基于UPLC-QTOF-MS解析苦荞黄酮组成及药理学网络分析

为优化苦荞黄酮提取工艺并明确其具体成分结构和含量及药理作用,本研究以四川省凉山彝族自治州甘洛县优质苦荞为研究对象,对超声提取苦荞黄酮工艺进行了优化,采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)对主要黄酮成分进行结构鉴定,并采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪对鉴定到的黄酮进行准确定量,同时利用中药系统药理学(TCMSP)系统分析其网络药理学特性。结果表明,超声辅助乙醇提取苦荞黄酮的最优条件为乙醇浓度90%(V/V)、超声功率140 W、超声温度70℃、超声时间60 min、提取溶剂与苦荞原料比50∶1(mL·g^(-1)),该条件下,提取液中共鉴定到黄酮16种,其中芦丁、表儿茶素和儿茶素含量分别达到115.81、72.99和23.08μg·mL^(-1)。这16种黄酮在防治心血管疾病、慢性炎症性疾病上具有重要作用。本研究可为苦荞精深加工综合利用尤其是功能性苦荞产品开发利用奠定基础。

基于GC-MS和UPLC-QTOF/MS的灵芝不同生长阶段的成分分析

[目的]探究灵芝(Ganoderma lucidum)不同生长阶段的成分差异。[方法]使用气相色谱-质谱检测法(gas chromatographymass spectrometry,GC-MS)和超高效液相串联四极杆飞行时间质谱法(ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-offlight mass spectrometry,UPLC-QTOF/MS)技术,选用ACQUITY超高效液相色谱仪HSS T3色谱柱在Waters超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)系统上对灵芝原基、产孢前和产孢后的子实体进行成分分析与鉴定。[结果]GC-MS共检测到24种成分,其中醛类8种、酯类4种、烃类1种、酸类1种、醇类1种、酮类2种、胺类2种、吡嗪类1种、咪唑类1种、吡咯类1种、呋喃类1种、酚类1种。UPLC-QTOF/MS共检测90种成分,最主要的成分三萜类共有67种,此外还包括脂肪酸类8种、氨基酸及其衍生物类3种、苷类2种、维生素1种、生物碱类2种、有机酸类2种、糖类2种、萜1种、杂萜1种、甾体1种。共有73种成分在原基中检出,其中三萜类成分54种;72种成分在产孢前子实体中检出,其中三萜类成分57种;52种成分在产孢后子实体中检出,其中三萜类成分有42种。[结论]灵芝不同生长阶段成分存在明显差异,本研究结果为灵芝不同时期的化学成分的分析与鉴定,以及化学物谱图的完善提供了基础数据,为相关药理、药效分析提供了有效参考。

UPLC-QTOF/MS法分析乳宁颗粒化学成分及入血成分

目的建立UPLC-QTOF/MS法分析乳宁颗粒化学成分及入血成分。方法2只大鼠灌胃给予颗粒水溶液,于0、0.5、1、2、4h采血。分析采用AcquityUPLCBEHC_(18)色谱柱(100mm×2.1mm,1.7μm);流动相0.1%甲酸-乙腈(正离子)或水-乙腈(负离子),梯度洗脱;体积流量0.3mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;正负离子扫描。结果共鉴定出166种化学成分,包括44种黄酮类、17种萜类、23种生物碱类、11种皂苷类、29种酚酸类、13种醌类、10种有机酸类、19种其他类,以及11种入血成分。结论该方法准确稳定,可为乳宁颗粒临床应用提供数据支撑,也能为其后续质量控制、物质基础研究奠定基础。

