A Stability Indicating UPLC Method for Finasteride and Its Related Impurities

The objective of the present research work is to develop a gradient, reversed-phase liquid chromatographic (RP-UPLC) method for the determination of Finasteride in pharmaceutical bulk drugs for assay and its related impurities. The chromatographic separation was achieved on a Waters ACQUITY UPLC BEH Phenyl Column (150 mm × 2.1 mm, 1.7 μm), The gradient LC method employs solutions A and B as mobile phase. The solution A Contains 2.5 mM ortho phosphoric acid (Buffer) and solution B contains a mixture of acetonitrile and water in the ratio of (90:10 v/v). The flow rate was 0.22 ml/min and the detection wavelength was 210 nm. In the developed UPLC method, the resolution between Finasteride and its potential impurities, namely Imp-1, Imp-2, Imp-3 and Imp-4 was found to be greater than 2.0. The drug was subjected to stress conditions of hydrolysis, oxidation, photolysis and thermal degradation. Considerable degradation was found to occur in alkaline medium and oxidative stress conditions. Degradation product formed during oxidative hydrolysis was found to be Imp-1. The stress samples were assayed against a qualified reference standard and the mass balance was found close to 99.5%. The developed RP-UPLC method was validated with respect to linearity, accuracy, precision and robustness. The limit of quantification of Imp-1, Imp-2, Imp-3 and Imp-4 were 0.06, 0.06, 0.05 and 0.036% (of analyte concentration, i.e. 0.5 mg/ml) with 1μl injection volume. The developed method was found to be linear in the range of 2.5 - 15 μg/mL with correlation coefficient of 0.999 for assay procedures and found to be linear in the range of 0.05 - 3 μg/mL with correlation coefficient of 0.999 for related impurities.

基于UPLC法测定建昌帮姜制厚朴主成分含量变化差异

目的比较厚朴不同炮制品主成分含量差异,为优选厚朴优质饮片提供科学依据。方法用UPLCCLASS-H色谱(SyncronisC185μm,150 mm×4.6 mm)。以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 ml/min,柱温40℃,检测波长290 nm,并对厚朴不同炮制品中木兰花碱、和厚朴酚、厚朴酚等主成分含量比较分析。结果炮制厚朴与其他不同炮制品相比,其所含木兰花碱、厚朴酚、和厚朴酚含量从高到低分别为生品厚朴、姜制厚朴、姜煮厚朴。结论不同炮制方法会影响厚朴主成分的含量,此研究采用的成分分析方法稳定可靠,简单易行,可为深入研究厚朴奠定基础。

基于UPLC-Triple-TOF-MS技术初步分析雅安产道地中药材川牛膝中生物碱成分

采用乙醇提取、成盐、二氯甲烷萃取等方法初步富集川牛膝总生物碱,确定最优提取分离工艺;通过超高液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱法,采用Waters XSelect CSH-C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7μm),梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,测试波长254 nm,柱温为50℃,进样量为3μL,采用电喷雾离子源正离子模式,扫描范围为m/z 100~1500,并采用全扫描模式对样品数据进行收集,根据高分辨质谱结合二级质谱所得信息对川牛膝中生物碱类化学成分进行快速鉴定,通过对比分子离子峰和碎片离子的质荷比、Scifinder和Reaxy数据库及相关文献,推测出两种生物碱成分。研究建立的生物碱类化学成分提取与分析方法,为提高雅安产道地中药材川牛膝的质量控制水平及后续阐明药效物质基础提供了实验依据。

基于响应面法和UPLC-MS/MS优化舒心安神膏的提取工艺

目的利用响应面法优化舒心安神膏的提取工艺。方法以超高效液相色谱法同时测定的莫诺苷、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、6-姜辣素含量,出膏率及总多糖含量为综合评分指标,分别考察加水倍数、提取时间、提取次数对舒心安神膏提取工艺的影响。在单因素试验基础上,采用响应面法优化舒心安神膏的提取工艺。结果经过单因素试验及响应面法优化后的最佳工艺条件为:加10倍水,煎煮2次,每次提取90 min。此条件下综合评分预测值与实测值相比,RSD值为0.82%。结论通过响应面法优化得到的舒心安神膏提取工艺合理、可行,可为其后续的开发研究提供实验参考。

