微小脲原体UP3-00750基因编码蛋白的表达及生物信息学分析

目的构建微小脲原体UP3-00750基因的原核表达载体,对其编码的蛋白进行表达并进行生物信息学分析。方法利用Primer Premier 5.0软件设计引物,利用PCR方法扩增UP3-00750基因,经限制性内切酶双酶切后与同酶消化的pGEX-6p2于16℃在T4连接酶作用下连接16 h,连接产物转入大肠埃希菌XL1-Blue中,IPTG诱导GST-UP3-00750融合蛋白的表达,并采用相关生物信息学软件对其进行分析。结果对构建的pGEX-6p2-UP3-00750重组质粒测序,所得序列与NCBI中序列比对,与U.parvum strain hebnu uu3序列的同源性为100%。诱导的融合蛋白经SDS-PAGE分析显示其分子质量与GST-UP3-00750融合蛋白的预期大小一致。生物信息学分析该假设蛋白由159个氨基酸组成,分子式为C_(86)0_(H1369)N_(223)O_(254)S_(2),理论等电点(pI)为6.43,不稳定指数为36.70,脂肪族指数为112.14;其二级结构中α-螺旋(Hh)占39.62%,β-折叠(Ee)占19.50%,无规则卷曲(Cc)占40.88%,无β-转角;属于无信号肽的跨膜蛋白;蛋白质互作提示该基因编码的蛋白与atpA-1、atpD-1、UU044、UU045、UU046、UU047、UU048、UU049、UU050、UU052相关联。结论成功构建了GST-UP3-00750原核表达载体,在大肠埃希菌中表达GST融合蛋白。该蛋白为无信号肽的跨膜蛋白,可能参与ATP合成代谢途径。