UPLC⁃QTOF/MS法分析芪苈强心胶囊化学成分及入血成分

目的建立UPLC-QTOF/MS法分析芪苈强心胶囊化学成分及入血成分。方法心肌梗死后心力衰竭大鼠灌胃给予芪苈强心胶囊0.5%CMC-Na混悬液(生药量0.9 g/mL)4周,取血。分析采用Acquity UPLCBEHC_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相0.1%甲酸-乙腈(正离子模式)或水-乙腈(负离子模式),梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;正负离子扫描。结果共鉴定出151种成分,包括38种黄酮类、36种萜类、23种生物碱类、11种皂苷类、11种苯丙素类、10种酚酸类、4种有机酸类、4种强心苷类、14种其他类,以及35种入血成分。结论该方法准确稳定,可为芪苈强心胶囊临床合理应用提供数据支撑,也能为其他中成药相关效应物质研究奠定基础。

UPLC-QTOF/MS结合网络药理学探讨诃子与草乌配伍“异病同治”类风湿性关节炎和痛风性关节炎作用机制

目的:探讨诃子与草乌配伍“异病同治”类风湿性关节炎(RA)和痛风性关节炎(GA)的作用机制。方法:采用数据挖掘技术找出治疗“图赖”病的核心药物组合(诃子-草乌),并使用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(UPLC-QTOF/MS)检测大鼠灌胃诃子与草乌配伍药物后的入血成分;运用PubChem、Swiss Target Prediction、GeneCards、OMIM、DisGeNET、Metascape等多个数据库检索诃子与草乌化学成分对应靶点、RA和GA的疾病靶点,以及代谢通路等信息,利用Cytoscape3.8.2软件构建成分-靶点-通路-疾病网络,并利用分子对接方法证实诃子与草乌的主要成分与关键靶点之间的高亲合力。结果:诃子与草乌入血成分相应靶点与RA靶点交集后得到323个交集靶点、与GA靶点交集后得到24个交集靶点,两者共有靶点24个,主要有肿瘤坏死因子(TNF)、肿瘤蛋白p53(TP53)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)和信号转导和转录激活因子3(STAT3),与十八碳四烯酸、绢酸、5-(3-羟基-4-乙酰氧基-1-丁基)-2,2'-联噻吩、灵芝酸H等有紧密联系,涉及通路有TNF信号通路、破骨细胞分化通路、癌症通路等。分子对接结果显示灵芝酸H和TNF、5-(3-羟基-4-乙酰氧基-1-丁基)-2,2'-联噻吩和MMP-9有强烈对接活性。结论:蒙古族药诃子与草乌配伍治疗RA和GA具有多靶点效应,可能通过炎症反应的调节、细胞对生物刺激的反应、对细菌源分子的反应、磷酸盐代谢的正调控和对激素的反应等通路发挥“异病同治”作用。

UPLC-ESI-QTOF/MS快速表征鉴定九华黄精的化学成分

目的采用超高效液相色谱电喷雾电离四极杆飞行时间质谱(UPLC-ESI-QTOF/MS)结合UNIFI软件对九华黄精中的主要化学成分进行快速表征和鉴定。方法采用ZORBAX SB-C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱进行分离,柱温30℃,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1);质谱采用正、负离子MS^(E)的全扫描模式分别采集质谱数据。结果正、负离子下共表征鉴定47个化学成分,包括甾体皂苷类15个、黄酮类8个、有机酸类9个,生物碱类4个,氨基酸类1个,其他类10个,其中3个经对照品鉴定,8种化合物为首次从九华黄精中发现。结论该方法实现了九华黄精中主要化学成分的快速质谱表征和鉴定,为九华黄精的质量评价和药效物质基础研究奠定了基础。

基于UPLC-QTOF-MS和网络药理学探讨平卧菊三七治疗高尿酸血症潜在作用机制

目的鉴定平卧菊三七入血化学成分,采用网络药理学方法探讨平卧菊三七治疗高尿酸血症潜在作用机制。方法通过超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱(UPLC-QTOF-MS)联用技术鉴定大鼠入血成分,利用TCMSP、Swiss Target Prediction、Gene-Cards数据库获得入血成分及疾病作用靶点,并通过STRING数据库、Cytoscape软件筛选核心靶点并构建PPI网络图、“入血成分-交集靶点”图;运用DAVID平台进行基因本体(GO)功能富集及KEGG通路富集分析。结果测得平卧菊三七入血成分24个,共筛选得到13个核心靶点、162个生物过程、86条信号通路。结论平卧菊三七可能通过槲皮素、咖啡酸、芦丁、秦皮乙素等活性成分作用于STAT3、RELA、IL6、PTGS2等核心靶点来调控细胞增殖、迁移等多个生物学过程,从而协同发挥治疗高尿酸血症的作用。