基于UPLC-MS/MS与G1-熵权法多指标综合评分优选微乐方提取工艺

目的建立同时测定微乐方水提物中6个指标性成分含量的方法,并优选微乐方的水提取工艺。方法采用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS),Waters CORTECS C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm),以0.1%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速0.25 mL/min,柱温40℃,进样量2μL,电喷雾负离子离子源,正负离子切换多反应监测(MRM)模式。以没食子酸、牡荆素、芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、甘草酸含量和干膏率为评价指标,采用G1-熵权法确定各指标权重系数,以加水量、提取时间和提取次数为考察因素,通过正交试验确定提取工艺优化参数。结果微乐方水提物中6个成分在考察的浓度范围内线性关系良好(r>0.999),平均加样回收率为96.83%~102.56%,RSD<4.0%。最佳工艺参数为:饮片加12倍量水浸泡2 h,提取2次,每次1.5 h。结论本研究建立的UPLC-MS/MS同时测定微乐方中6个成分的方法快速、简便、灵敏度高,优选的提取工艺稳定可行,可为制剂开发提供依据。

UPLC-MS/MS法测定加味藿香正气丸中29种禁用农药残留

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定加味藿香正气丸中农药残留量。方法:以十八烷基键合硅胶为填充剂(10 cm×21 mm,1.7μm);以0.1%甲酸溶液(含5 mmol·L^(-1)甲酸铵)为流动相A,以乙腈-0.1%甲酸溶液(含5 mmol·L^(-1)甲酸铵)(95:5)为流动相B,梯度洗脱;流速0.2 mL/min,柱温40℃。质谱分析以三重四级杆串联质谱仪检测,电喷雾(ESI)离子源,正离子扫描模式,多反应监测(MRM)。对22个厂家3种剂型共101批加味藿香正气丸样品测定29种禁用农药的残留情况。结果:29种禁用农药化学成分浓度在5~200 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.992,回收率在52.8%~143.8%,101批抽检加味藿香正气丸中29种禁用农药成分均未检出。结论:该法可用于检测加味藿香正气丸农药残留含量,市场上加味藿香正气丸样品禁用农药污染风险较低。

基于UPLC-MS/MS多指标加权综合评分法优选百解合剂提取工艺

目的采用多指标加权综合评分法优选百解合剂的提取工艺,为该制剂的研发和生产提供参考。方法采用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定百解合剂提取液中13种指标性成分柴胡皂苷A、柴胡皂苷D、黄芩苷、芍药苷、(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、迷迭香酸、厚朴酚、和厚朴酚、甘草苷、甘草酸、6-姜辣素的含量,采用Waters CORTECS C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水,梯度洗脱,流速为0.25 mL/min,柱温45℃,电喷雾正负离子切换多反应监测模式。在单因素试验基础上,采用正交试验设计,以13种成分提取量和全方得膏率为评价指标,考察加水量、提取时间、提取次数对提取效果的影响,并通过加权综合评分法优选百解合剂的提取工艺。结果最佳提取工艺参数为加10倍量水浸泡2 h,提取2次,每次2.5 h,13种成分在相应浓度范围内线性关系良好(r>0.9977),平均加样回收率为98.19%~102.39%,RSD≤3.3%。结论本研究优选的提取工艺稳定可行,可为百解合剂进一步开发利用提供依据。

UPLC-Q-TOF-MS测定扶正膏药渣中特女贞苷、丹皮酚、芒柄花素、藁本内酯的含量

目的:采用UPLC-Q-TOF-MS法测定扶正膏药渣中特女贞苷、丹皮酚、芒柄花素、藁本内酯的含量。方法:采用安捷伦ZORBAX Eclipse Plus C 18柱(3.0 mm×100 mm,1.8μm),以乙腈-0.05 mmol·L^(-1)甲酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,进样量为2.0μL,柱温为30℃;质谱条件如下:离子源为ESI,正、负模式下采集数据,喷雾电压4000 V;离子化温度325℃,外标法定量。结果:特女贞苷、丹皮酚、芒柄花素、藁本内酯的线性范围分别为1.0~100.0,1.0~100.0,1.1~112.0,0.5~50.0μg/L,且线性关系均良好(R≥0.9990);精密度、稳定性、重复性试验结果显示4个中药成分的峰面积RSD均≤5.0%;4个中药成分的平均加样回收率分别为94.90%~109.14%(RSD<4.0%,n=6)。结论:建立的UPLC-Q-TOF-MS法检测扶正膏药渣中的特女贞苷、丹皮酚、芒柄花素、藁本内酯的含量结果准确可靠,证实了药渣中还残留一定量的活性成分,具有一定的营养价值,为药渣的综合开发利用提供依据。

