定的浓度、在不同时间处理UMR106细胞（Fig.1D），结果均表现为显著降低膜脂流动性。前者，RFP134作用于细胞时，细胞荧光偏振瑟微粘度值逐步升高，其变化呈量效关系；而后者，呈时效关系。但在最适浓度与最佳作用时间，荧光偏振值和微粘度值达饱和状态。在同样条件下，RFP134对正常成骨细胞的膜脂流动性影响小。即：荧光偏振值和微粘度值均在正常范围内保持恒定（Fig.1A；Fig.1C）RFP134降低癌细胞的膜脂流动性，从而改善了它的细胞膜功能，降低了它对生长因子的反应性，恢复了细胞对调节因子的正常反应。这可能是RFP134能够抑制癌细胞增殖，促进细胞分化的机制之一。

补肾方药干预过表达、沉默sFRP1的UMR106细胞增殖情况及β-catenin的影响

目的针对分泌型卷曲相关蛋白1(s FRP1)基因构建沉默及过表达重组腺病毒载体并结合补肾方药含药血清,观察其对大鼠骨肉瘤细胞(UMR106细胞)增殖和β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响。方法构建s FRP1沉默及过表达重组腺病毒载体,制备补肾方药含药血清,将培养好的UMR106细胞分为空白血清+空病毒组、含药血清+空病毒组、空白血清+SFRP1沉默组、含药血清+SFRP1沉默组、空白血清+SFRP1过表达组、含药血清+SFRP1过表达组6组,根据组别不同进行干预,并观察细胞增殖及检测β-catenin蛋白表达。结果与空白血清+空病毒组比较,含药血清+空病毒组、空白血清+SFRP1沉默组、含药血清+SFRP1沉默组的细胞增殖、β-catenin蛋白表达均显著升高。空白血清+SFRP1过表达组、含药血清+SFRP1过表达组的细胞增殖活性、β-catenin蛋白表达降低。其中含药血清+SFRP1沉默组、空白血清+SFRP1过表达组变化最明显。结论沉默s FRP1、补肾方药含药血清可提高UMR106细胞增殖以及β-catenin表达,尤以两者同时干预时的作用最强,而过表达s FRP1则降低UMR106细胞增殖活性,补肾方药含药血清某种程度上可抑制s FRP1的过表达。

接骨木中的木脂素类化学成分及其对UMR106细胞增殖作用的影响

研究接骨木Sambucus williamsii茎枝中的木脂素类化学成分,并讨论它们对大鼠骨肉瘤细胞UMR106增殖的影响。该研究采用D101大孔吸附树脂,硅胶,ODS,Sephadex LH-20,Toyopearl HW-40和RP-HPLC等色谱分离手段对接骨木茎枝60%乙醇提取物进行分离纯化,并运用波谱方法对所分离的化合物进行结构鉴定。从中分离鉴定了6个木脂素类化合物和1个酚酸类化合物,经波谱解析鉴定为threo-guaiacylglycerol-β-O-4’-conifery ether（1）,lirioresinol A（2）,1-hydroxypinoresinol（3）,5-甲氧基蛇菰宁（4）,蛇菰宁（5）,5-methoxy-trans-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol（6）和对羟基苯甲醛（7）,化合物3～7首次从该属植物中分离得到。对所有分离得到的化合物进行了类成骨UMR106细胞增殖活性的测定,化合物1～7均能一定程度上促进UMR106细胞的增殖。

谷氨酰胺对骨肽药物促UMR106细胞增殖试验的影响

目的考察谷氨酰胺对骨肽生物活性测定方法——UMR106细胞增殖试验的影响。方法使用液质联用测定骨肽原液中谷氨酰胺含量,采用CCK-8法检测谷氨酰胺对UMR106细胞增殖影响的浓度范围,以及骨肽原液对UMR106细胞的增殖作用。同时对骨肽原液浓度与相应谷氨酰胺浓度,以及谷氨酰胺试验应用浓度(骨肽原液浓度1 mg/mL)与相应细胞增殖率进行相关性分析。结果骨肽原液中谷氨酰胺含量差异较大,且UMR106细胞对谷氨酰胺较为敏感。骨肽原液浓度与其相应谷氨酰胺含量、谷氨酰胺试验应用浓度与相应细胞增殖率均无显著相关性(r分别为0.1463和0.5471,P均>0.05)。结论骨肽原液中谷氨酰胺不会对骨肽生物活性测定方法——UMR106细胞增殖试验产生影响。

蛇床子化学成分及其对UMR106细胞增殖作用的影响

目的对蛇床子（蛇床Cnidium monnieri的干燥成熟果实）化学成分进行研究,并探讨所得化合物对类成骨细胞UMR106增殖的影响。方法采用多种色谱柱技术进行分离纯化,通过波谱分析鉴定化合物结构。对所分离得到的化合物进行类成骨细胞UMR106增殖活性的测试。结果从蛇床子75%乙醇提取物中分离得到了9个化合物,分别鉴定为5,7-二羟基-6,8-二甲氧基-2-甲基色原酮（1）、5-羟基-2-羟甲基色原酮（2）、（＋）-marmesin（3）、佛手酚（4）、异佛手柑内酯（5）、7-羟基-8-异戊烯二醇基香豆素（6）、murraol（7）、松柏醛（8）、间-羟基苯甲酸（9）。样品溶液浓度为1×10-10 mol/L,化合物1、3、7对类成骨细胞UMR106的增殖促进率分别是31.55%、32.39%和30.87%。结论化合物1~6为首次从蛇床属植物中分离得到。化合物1、3、7能促进UMR106细胞的增殖。

蛇床子中的色原酮类化学成分及其对UMR106细胞增殖的影响

目的对蛇床Cnidium monnieri干燥成熟果实中的色原酮类化学成分进行研究,并探讨其对类成骨细胞UMR106增殖的影响。方法采用多种色谱柱技术进行分离纯化,通过波谱分析鉴定化合物结构。对所分离得到的化合物进行类成骨细胞UMR106增殖活性的测试。结果从蛇床子75%乙醇提取物中分离得到10个色原酮类化合物,分别鉴定为cnidimoside A（1）、cnidimol B（2）、前胡色原酮（3）、5,7-二羟基色原酮（4）、5-O-甲基维斯阿米醇（5）、5-O-甲基维斯阿米醇苷（6）、亥茅酚（7）、2,5-二甲基-7-羟基色原酮（8）、升麻素（9）、5-羟基色原酮-7-O-β-葡萄糖苷（10）。在样品溶液浓度为0.10 nmol/L条件下,化合物1、5、9、10对类成骨细胞UMR106的增殖促进率分别是30.23%、31.56%、35.29%和33.36%。结论化合物3～10为首次从蛇床属植物中分离得到。化合物1、5、9、10能一定程度上促进UMR106细胞的增殖。