基于UPLC-QTOF-MS/MS的卷柏化学成分分析

利用超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法(UPLC-QTOF-MS/MS)对中药卷柏的化学成分进行快速分析及鉴定。采用Agilent Poroshell 120 SB-Aq(2.7μm,2.1 mm×100 mm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,进样量为3μL;选择电喷雾离子源分别在正、负离子模式下扫描分析,通过保留时间、精确相对分子质量和二级质谱裂解碎片,对所得成分的主要色谱峰进行鉴定。结果显示从卷柏中共鉴定出54个化学成分,主要包括双黄酮及黄酮类15个、炔酚类12个、酚酸类10个、苯丙素类5个、甾体类2个、萜类2个、氨基酸及肽类2个、酯类2个和其他类4个,并首次探讨炔酚类成分的裂解规律。该研究建立的UPLC-QTOF-MS/MS方法可以快速准确且较全面地分析鉴定卷柏中的化学成分,可为其质量控制及药效物质基础研究提供科学依据。

基于UPLC-QTOF-HRMS的夏天无地上部分生物碱类成分研究

采用UPLC-QTOF-HRMS法探究夏天无地上部分的生物类成分,方法如下:柱温:40℃,进样量:2μL,流速:0.4 mL/min,流动相A:0.1%甲酸,B:乙腈(含0.1%甲酸)梯度洗脱,采用正离子模式,通过相关文献和数据库分析并鉴定生物碱类成分。UPLC-QTOF-HRMS法检测结果中共鉴定出26种生物碱。上述检测结果可对夏天无地上部分开发利用提供理论依据。

基于UPLC-QTOF/MS的关黄母颗粒主要化学成分及脑组织移行成分研究

目的 运用UPLC-QTOF/MS法对关黄母颗粒中化学成分及脑组织移行成分进行分析和鉴定。方法 基于UPLC-QTOF/MS,在0.1%甲酸水-乙腈流动相体系下,Acquity UPLC HSS T3色谱柱色谱分离后进行正负离子扫描,结合文献、数据库检索等方式,对制剂主要化学成分及入脑成分进行分析。结果 共分离鉴定出159种化学成分,包括生物碱类、萜类、黄酮类、皂苷类等多种化合物,并成功鉴定出15种脑组织移行成分,结果显示其主要入脑成分为生物碱及萜类物质。结论 该方法准确稳定,适用于关黄母颗粒中化学成分分析,也可为寻找出该类药物质量标志物及抗抑郁作用物质基础提供数据支撑。

UPLC测定食用油中的3种香兰素类物质含量

为解决现有检测方法存在前处理净化不完全、不彻底的情况,建立了超高效液相色谱(UPLC)测定食用油中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素含量的分析方法。用乙腈提取食用油中目标物,以乙腈饱和的正己烷萃取净化,冷冻分层后,再经OasisPRiMEHLB固相萃取柱净化,采用C18色谱柱分离,以0.5%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行UPLC测定,外标法定量。结果表明:3种香兰素类物质在0.1~100.0mg/L范围内线性关系良好,相关系数大于0.999,检出限均为0.03 mg/kg,定量限均为0.1mg/kg;在0.1、0.2、1.0mg/kg3个添加水平的平均回收率为86.6%~108.1%,相对标准偏差(RSD)为2.0%~8.8%。同时,采用本方法与BJS201705中方法对食用油中的3种香兰素类物质进行测定,两种方法结果间无显著性差异。综上,建立的方法采用两步净化,减少了杂质对香兰素类物质的干扰,适用于食用油中香兰素类物质含量的测定。

