不同品种苦荞UPLC-DAD-CAD指纹图谱和有效成分含量比较

建立13个不同品种苦荞麦的超高效液相-二极管阵列检测器-电雾式检测器(UPLC-DAD-CAD)指纹图谱,并测定4种主要成分含量,为科学评价和控制其质量提供可靠依据。采用ThermoFisher AccucoreTMC18色谱柱(3.0 mm×100mm,2.6μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱;检测波长为285nm;CAD检测器雾化温度为50℃,采集频率和过滤常数分别为10 Hz和5 s;采用夹角余弦法进行相似度评价,建立了苦荞麦UPLC-DAD-CAD特征指纹图谱共有模式。标定了20个电雾式检测共有峰与7个紫外检测共有峰,在CAD检测器中各品种间相似度均大于0.999,DAD检测器中各品种间相似度均大于0.948;同时指认了芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素和山奈酚4种主要成分,并以芦丁的峰面积为标准,计算了13个品种苦荞麦中山奈酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素和山奈酚3种待测成分的响应比例值,结果信号响应均以CAD检测器较优。分析比较了4种成分在不同品种苦荞麦中的含量差异,结果表明生长在四川盆地的川荞1号、川荞2号、西荞1号和西荞2号4种黄酮含量相对较低,与其他大部分品种苦荞麦相比,皆存在统计学差异,而生长在海拔高光照强的云贵高原和川西高原的迪苦、黔荞和米荞4种黄酮含量相对较高。本研究首次使用UPLC-DAD-CAD方法建立了不同品种苦荞麦的指纹图谱并对其有效成分含量进行了测定,为苦荞麦的质量控制和资源评价奠定了基础。

UPLC-DAD/ESI-TOF-MS鉴定黑脉羊肚菌多酚化合物

以黑脉羊肚菌为原料,分离提取羊肚菌多酚(游离酚和结合酚),对提取物中酚类物质的含量及抗氧化活性进行研究,并采用超高效液相色谱-二极管阵列检测器/电喷雾飞行时间质谱对黑脉羊肚菌游离酚和结合酚的组分进行鉴定。结果表明,黑脉羊肚菌多酚主要为游离酚,且游离酚的DPPH自由基清除率、还原力及氧自由基吸收能力都显著强于结合酚(P<0.05),而两者清除ABTS^+·能力相当。从黑脉羊肚菌多酚中鉴定出15种组分,分别是没食子酸、焦性没食子酸、原儿茶酸、对羟基苯甲酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、荭草素、芦丁、金丝桃苷、白藜芦醇、木犀草素、槲皮素、肉桂酸、阿魏酸,游离酚提取物有15种组分,结合酚提取物有14种组分。

甘遂半夏汤的UPLC-DAD指纹图谱研究

目的:建立甘遂半夏汤的指纹图谱,为完善其质量控制提供参考。方法:采用超高效液相色谱-二极管阵列检测器(UPLC-DAD)法建立13批甘遂半夏汤的指纹图谱,色谱柱为Waters Acquity UPLC HSS T_3,流动相为0.1%甲酸-乙腈(梯度洗脱),流速为0.5 m L/min,检测波长为254 nm,柱温为35℃,进样量为4μL。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2004A版)对指纹图谱进行评价,并采用SPSS 13.0软件对各样品进行聚类分析。结果:方法学考察中,各色谱峰的保留时间和相对峰面积的RSD均小于2%(n=6)。13批甘遂半夏汤指纹图谱的相似度均大于0.95,确定了21个共有色谱峰,并指认了其中芍药苷、甘草苷及甘草酸3个共有色谱峰。聚类分析结果显示,甘遂半夏汤样品分为2类。结论:建立的UPLC-DAD指纹图谱体现了甘遂半夏汤组分的整体特征,为甘遂半夏汤制剂质量标准的建立提供了可靠依据。