化妆品中防腐剂检测的HPLC与UPLC方法转换

以2021年新修订的《化妆品安全技术规范》4.1甲基异噻唑啉酮等23种组分标准方法为基础,通过对高效液相色谱(HPLC)参数的转换以及优化色谱条件,建立超高效液相色谱法进行苯甲酸、苯甲醇、4-羟基苯甲酸酯类等8种防腐剂的分析,对比HPLC方法与UPLC方法结果差异并对UPLC方法进行方法验证。实验结果表明,该方法的RSD为0.4%~5.1%,平均加标回收率为97.2%~113.5%,各组分在相应的线性范围内,线性关系良好,相关系数均大于0.9998,该方法具有较高的准确度、精密度、分离度和灵敏度,能满足实际标准对苯甲醇等8种防腐剂的检测要求,为实验室检测提供新的技术支持。

基于UPLC-QAMS同时测定参鹿酒中7种人参皂苷含量

该研究旨在建立超高效液相色谱(UPLC)-一测多评(QAMS)法同时测定参鹿酒中7种人参皂苷(Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2及Rd)的含量。首先采用UPLC测定参鹿酒中7种人参皂苷含量,并进行方法学考察。然后以人参皂苷Rg1为参照物,计算其余6种人参皂苷的相对校正因子及含量,并考察QAMS法的耐用性。最后与外标法相比,验证QAMS的可行性。结果表明,7种人参皂苷在各自范围内线性关系良好(R^(2)>0.999),精密度、重复性及稳定性试验结果的相对标准偏差(RSD)均<3%,加样回收率为100.13%~101.73%。6种人参皂苷的相对校正因子的RSD值均<5%,重现性良好。采用相对校正因子计算得到的13批参鹿酒样品中7种人参皂苷的含量与外标法实测值的相对误差(RE)均<5%,说明所建立的UPLC-QAMS法可有效、快速的评价参鹿酒的质量。

QuEChERS-UPLC-MS/MS法测定果蔬中10种农药残留

本文建立了一种QuEChERS-UPLC-MS/MS法测定果蔬中10种农药残留。本方法利用QuEChERS技术,样品经过提取、净化,用UPLC-MS/MS测定。结果表明,在0.01~0.20μg·mL^(-1),10种农药均具有良好的线性关系,相关系数均>0.996。各组分在3个加标水平(0.01mg·kg^(-1)、0.10mg·kg^(-1)、1.00 mg·kg^(-1))下的回收率为81%~106%,RSD在1.1%~9.8%(n=7)。该方法操作快速简单,且灵敏度与回收率高,因此可用于蔬菜水果中多种农药残留的同时检测分析。

UPLC-MS/MS法测定猪肉中氯霉素残留量的不确定度分析

采用UPLC-MS/MS法测定猪肉中氯霉素含量,并对不确定度进行评估。依据JJF 1135—2005和JJF 1059.1—2012标准中的相关规定,构建不确定度评定的相关数学模型,具体分析不确定度的各种来源,并对各分量进行量化和合成。结果表明,标准溶液配制和标准曲线拟合产生的不确定度分量最大,猪肉中氯霉素的含量为1.89μg·kg^(-1),扩展不确定度为0.23μg·kg^(-1)(k=2)。

UPLC-QAMS法同时测定连翘花中5种成分的含量

目的 建立同时测定连翘花中芦丁、连翘酯苷A、(+)-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、连翘苷、连翘脂素5种成分的方法。方法 采用超高效液相色谱(UPLC)法进行检测。色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3 C_(18);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱);流速为0.3 mL/min;检测波长为275 nm(0~8 min)、330 nm(8~10.5 min)、275 nm(10.5~32 min);柱温为25℃;进样量为1μL。以芦丁为参照物,采用一测多评(QAMS)法计算各成分含量,并与外标法进行比较。结果 QAMS法所得连翘花中连翘酯苷A、(+)-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、连翘苷、连翘脂素的含量分别为7.472~7.671、2.919~2.986、1.439~1.486、1.523~1.566mg/g,外标法测定结果为7.454~7.664、2.913~2.996、1.444~1.484、1.519~1.562 mg/g,两种方法测定结果无明显差异,相对偏差<1.0%。结论 本研究成功建立了UPLC-QAMS法同时测定连翘花中5种成分的含量,且该方法与外标法所得结果无明显差异,可用于连翘花的质量控制。