基于UPLC法测定建昌帮姜制厚朴主成分含量变化差异

目的比较厚朴不同炮制品主成分含量差异,为优选厚朴优质饮片提供科学依据。方法用UPLCCLASS-H色谱(SyncronisC185μm,150 mm×4.6 mm)。以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 ml/min,柱温40℃,检测波长290 nm,并对厚朴不同炮制品中木兰花碱、和厚朴酚、厚朴酚等主成分含量比较分析。结果炮制厚朴与其他不同炮制品相比,其所含木兰花碱、厚朴酚、和厚朴酚含量从高到低分别为生品厚朴、姜制厚朴、姜煮厚朴。结论不同炮制方法会影响厚朴主成分的含量,此研究采用的成分分析方法稳定可靠,简单易行,可为深入研究厚朴奠定基础。

基于UPLC-QTOF-MS强脉冲光照射对女性面部脂质影响

强脉冲光(IPL)是波长为(500~1200)nm的连续、多波长的非相干性宽谱光。本研究共招募了31名女性志愿者(平均年龄(23.39±1.41)岁),在空军特色医学中心统一进行IPL半脸照射,对其IPL照射前(PI组)与照射一周后(AI组):对角质层含水量、经表皮水分散失、皮脂含量、pH值、红斑指数、黑素指数生理指标变化进行比较分析;通过超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)结合正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)模式对PI和AI组面部皮肤表面脂质(SSL)进行分析。生理指标数据分析表明,AI组角质层含水量(P=0.024)显著增加、黑素指数(P<0.001)、红斑指数(P<0.001)显著降低,而TEWL值、pH值、皮脂含量无显著变化;面部SSL结果分析表明,一共鉴定出1704种总脂质,筛选出60种差异性脂质。差异性脂质可分为7大类,其中有5大类脂质:脂肪酰类(fatty acids,FA)、鞘脂类(sphingolipids,SP)、固醇脂类(sterol lipids,ST)、孕烯醇酮脂类(prenol lipids,PR)、多聚乙烯类(polyketides,PK)在IPL照射前后含量差异显著,均为AI低于PI;16种亚类在IPL照射前后含量差异显著,均为AI低于PI;神经酰胺(CERs)是主要的差异性脂质,含量为AI低于PI,推测CERs含量降低与皮肤屏障受损相关,这为有脂质添加的IPL照射后护理产品研发提供新思路。

直接稀释-UPLC-QTOF-MS法快速测定辣椒粉中20种合成染料

采用直接稀释前处理法,结合超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS),对辣椒粉中苏丹红等20种禁用合成染料进行快速分析。该方法以水/乙腈/丙酮(v/v/v=2/3/3)混合体系为提取溶剂,提取液未经净化,用0.1%甲酸甲醇溶液稀释5倍后进行UPLC-QTOF-MS分析,在8 min内实现20种染料的良好分离及检测,定量限(LOQ)为1~40μg/kg,回收率为54.72%~117.77%,RSD在0.56%~16.27%范围,满足检测要求。将建立的方法应用于30个辣椒粉样品中目标染料的检测,未检出阳性样品。该方法样品前处理过程快速简化,节约溶剂、降低检测成本、缩短分析周期,符合绿色检验检测要求。

QuEChERS-UPLC-MS/MS法检测粮食中的黄曲霉毒素

构建QuEChERS-超高压液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)检测粮食中6种黄曲霉毒素(B1、B2、G1、G2、M1、M2)的方法。样品经过乙腈-0.1%甲酸溶液(84∶16)提取后,经N-丙基乙二胺(PSA)净化,以0.1%甲酸-乙腈作为流动相,采用UPLC-MS/MS在多反应检测模式下进行测定,外标法定量。结果显示:6种毒素标准曲线相关系数均大于0.99,线性良好,加标回收率为80.83%~117.5%,相对标准偏差(RSD)为1.53%~15.59%。在不同粮食基质中,6种黄曲霉毒素的基质效应为0.81~1.12。该方法的准确度和精确度符合相关标准要求,具有前处理技术简单、净化效果好、精确度高等优势,适合小麦、大米、玉米、绿豆和红豆样品中6种黄曲霉毒素的定量分析。