基于ATR-FTIR结合UPLC-DAD技术鉴别百合及其类似品

目的基于傅里叶变换衰减全反射红外光谱(ATR-FTIR)结合超高效液相色谱-二极管阵列检测器(UPLC-DAD)技术快速区分不同品种百合药材粉末。方法采用ATR-FTIR采集百合样品红外光谱数据并导入Simca软件,建立正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)模型,在此基础上,联用UPLC-DAD技术测定正品百合、伪品金百合及微波干燥卷丹中王百合苷A含量,分析其差异性。结果OPLS-DA二维得分图及层次聚类分析图对卷丹与百合、卷丹与伪品金百合、热风干燥卷丹与微波干燥卷丹进行了良好的分类。卷丹的王百合苷A含量为2.09~3.28 mg/g,百合的王百合苷A含量为1.36~1.77 mg/g,伪品金百合的王百合苷A含量为1.03~1.05 mg/g,微波干燥卷丹的王百合苷A含量为3.92~4.01 mg/g。卷丹和百合中的王百合苷A含量高于伪品金百合,微波干燥卷丹的王百合苷A含量高于普通热风干燥卷丹。结论本研究建立的方法操作简单、方便、快速,可为百合饮片、百合药膳产品开发及相关药材的质量控制提供借鉴。

HPLC-DAD和UPLC-MS/MS对蔓花生中二苯乙烯类化合物的研究

采用HPLC-DAD和UPLC-MS/MS对蔓花生中白藜芦醇、白藜芦醇苷和二苯乙烯苷三种二苯乙烯类化合物进行鉴定,建立HPLC-DAD同时测定三种化合物含量的方法。HPLC-DAD分析采用依利特ODS1色谱柱,柱温40℃,流动相A为甲醇,B为1%乙酸水溶液,流速1.0 mL/min。UPLC-MS/MS采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,流动相A为乙腈,B为水,电喷雾离子源,负离子检测,数据采集方式为多反应监测模式(MRM)。结果表明:蔓花生根、茎和叶中白藜芦醇含量分别为66.28、90.83和81.56μg/g,白藜芦醇苷含量分别为123.78,302.77和236.53μg/g,根和茎中二苯乙烯苷含量分别为673.60和764.65μg/g,叶中未检测到二苯乙烯苷。

UPLC-DAD法同时测定刺五加叶中Chlorogenic acid,Rutin,Hyperoside及Isoquercitrin四种成分的含量

目的：建立UPLC同时定量刺五加叶药材中Chlorogenic acid,Rutin,Hyperoside及Isoquercitrin等4种有效成分的方法。方法：色谱柱：HSS T3（100 mm×2.1 mm,1.8μm,Waters）;柱温：40℃;流速：0.4m L/min;进样量：5μL;流动相A：0.1%甲酸水溶液,流动相B：乙腈;梯度洗脱,洗脱条件：0-8 min,88%-75%A;8-9 min,75%-88%A;9-10 min,88%-88%A;紫外检测波长：360 nm。结果：对9批产地的刺五加叶药材进行测定,绿原酸最高的是虎林（1.287 mg/g）;芦丁含量最高的是鸡东（0.122mg/g）;金丝桃苷含量最高的是宾县（0.528 mg/g）;异槲皮苷含量最高的是五常（0.337 mg/g）。结论：该方法可用于刺五加叶中四种成分的含量测定,本研究所建立的方法稳定性、精密度、重复性良好,适用于刺五加叶的含量测定;不同来源的药材成分含量差异显著,对刺五加实施多指标的含量控制是保证其临床药用安全可控的必要途径。