UPLC法测定参附注射液5种人参皂苷及药动学研究

目的:开发一种UPLC法以定量检测参附注射液中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rd以及评价5种人参皂苷在正常和心衰大鼠体内的药动学差异。方法:蛋白沉淀法处理血浆后,采用ZORBAX Eclipse Plus C_(18)column(4. 6×150 mm,5μm)色谱柱分析;流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速为0. 5 mL·min^(-1)。结果:5种人参皂苷分别在一定浓度范围内线性关系良好,样品专属性、准确度、精密度、回收率、基质效应和稳定性均符合要求。给药后与正常组比较,心衰组大鼠5种人参皂苷的Cmax均升高,AUClast均明显增加,MRTlast均明显延长,差异有统计学意义。结论:该研究首次建立了一种简便、灵敏的UPLC法,用于同时定量检测参附注射液中的5种人参皂苷成分,并成功用于评价其在2组大鼠体内的药动学差异。

UPLC指纹图谱结合化学计量学的白花蛇舌草真伪鉴别研究

目的:建立白花蛇舌草及其伪品水线草的UPLC指纹图谱,结合化学计量学,进行真伪鉴别。方法:建立白花蛇舌草和水线草的UPLC指纹图谱,对主要色谱峰进行化学指认及快速检识,利用两者化学成分差异结合化学计量学分析,开展真伪鉴别。结果:分别建立了两者UPLC指纹图谱方法并评价了多批次的相似度;白花蛇舌草22个共有峰中的10个、水线草16个共有峰中的5个及4个非共有峰得到了指认或检识;主成分分析(PCA)可将真品、伪品分为两组;而偏最小二乘法分析(OPLS-DA)显示车叶草酸甲酯等5个色谱峰是分组的主要原因;白花蛇舌草中的(E)-6-O-阿魏酰鸡屎藤次苷甲酯、(Z)-6-O-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯,水线草中的槲皮素-3-O-桑布双糖苷可作为两者的3个特征差异峰用于白花蛇舌草真伪鉴别。结论:将UPLC指纹图谱与化学计量学方法相结合,可用于白花蛇舌草真伪鉴别,从而为提高白花蛇舌草整体质量控制方法提供参考。

猪肉中92种兽药残留的UPLC-Qtrap高通量筛查和定量方法的研究

结合简单快速的前处理方法和超高压液相色谱-三重四级杆/线性离子阱串联质谱(UPLC-Qtrap)技术,建立了猪肉中92种兽药残留同时检测的高通量筛查和定量方法。样品经简单快速的前处理后,经Kinetex Core-Shell色谱柱分离,分析时间仅13.5 min。质谱采用多反应监测-信息关联-增强子离子(MRM-IDA-EPI)采集方式及谱库检索技术,通过化合物的保留时间、离子对丰度比以及EPI标准谱库检索对比,可完成对92种兽药的快速筛查和确证。采用基质匹配标准溶液外标法定量。结果表明:在1~50 ng/m L猪肉基质匹配标准溶液浓度范围内呈良好线性关系,相关系数R2均大于0.990;方法定量限均为1 ng/g;在1~10 ng/g的添加浓度范围内92种药物的回收率为50%~120%,批内批间相对标准偏差均小于20%。

UPLC-MS法同时测定黄芪中黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的含量

目的 建立快速、灵敏的超高效液相色谱-质谱联用（UPLC-MS）法同时测定黄芪中黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的含量。方法 采用ACQUITY UPLC HSS T3（2.1 mm×50 mm,1.8μm）色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱;柱温35℃;流速0.4 mL.min-1;采用质谱一级全扫描方式、正离子模式检测。结果 黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别在0.665～133 ng（r=0.999 4）、0.525～105 ng（r=0.999 5）、0.634～126.8 ng（r=0.999 9）、0.637～127.4 ng（r=0.999 3）呈良好的线性关系;平均回收率分别为104.4%、100.2%、95.3%、103.7%,RSD分别为2.6%、1.2%、1.2%、2.3%。结论 该方法快速简便,灵敏度高,准确可靠,可应用于黄芪中有效成分含量的快速测定及黄芪的质量控制。