基于UPLC-MS/MS技术的疏肝和胃汤干预慢性应激大鼠肝脏代谢组学分析

目的 基于肝脏代谢组学研究,分析疏肝和胃汤(shuganheweitang, SGHWT)对慢性应激大鼠肝组织中内源性代谢产物的影响,探究疏肝和胃汤治疗慢性应激大鼠的潜在作用机制。方法 采用慢性不可预知温和刺激(chronic unpredictable mild stress, CUMS)结合单笼饲养的方法建立慢性应激大鼠模型;利用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察对照组(control, Con)、对照+疏肝和胃汤组(control+SGHWT,Con+SGHWT,7.33 g·kg^(-1)·d^(-1))、模型组(model, M)、模型+疏肝和胃汤组(model+SGWHT,M+SGHWT,7.33 g·kg^(-1)·d^(-1))和模型+氟西汀组(model+fluoxetine, M+F,1.58 mg·kg^(-1)·d^(-1))大鼠肝细胞的组织病理结构;运用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对肝组织中的内源性代谢物进行代谢组学分析,利用MetaboAnalyst在线网站进行通路分析。结果 疏肝和胃汤显著增加了慢性应激大鼠的体质量(P<0.05),糖水偏爱率(P<0.05)和旷场实验中的总移动距离(P<0.01),恢复了肝组织中肝细胞结构形态;肝脏代谢组学结果分析中共发现了51个差异代谢物发生紊乱,其中疏肝和胃汤可逆转16个内源性差异代谢物,主要涉及氨基酸代谢、能量代谢和甘油磷脂代谢。结论 疏肝和胃汤可恢复慢性应激诱导的大鼠体质量,糖水偏爱率和移动距离的减少,改善肝细胞结构,调节氨基酸代谢、能量代谢和甘油磷脂代谢。

UPLC-MS法测定肉制品中虾过敏原含量的不确定度评定

对采用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS)法测定肉制品中虾过敏原含量的不确定度进行评定。通过建立数学模型分析UPLC-MS法测定肉制品中虾过敏原含量的方法流程和不确定度的来源,逐一计算不确定度分量并计算合成不确定度,得出扩展不确定度。检测结果的不确定度来源分为样品称量、重复性试验、方法准确度、样品前处理过程和样品溶液测定过程,其中样品溶液测定过程引入的不确定度占比最高,而这部分不确定度的来源主要为标准曲线拟合和对照品称量过程。经计算,方法的合成相对标准不确定度为0.057 9,合成标准不确定度为1.21 mg/kg,取置信度为95%时的扩展因子k=2,计算得到用此方法测定肉制品中虾过敏原含量的相对扩展不确定度为0.116,扩展不确定度为2.42 mg/kg。评定结果中各不确定度分量的占比结果表明:实验过程中应采用调整对照品称样量、合理化标准曲线工作溶液浓度范围的方式以减少方法整体的不确定度。因此,建议在对实际样品进行含量测定时,其报告的检测结果应带有相同单位的测量不确定度值。

