基于UPLC-LTQ-Orbitrap MS技术分析远志炮制前后成分变化

目的比较远志生品、"建昌帮"炆远志与药典法甘草制远志的成分差异。方法运用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱质谱联用(UPLC-LTQ-Orbitrap MS)技术,在负离子模式下采集样品数据,根据相对分子质量及碎片离子等质谱信息,结合对照品与文献信息鉴定化学成分,并以各成分炮制前后离子峰面积比为炮制前后变化指数进行比较。利用SIMCA软件进行主成分分析(PCA)与偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),根据变量重要性投影(VIP)值对炮制前后差异成分进行筛选。结果共鉴定出51个化合物,其中42个成分来源于远志,9个为炮制辅料甘草引入的成分。PCA分析表明生远志与炆远志、制远志具有明显差异,OPLS-DA筛选得生远志与炆远志差异成分27个;生远志与制远志差异成分25个;炆远志与制远志差异成分23个。结论远志炮制前后成分种类与成分含量均发生了明显变化,炮制过程中皂苷类、寡糖酯类等同类成分间的转化以及辅料甘草成分的引入是产生该差异的主要原因,且炆远志与制远志两种炮制品也存在着明显差异。

UPLC-LTQ-Orbitrap MS法鉴定棉酚在肝微粒体的代谢产物

本文主要研究棉酚在大鼠肝微粒体中的代谢产物。首先以大鼠肝微粒体温孵棉酚,采集大鼠肝微粒体孵育样品并制备样品,然后采UPLC-LTQ-Orbitrap MS法对温孵体系中的代谢产物进行分析。结果发现在大鼠肝微粒体温孵体系中共检测除原型在外的2个代谢产物,主要为羟基化的代谢产物。本文通过研究棉酚的代谢转化,发现易于发生代谢的位点和结构特征,为进一步研究棉酚在体内的代谢和代谢酶奠定基础。

UPLC-LTQ-Orbitrap XL分析知母-黄柏药对化学成分

目的:分析知母-黄柏药对的化学成分。方法:采用超高效液相-线性离子阱-轨道阱质谱联用仪(UPLCLTQ-Orbitrap XL),在正、负两种离子模式下,利用质谱的高分辨率以及成分的二级碎片信息,鉴别药对中的成分。结果:共鉴别了55个化学成分,其中从知母中鉴别了18个化学成分,黄柏中鉴别了37个化学成分,3个化学成分为首次在该药对中报道。结论:UPLC-LTQ-Orbitrap XL能快速、精确的对知母-黄柏药对的化学成分定性分析,为知母-黄柏药对药效物质基础研究提供依据。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术分析黄芩清肺汤中黄芩、栀子单煎与合煎的成分变化

目的研究黄芩清肺汤中黄芩、栀子配伍前后的成分变化,探讨二者配伍的合理性。方法采用超高效液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱联用(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)技术建立黄芩、栀子配伍前后的化学指纹图谱,通过正交偏最小二乘判别法分析药对配伍前后的化学成分变化,并对筛选到的化学标记物进行鉴定。结果黄芩、栀子合并液与合煎液化学成分存在明显差异,合煎后京尼平苷酸(geniposidic acid)、栀子苷(gardenoside)等含量显著下降,黄芩素(baicalein)、槲皮素(quercetin)等含量显著升高。结论黄芩清肺汤中黄芩、栀子配伍后,可促进多种活性成分在合煎液中的溶出,这些成分可能是黄芩、栀子配伍协同增效的物质基础。

4种秦艽中化学成分的UPLC-LTQ-Orbitrap-MS快速分析研究

目的利用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术对4种秦艽药材的化学成分进行定性分析。方法采用Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),在电喷雾正负离子模式下采集数据。将母离子列表(PIL)-MS2和高分辨质谱结合,用于秦艽药材中化学成分的鉴别。结果结合质谱数据和文献数据共鉴定、推断出66个成分,其中包括环烯醚萜类36个、木脂素类5个、黄酮类5个、三萜类12个、其他类8个。其中19个成分为首次报道。结论4种秦艽成分大致相同,利用UPLC-LTQOrbitrap-MS技术结合母离子列表的方法可以快速筛选《中国药典》规定的4种秦艽中的化学成分,为秦艽化学成分的提取分离及其药效物质基础研究提供参考。