HPLC-DAD/ELSD、UPLC-MS/MS分析复方五仁醇胶囊中皂苷类成分

目的:分析复方五仁醇胶囊中皂苷类成分。方法:分别采用HPLC-DAD/ELSD、U-PLC-MS/MS检测,通过与对照品色谱图比对及比较制剂和对照品提取离子流色谱图(EIC),并通过质谱图相关离子峰分析,鉴别制剂中的皂苷类成分。结果:HPLC-DAD/ELSD检测出三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1,未检测到柴胡皂苷A和D;UPLC-MS/MS除检测到上述3种三七皂苷类成分外,还检测到柴胡皂苷D,但柴胡皂苷A仍未检测到。结论:复方五仁醇胶囊中存在三七和柴胡所含皂苷类成分。

UPLC-DAD法测定款冬花中克氏千里光碱的含量

目的:建立UPLC-DAD法测定款冬花中克氏千里光碱的含量。方法:采用沃特世CORTECS UPLC C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.6μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(15∶85);检测波长220 nm;柱温:30℃;进样量:1μL。结果:克氏千里光碱在2.048~81.82μg·mL^(-1)浓度范围内与峰面积呈现良好的线性关系(r=1.0000);平均加样回收率分别为89.46%,RSD分别为2.80%;10批样品中克氏千里光碱的含量为0.00236~0.00534%。结论:该方法简便、快速,可用于款冬花中克氏千里光碱的含量测定。

UPLC-DAD-FLD测定土壤中多环芳烃

本文建立了以加速溶剂萃取（ASE）和固相萃取为提取和净化手段，采用超速液相色谱-二极管阵列-荧光检测器（UPLC-DAD-FLD）串联捡测土壤中16种多环芳烃的方法。通过色谱柱的比较，选择更小粒径和内径的分析柱（Supelco SILTMLC．PAH，100×3．0mm，3μm），缩短了分析时间，也节省了溶剂（乙腈），满足大量样品的快速灵敏分析的需要。在保留时间定性的基础上，利用PDA获取的紫外扫描光谱图与目标化合物的特征吸收标准谱图比较，提高了定性分析的准确性。在优化的实验条件下，该方法显示出良好的线性关系（r〉0．999）和精密度（RSD〈10％），16种多环芳烃的检出限在0．005—1．33μg／kg之间，并成功应用于样品分析，样品加标回收率为71．4％～120％。实验中为了确保整个分析过程的可靠性，替代物的加标回收率控制在50％-150％之间；土壤标准参考物的测定结果都在预测值范围内，验证了该方法的准确性。

UPLC-DAD同时测定杏苏止咳颗粒中甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸含量

目的:建立UPLC-DAD法同时测定杏苏止咳颗粒中甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸3种成分含量。方法:采用Agilent SB-C18色谱柱(1.8μm,2.1×100mm);乙腈-0.01%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱;流速为0.3 mL·min-1;检测波长为278 nm;柱温为30℃。结果:甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸进样量分别在0.32~9.58 ng(r=0.99997)、4.63~92.06 ng(r=0.99996)、0.41~8.13 ng(r=0.99985)线性范围内线性关系良好,加样回收率分别为98.0%、97.8%、97.6%,RSD分别为0.67%、0.68%、0.73%。结论:本方法简便、快速、准确,可更好的控制杏苏止咳颗粒的质量。

UPLC-DAD法同时测定预调鸡尾酒中24种水溶性合成色素

建立了预调鸡尾酒中24种水溶性合成色素的超高效液相色谱-二极管阵列检测器(UPLC-DAD)分析方法,对流动相、色谱柱、洗脱梯度等色谱条件进行了优化,确定最佳分离条件为:Waters BEH C18色谱柱(2. 1 mm×50 mm,1. 7μm),流动相为10 mmol/L乙酸铵(pH 6. 25)和甲醇-乙腈(2∶8,体积比),采用梯度洗脱,在16 min内实现24种色素的快速分离。24种色素在0. 01～50. 0 mg/L范围内具有良好的线性关系(r^2> 0. 998 0),方法检出限为0. 66～27. 78μg/L,定量下限为2. 19～92. 59μg/L;日内相对标准偏差(RSD)为0. 04%～5. 3%,日间RSD为0. 08%～6. 4%;回收率为53. 4%～114%。该方法具有所测色素种类多、分析时间短、检出限低等优势,已成功应用于市售预调鸡尾酒样品的检测。