UPLC-MS法测定高良姜中高良姜素的含量

目的建立快速、简便的超高效液相色谱-质谱联用法（UPLC-MS）测定高良姜中高良姜素的含量。方法采用ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50 mm,1.7μm）色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液流动相进行梯度洗脱;柱温30℃;流速0.3 ml/min;采用质谱一级全扫描方式、正离子模式检测。结果高良姜素在0.04～0.15 mg/ml之间与峰面积呈良好的线性关系,相应的回归方程为：y=1.927×105x＋2.832×104（r=0.999 9）;平均回收率为97.85,RSD为2.43。结论该方法快速简便,准确可靠,灵敏度高,可应用于高良姜中高良姜素含量的快速检测及高良姜的质量控制。

超高效液相色谱-串联质谱法测定奈玛特韦及利托那韦血药浓度

目的建立一种具有高灵敏度、高稳定性并且通用性强的能同时测定人血浆中奈玛特韦和利托那韦血药浓度的超高效液相色谱-串联质谱法。方法分离色谱柱采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),采用梯度洗脱,流动相为100%乙腈-0.1%甲酸,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为45℃,进样量为2μL。以电喷雾离子(ESI+)作为离子源,多反应监测模式扫描(奈玛特韦m/z 500.20→319.10,奈玛特韦-D_(9)m/z 508.59→328.10,利托那韦m/z 721.30→426.10,^(13)C,^(2)H_(3-)利托那韦m/z 725.30→426.10)。选择2023年1月于长兴县人民医院接受奈玛特韦/利托那韦治疗的新型冠状病毒感染患者30例,测定其用药3 d后的奈玛特韦和利托那韦稳态谷浓度。结果人血浆中奈玛特韦及利托那韦的线性范围分别为0.10~10.00(R^(2)=0.9972)和0.05~5.00μg·mL^(-1)(R^(2)=0.9952)。奈玛特韦和利托那韦的回收率均>90%,批内以及批间精密度的相对标准差(RSD)均<10%。另外,奈玛特韦和利托那韦回收率范围为91.5%~97.0%,基质效应范围为92.4%~97.7%。临床结果表明新型冠状病毒感染患者奈玛特韦和利托那韦血药浓度个体差异性很大。结论该研究建立的同时测定人血浆中奈玛特韦和利托那韦浓度的检测方法操作方便、专属性强、准确度及精密度高,适用于临床患者奈玛特韦和利托那韦血药浓度监测。

UPLC-MS/MS测定植物组织中植物激素的含量

【目的】植物激素在植物生长发育和响应生物和非生物胁迫过程中起着非常重要的作用,研究植物激素的合成、运输、代谢和分子作用机理,需要对植物激素进行定量分析。针对植物激素在大多数植物组织中的含量很低,性质不稳定,与其共存的次生代谢产物背景干扰严重,此外有些植物材料非常珍稀,材料量少的问题,以毛白杨叶片为材料,建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定植物组织中吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)、赤霉素(GA3)、茉莉酸(JA)和水杨酸(SA)的新方法,为植物激素的研究提供技术支撑。【方法】在用异丙醇、水和盐酸(2∶1∶0.002,v∶v∶v)混合液4℃提取激素时,定量加入IAA、ABA、GA3、JA和SA内标(2H5-IAA、2H6-ABA、2H-JA和2H5-SA各10 ng,2H2-GA320 ng),激素提取液经二氯甲烷萃取后,UPLC-MS/MS定量测定。乙腈-0.1%乙酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL/min,柱温30℃,C18色谱柱分离,多反应监测(MRM)、电喷雾电离源(ESI)负离子模式下进行分析,内标曲线法定量。【结果】5种植物激素在5 min内实现完全分离,检出限为0.01~0.05 pg/g,定量限为0.05~0.15 pg/g。在实验所采用的浓度范围内线性相关系数r在0.999 4~0.999 9之间,精密度和重现性均较好,峰面积的相对标准偏差为1.1%~3.9%。经检测毛白杨叶片中IAA、ABA、GA3、JA、SA的含量分别为(74.38±4.62)ng/g、(193.80±6.04)ng/g、(674.67±18.08)ng/g、(286.62±7.48)ng/g、(746.02±13.93)ng/g。【结论】本法操作简单,灵敏度高,分析时间短,适用于多种植物激素的测定。