UPLC-LTQ-Orbitrap-MS快速识别驱虫斑鸠菊中多酚类化合物

目的:对驱虫斑鸠菊乙醇提取物中的化学成分进行分析鉴定。方法:采用超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱组合式高分辨质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)联用技术,总结驱虫斑鸠菊中黄酮类和咖啡酰奎宁酸类化合物的质谱裂解规律,建立其乙醇提取物中多酚类成分的快速识别方法,并对其中的化学成分进行识别。结果:从其乙醇提取物中初步鉴定出43种多酚类化合物,其中包括30种黄酮类成分和13种酚酸类成分。结论:有26种化合物是首次在驱虫斑鸠菊中发现。

UPLC-LTQ-Orbitrap-MS法快速分析鬼箭羽中的化学成分

利用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术结合文献报道的鬼箭羽已知化学成分及其裂解规律快速鉴定鬼箭羽药材中的化学成分。利用文献中鬼箭羽化学成分的分子式、相对分子质量、碎片离子等信息建立鬼箭羽快速识别数据库,依据化合物的精确分子质量、色谱保留时间、特征碎片离子等信息对已知成分进行验证;对于鬼箭羽中未知成分,通过总结同类化合物的质谱裂解规律,并查阅相关文献确定其相对分子质量、特征碎片离子、色谱保留时间等信息,并进行结构表征。实验共鉴定得到65种成分,包括36种黄酮类、4种酚酸类、7种三萜类、12种脂肪族和6种其他类成分,其中,有28种化合物是首次在鬼箭羽中发现。该方法可以快速、全面地分析鬼箭羽药材中的化学成分,可为鬼箭羽药材的质量控制研究奠定基础。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap MS/MS法对粗茎秦艽药材不同初加工品化学成分的分析

目的 基于代谢组学方法研究不同加工方法下粗茎秦艽Gentiana crassicaulis药材次生代谢化合物的差异,为优化粗茎秦艽药材的加工及干燥方法提供科学依据。方法 收集云南丽江产粗茎秦艽药材,分别进行产地和药厂加工,加工方式包括切片、原个子(不切片),干燥方式包括烘干、晒干和“发汗”。采用超高效液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)技术,结合多元统计分析方法,对各样品的次生代谢产物进行分析,筛查其差异性的特征化合物。结果 共鉴定出44个化学成分。主成分分析(principal component analysis,PCA)结果表明,根与芦头(根茎)的化学成分存在较大的差异,根的切片组、原个子组有明显区分。正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)表明,三年生药材质量优于二年生药材,根的质量优于芦头,切片组优于原个子组,不同干燥方法中晒干组药材的质量较优,药厂加工药材质量均优于产地加工药材,并分析得到各组间主要差异化合物。结论 粗茎秦艽药材加工时,建议选用三年生药材,去除芦头部位,并进行趁鲜切片及晒干处理。可为粗茎秦艽药材初加工工艺、质量控制与合理应用提供科学资料。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS^(n)技术的红曲茯苓组方物质基础分析

目的采用超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱组合式高分辨质谱联用(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS^(n))技术对红曲茯苓组方中的化学成分进行定性鉴别,为其确定功效相关质量控制指标提供依据。方法采用Waters ACQUITY UPLC BHEC18(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,柱温35℃,流速0.3 mL·min^(-1),正、负离子模式进行扫描获得高分辨质谱信息。通过与对照品的保留时间及质谱数据信息对比,并结合相关文献报道对相应化合物的相对分子质量、质谱裂解规律进行匹配,对红曲茯苓组方中所含的成分群进行定性分析归类。结果共鉴定了84个化学成分,包括41个黄酮类、11个莫那可林类、10个红曲色素类、8个倍半萜类、4个氨基酸类、2个三萜类、3个多糖类以及5个有机酸类成分,并明确了各化学成分的来源归属以及结合文献报道确定功效相关成分。结论该研究准确地识别了红曲茯苓组方中的化学成分,可为其进一步开发及质量控制提供参考。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术快速解析杜仲颗粒化学成分

建立了定性分析杜仲颗粒化学成分的超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱组合式高分辨质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)方法。杜仲颗粒采用甲醇超声提取,Thermo Scientific Syncronis C 18 色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9 μm)分离,以乙腈-0.1 %甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱。利用LTQ-Orbitrap-MS负离子模式采集,通过对照品比对及高分辨质谱数据解析,鉴定了25种化学成分,包括8种环烯醚萜类、8种黄酮类、5种苯丙素类、3种木脂素类化合物及1种非还原性双糖。该方法简便、快速、准确,可为进一步分析杜仲颗粒的药效物质基础提供依据。