UPLC-DAD法快速测定改善睡眠类保健食品中违法添加的14种精神药物

建立超高效液相一二极管阵列检测方法，用于同时快速测定改善睡眠类保健食品中违法添加的14种精神药物（阿普唑仑、艾司唑仑、氯硝西泮、地西泮、马来酸咪达唑仑、三唑仑、硝西泮、巴比妥、氯氮卓、劳拉西泮、异戊巴比妥、奥沙西泮、苯巴比妥、司可巴比妥钠）。采用ZORBAXSB—C18（2．1mm×100mm，1．8μm）色谱柱，流动相甲醇．0．2％乙酸溶液，梯度洗脱，流速为0．4mL／min。采集210nm（0-7．70min）、230nm（7．70～13．50rain）色谱合成图进行初筛和定量。并根据14种药物的光谱特征建立光谱库，用于检出化合物的确证。结果表明：14种精神药物在13．5min内可有效分离，在5-50μg／mL或10～100gg／mL的线性范围内相关系数（n均大于0．9995，平均回收率在固体基质中为80．4％～106．2％；在液体基质中为80．7％～102．3％，相对标准偏差（RSD）都小于7％，检测限为3-6ng。该方法简便、快速、灵敏度高且重复性好。可作为检测改善睡眠类保健食品中违法添加化学药物的快速测定方法。

UPLC-DAD法同时测定健脾方中7种成分含量的研究

目的采用超高效液相色谱—二极管阵列检测法(UPLC-DAD)建立健脾方中7种成分(尿囊素、橙皮苷、芸香柚皮苷、异橙黄酮、川陈皮素、3, 5, 6, 7, 8, 3’, 4’-七甲氧基黄酮、桔皮素)含量的测定方法,并开展其应用研究。方法采用Agilent 1290 series超高效液相色谱仪,进行紫外多波长检测(尿囊素:224 nm;橙皮苷、芸香柚皮苷:284 nm;异橙黄酮:342 nm;川陈皮素、3, 5, 6, 7, 8, 3’, 4’-七甲氧基黄酮、桔皮素:333 nm),并完成方法学验证。同时将此方法用于分析不同提取方法制备的健脾方提取液中7种化学成分的含量差异。结果以上7种成分在相应的浓度范围内,化合物浓度与色谱峰峰面积的线性关系良好(r>0.999 3)。方法学考察结果表明,该方法精密度、重复性、样品溶液的稳定性及准确度均良好。不同提取方法制备的健脾方提取液中7种成分的含量差异较大,水煎液中尿囊素浓度最高,乙醇回流液中橙皮苷、芸香柚皮苷、异橙黄酮、川陈皮素、3, 5, 6, 7, 8, 3’, 4’-七甲氧基黄酮和桔皮素浓度均高于水煎液。提示在健脾方提取纯化工艺中,应从多指标成分含量分析的角度评价提取制备工艺选择的合理性。结论本研究基于UPLC-DAD建立的健脾方中7种成分的含量测定方法稳定可靠,能够为其工艺研究和质量控制提供参考。