基于UPLC-MS/MS技术的线纹香茶菜白花型与紫花型种质代谢物的比较分析

【目的】溪黄草是一种我国民间习用传统中草药,其基源植物有3~4种。现有的鉴别和考证研究认为线纹香茶菜是“溪黄草”的正品之一。广泛栽培的线纹香茶菜多为紫花型,利用代谢组学技术对获得的白花型种质与常规紫花型种质的代谢产物开展比较研究,可为正品“溪黄草”种质创制、新品种选育提供依据。【方法】采用UPLC-MS/MS技术,以广泛栽培的紫花型线纹香茶菜种质为对照,比较白花型与紫花型线纹香茶菜间的差异代谢物,并进行差异代谢物富集通路分析。【结果】从两份种质检测到的868种代谢物中筛选到125种差异代谢物,其中,有67种在白花型种质中显著上调、58种表现下调。两种质的差异代谢物主要包括黄酮类、有机酸、氨基酸及其衍生物、酚酸类、生物碱、游离脂肪酸等,其中黄酮类化合物占比最高、为45.6%。黄酮类、黄酮糖苷和异黄酮三类差异代谢物在白花型种质中上调数量高于紫花型种质;而黄酮醇类化合物是两种质差异代谢物最多的类别,且多数在紫花型种质中呈显著上调。进一步通路富集分析发现,125种差异代谢物共注释到47条代谢通路,其中,显著富集的有类黄酮(Flavonoid)、异黄酮(Isoflavonoid)、花青素(Anthocyanin)、黄酮(Flavone)、黄酮醇(Flavonol)、芪类化合物(Stilbenoid)、二芳基庚烷(diarylheptanoid)和姜酚(Gingerol)生物合成及嘌呤(Purine)代谢等途径。【结论】白花型线纹香茶菜种质中黄酮类、黄酮醇类化合物含量显著多于紫花型种质,将为后期线纹香茶菜种质资源的挖掘、创制和新品种选育研究提供良好材料。

UPLC-Q-TOF-MS与电子舌分析不同产地多花酒黄精滋味特征

目的:分析不同产地多花酒黄精的滋味特征,为产地判别、分析方法改进提供依据。方法:以11个产地的多花酒黄精细粉为研究样品,采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)分析多花酒黄精化学成分,采用电子舌智能感官评定技术分析多花酒黄精滋味雷达图,采用主成分(PCA)、Loadings方法分析电子舌信号响应结果,构建产地判别模型。结果:UPLC-Q-TOF-MS法结果共鉴别出68个化学成分,其中28个差异性成分可用于10个产地的区分。电子舌结果表明,主成分判别分析能较好地区分不同产地多花酒黄精,多花酒黄精在滋味上的差异主要体现在苦味、甜味、咸味、鲜味等。结论:不同产地多花酒黄精的滋味特征存在差异,可作为产地判别依据。电子舌技术可为多花酒黄精分析及质量标准提供简单、快速的新方法。

基于UPLC-QTOF-MS/MS分析的芪葵颗粒化学成分系统筛选与识别

目的系统定性表征芪葵颗粒(黄芪、制首乌、黄蜀葵花)中的化学成分。方法采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS/MS)联用分析方法对芪葵颗粒水提液进行分离检测,获取正、负离子模式下的原始分析数据;借助AB Sciex PeakView软件,综合采用靶向和非靶向的筛选方法,对获得的原始分析数据进行处理,系统筛选鉴定芪葵颗粒中的化学成分;以不少于2个准分子离子的同时出现,排除碎片离子的干扰,锁定筛选所得目标化合物;依据准分子离子及特征二级子离子质谱信息,结合标准品比对,并参考数据库搜索匹配和文献数据比对,对锁定的化合物进行鉴定或合理归属。结果从芪葵颗粒中共筛选出89个化合物,鉴定出71个化合物,包括黄酮类45个,皂苷类14个,蒽醌类4个,二苯乙烯苷类3个,多糖类2个,有机酸类3个。鉴定结果表明羟基化、糖基化、葡萄糖醛酸化、乙酰化、甲基化、丙二酰化等多种转化反应参与了芪葵颗粒多样化学成分的形成。结论基于UPLC-QTOF-MS/MS靶向和非靶向相结合的筛选鉴定方法可快速全面表征芪葵颗粒中的主要化学成分及其涉及的转化反应,为深入探讨芪葵颗粒的质量控制、组方优化和药效物质等奠定了基础。