基于超高效液相色谱-串联质谱同时测定婴幼儿配方乳粉中2′-岩藻糖基乳糖和乳糖-N-新四糖

建立超高效液相色谱-串联质谱法(ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)同时测定婴幼儿配方乳粉中2′-岩藻糖基乳糖(2′-fucosyllactose,2′-FL)和乳糖-N-新四糖(lacto-N-neotetraose,LNnT)。样品经水提取,沉淀法除蛋白、针式水系滤膜净化,以乙腈和10 mmol/L甲酸铵水溶液(含0.1%甲酸,体积分数)为流动相,采用酰胺柱进行梯度洗脱,采用选择反应检测扫描模式(selective reaction monitoring,SRM)测定,外标法定量,稀释法评估溶剂效应、提取后添加法评估基质效应。结果表明,正离子模式下2′-FL和LNnT分别采用加合离子峰[M+NH^(+)_(4)]和[M+H^(+)]较好,梯度条件、流速优化后使得2′-FL和LNnT均能在8 min内完成洗脱,溶剂效应考察发现2′-FL和LNnT存在严重的溶剂效应,但在消除试验中发现在稀释20倍的情形下,50%乙腈甲酸铵水溶液作为净化样液的稀释溶剂可消除影响,线性范围考察发现2′-FL和LNnT线性范围分别为5.0~150.0 ng/mL和2.5~75.0 ng/mL,基质效应考察发现2′-FL和LNnT均不存在基质效应。方法验证表明,2′-FL和LNnT各项精密度正确度参数均满足国标要求,该方法适用于婴幼儿配方乳粉中2′-FL和LNnT的同时测定。

精浆硫醇物测定方法的建立及其在高尿酸血症患者精浆中的应用探讨

目的:建立一种反相超高效液相色谱-荧光检测法(UPLC-FL)同时测定精浆同型半胱氨酸(Hcy)、半胱氨酸(Cys)、半胱氨酰甘氨酸(CysGly)、谷胱甘肽(GSH)的方法,分析高尿酸血症(HUA)患者精浆中4种硫醇物的含量。方法:将精浆样品通过用三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)还原,用三氯乙酸(TCA)溶液进行蛋白沉淀,再用7-氟苯呋咱-4-硫酸铵盐(SBD-F)进行衍生化反应,选用C18色谱柱分离,流动相A为0.025 mol/L磷酸二氢钾KH2PO4(pH 3.0),B为纯甲醇,等度洗脱,在激发波长380 nm、发射波长510 nm的条件下进样。结果:各硫醇物相关系数R2都达到0.999以上,平均回收率在94.23~107.87%间。高尿酸血症组四种硫醇物质含量与正常组相比均有显著性差异(P﹤0.05),其中Cys[(108.01±48.03)μmol/L vs(250.10±55.87)μmol/L]、Hcy[(113.97±6.32)μmol/L vs(48.35±15.07)μmol/L]、GSH[(3.15±1.48)μmol/L vs(4.63±1.17)μmol/L]浓度升高,CysGly[(12.79±3.18)μmol/L vs(5.94±0.99)μmol/L]浓度降低。结论:本研究建立的反相超高效液相色谱-荧光检测法首次实现了精浆Hcy、Cys、CysGly、 GSH的同时检测,适合于实验室研究和临床常规检测。高尿酸血症患者生殖系统产生明显的氧化损伤。