减肥类中成药及保健食品中33种非法添加化学物质的UPLC-DAD-ESI-Q-TOF/MS快速检测

目的:建立快速筛查、确证、定量减肥类保健食品及中成药中33种非法添加化学物质的分析方法。方法:采用超高效液相色谱-二极管阵列检测器-飞行时间质谱法(UPLC-DAD-ESI-Q-TOF/MS),Waters Acquity HSS T3 C18色谱柱(2.1 mm×100mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 ml·min^-1,柱温为30℃,检测波长为200~400 nm,利用保留时间、光谱图及质谱一、二级质量数做定性分析,对检出成分进行一级质谱定量测定。结果:33种化学物质均达到有效保留,分离良好,紫外光谱及质谱裂解特征明显。方法学验证结果表明33种对照品在线性范围内相关系数均大于0.99,回收率为79%~102%。15种减肥类保健食品及中成药的分析结果:2批检出呋塞米,8批检出盐酸西布曲明、1批检出氟西汀,1批检出麻黄碱,2批检出酚酞,1批检出氢氯噻嗪,1批检出咖啡因。结论:结果表明该方法简单便捷、准确,分离效果好,能够达到快速检验减肥类中成药及保健食品中非法添加化学成分的目的。

基于UPLC-DAD指纹图谱结合化学计量学及6种成分含量测定的桑叶质量研究

[目的]建立超高效液相色谱法(UPLC)-DAD指纹图谱方法,结合化学计量学与多指标含量测定综合评价桑叶质量。[方法]采用Agilent EC-C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm),柱温35℃;检测波长分别为290 nm(检测没食子酸甲酯、隐绿原酸)和360 nm(检测芦丁、异槲皮苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷);流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速0.2 mL/min,进样体积2μL。建立22批桑叶药材的UPLC-DAD指纹图谱,采用聚类分析和主成分分析等化学计量学方法,以没食子酸甲酯、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷对桑叶进行质量评价。[结果]22批桑叶UPLC-DAD指纹图谱指认了16个共有峰,不同批次的桑叶药材与对照指纹图谱相似度差异较大;通过对照品指认6个共有峰,6种指标性成分分离度良好,各成分均具有较宽的线性范围和良好的线性关系(r2>0.999),有良好的精密度、稳定性、重复性和加样回收率。[结论]采用UPLC-DAD技术所建立指纹图谱联合6种指标成分含量测定方法操作便捷、结果准确、重复性好,为桑叶的质量控制提供科学依据。

UPLC-DAD检测减肥类中药制剂及保健食品中的4种非法添加成分

目的：针对减肥类中药制剂及保健食品,建立了可能非法添加的酚酞、西布曲明、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明等4种成分的超高效液相色谱-二极管阵列联用的检测方法。方法：采用Phenomenex Luna C18（2）100A色谱柱（150 mm×2.00 mm,3μm）,流动相为磷酸盐缓冲液（50 mmol/L磷酸氢二钾以磷酸调节p H值为6.0）及甲醇,梯度洗脱,柱温为35℃,流速为0.2 m L/min,进样量为5.0μL,检测器为DAD检测器。结果：各成分检出限浓度为30 ng/m L,定量限浓度为50 ng/m L,线性范围为50~1 000 ng/m L,在线性范围内相关系数均在0.99以上,平均加样回收率在96.0%~101.2%。结论：建立的方法简便、快速、准确、灵敏度高、专属性好,用于减肥类中药制剂及保健食品中非法添加的快速检测优于现行法规标准所列的高效液相色谱法。

UPLC-DAD-Q-TOF-MS/MS测定缓解体力疲劳类保健品中非法添加的化学物质

目的：利用超高效液相-串联四级杆-飞行时间液质联用系统（UPLC-DAD-Q-TOF-MS/MS），建立快速可靠灵敏的测定缓解体力疲劳类保健食品中违法添加西地那非、他达拉非、伐地那非、红地那非、豪莫西地那非、羟基豪莫西地那非、那莫西地那非、氨基他达拉非、伪伐地那非、硫代艾地那非、那红地那非和育亨宾等12种化学药品的液质联用检测方法。方法：采用UPLC-DAD-Q-TOF-MS/MS液质联用仪，以Agilent ZORBAX Eclipse plus C18为色谱柱；以0.1%甲酸-0.01 mol/L乙酸铵水溶液和甲醇梯度洗脱，流速为0.3 mL/min；ESI正离子模式，一级、二级质谱全扫描，进行 UPLC-DAD-Q-TOF-MS/MS的定性及定量分析。结果：经方法学验证，本方法在2～80μg/mL浓度范围内线性良好、精密度（RSD%）小于2%、回收率在80.5%～98.7%之间。结论：本方法快速、准确、灵敏度高、分离度高，为快速筛查缓解体力疲劳类保健食品中非法添加化学物质提供有力工具。

基于UPLC-Q-Orbitrap HRMS的痂状炭角菌子实体化学成分分析

痂状炭角菌(Xylaria sp.L1)是一种高价值药用真菌,属于炭角菌科,它生长在野外废弃的白蚁巢穴周围。文章应用超高效液相色谱(ultra-high performance liquid chromatography,UPLC)-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(quadrupole-orbitrap high-resolution mass spectrometry,Q-Orbitrap HRMS)技术对痂状炭角菌子实体80%甲醇提取物的化学成分进行定性分析。采用Welch RP-C18柱色谱(150 mm×2.1 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱;高分辨质谱分析采用电喷雾离子源(electrospray ionization source,ESI),在正、负离子模式下扫描采集数据;从痂状炭角菌子实体中共检测到41种化合物,包含6种萜类化合物、4种苯丙素类化合物、14种生物碱类化合物、10种长链不饱和脂肪酸类化合物、7种甾体类化合物,其中有18种化合物为痂状炭角菌子实体中首次发现。该研究对痂状炭角菌子实体化学成分进行较全面地分析,为该真菌的深入研究奠定基础。

UPLC法比较骨碎补不同炮制品中柚皮苷、5-羟甲基糠醛含量

目的:测定骨碎补炮制前后各样品中柚皮苷、5-羟甲基糠醛(5-HMF)含量。方法:采用UPLC法,ACQUITY UPLC BEH-C18柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相:乙腈(A)-水(B)梯度洗脱;流速0.2 mL/min;紫外检测波长为283 nm;柱温25℃;进样量1μL。结果:骨碎补不同炮制品中5-羟甲基糠醛含量结果为:蜜烫品(0.37 mg/g)>砂烫品(0.30 mg/g)>盐烫品(0.28 mg/g)>蜜炙品(0.25 mg/g)>酒烫品(0.12 mg/g)>盐炙品(0.07 mg/g)>酒炙品(0.05 mg/g)>生品(0 mg/g,未检出);柚皮苷含量结果为:蜜炙品(46.53 mg/g)>盐烫品(40.58 mg/g)>盐炙品(35.99 mg/g)>生品(32.27 mg/g)>酒烫品(31.23 mg/g)>酒炙品(28.10 mg/g)>蜜烫品(24.93 mg/g)>砂烫品(9.12 mg/g)。结论:不同炮制方法对骨碎补中柚皮苷、5-羟甲基糠醛含量均有一定的影响。

大鼠血浆中红景天苷UPLC-MS/MS检测方法的建立及其在药动学研究中的应用

目的建立红景天苷在大鼠血浆内的UPLC-MS/MS检测方法,研究红景天苷在大鼠体内的生物利用度。方法以茶碱为内标,运用UPLC-MS/MS法检测大鼠灌胃(20 mg/kg)和尾静脉注射(5 mg/kg)给药后血浆中红景天苷的血药浓度,应用DAS2.1.1药动学软件对数据进行分析。结果主要药动学参数:口服红景天苷在大鼠血浆中的消除半衰期(t1/2 z)为(49.56±19.26)min;最高血药浓度(Cmax)为(3.28±0.66)mg/L;平均滞留时间(MRT0-t)为(56.84±6.61)min;曲线下面积(AUC0-∞)为(235.95±65.72)mg/(L·min);清除率(CL)为(0.091±0.027)L/(min·kg);经剂量校正后,口服的绝对生物利用度为33.17%。结论该方法灵敏度高,专属性强,适用于红景天苷在大鼠血浆中血药浓度的测定。