基于UHPLC-LTQ-Orbitrap MS n和分子网络技术快速鉴定灯盏细辛注射液的化学成分

本研究建立了一种基于超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱组合式高分辨质谱(UHPLC-LTQ-Orbitrap MS)技术及分子网络技术联合应用的快速分析方法鉴定灯盏细辛注射液的化学成分。采用UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm×1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。在正、负离子模式下,采集LTQ-Orbitrap MS数据,根据MS/MS碎裂模式的相似性创建GNPS分子网络,运用Cytoscape 3.6.1软件筛选结构相似的分子簇。根据碎片结构的相似性,化合物被聚为咖啡酰酯衍生物和黄酮类2大类别。最后,根据保留时间、高分辨质谱精确分子质量和MS ^(n)碎片等信息鉴定灯盏细辛注射液的化学成分。通过对主要类别化合物进行鉴定,在灯盏细辛注射液中共快速筛查到84种化学成分,其中49种成分为首次鉴定。该方法可为灯盏细辛注射液的质量控制、药效学研究提供参考。

丹参多化学成分的UPLC-LTQ Orbitrap MS快速表征解析

目的:建立超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱组合式高分辨质谱联用(UHPLC-LTQ Orbitrap MS)技术快速鉴别分析中药丹参中的化学成分。方法:采用电喷雾(ESI)正、负离子电离模式对中药丹参化学成分进行数据采集,根据高分辨数据及二级质谱信息对丹参化学成分进行快速鉴定。结果:归纳总结了丹参酮IIA、丹酚酸B等标准品的特征碎片及质谱裂解规律,并根据高分辨数据及二级质谱信息对丹参化学成分进行快速鉴定,在丹参提取物中共鉴定出70种化合物,包括二萜类、酚酸类、醌类等。结论:该方法可快速对丹参中的化学成分进行定性分析,能够为丹参质量控制及药效学研究提供技术支持,同时也为复杂中药成分的全面表征提供一定借鉴。

超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱法测定纺织品中的游离态致癌芳香胺

建立了超高效液相色谱.线性离子阱／静电场轨道阱高分辨质谱（ UPLC.LTQ／Orbitrap MS）同时测定纺织品中24种游离态致癌芳香胺的方法。样品经二氯甲烷超声提取并稀释后，用ZORBAX SB.C18色谱柱（150 mm×2.1 mm，5μm）分离，以0.1％甲酸水溶液和甲醇为流动相，电喷雾正离子（ ESI＋）模式电离，以准分子离子峰的精确质量数和保留时间定性，以提取的色谱图峰面积定量。在0.5～500μg／L范围内，24种芳香胺的线性相关系数（ R2）大于0.99，样品加标回收率为87.8％～105.6％，相对标准偏差为1.6％～3.4％。方法检出限为0.5～1μg／kg。应用本方法检测山东地区进出口含氨纶纺织品样品14个，在5个样品中检出游离态芳香胺4，4′.二氨基二苯甲烷，含量范围为0.21～25.6 mg／kg。

UPLC-HRMS^n结合高能诱导裂解快速鉴定麦冬中高异黄酮类成分

应用UPLC-LTQ-Orbitrap法快速鉴定麦冬药材中高异黄酮类化合物,考察不同高能诱导裂解(HCD)能量下高异黄酮的裂解情况,优选特征碎片离子对进行鉴定,并探索麦冬中高异黄酮类成分的裂解规律。应用该方法在麦冬提取物中鉴定出68个高异黄酮类成分,其中包括26个高异黄酮成分,31个高异黄烷酮成分,11个高异黄酮糖苷类成分。结果表明,HCD模式能够提供丰富稳定的裂解碎片离子信息,结合UPLC-LTQ-Orbitrap技术能够快速准确地鉴定复杂组分中高异黄酮类成分,可为中药系列成分研究提供有价值的方法参考。

栀子抗肝内胆汁淤积有效部位筛选及其化学成分研究

目的通过比较栀子不同乙醇洗脱部位对肝内胆汁淤积大鼠的保护作用,筛选出栀子抗肝内胆汁淤积有效部位,并对有效部位的化学成分进行鉴定分析。方法 56只SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组(熊去氧胆酸,100 mg/kg)及栀子不同乙醇洗脱部位组(4 g生药/kg),分别给予相应药物灌胃,连续7 d。给药后第5天,灌胃α-萘异硫氰酸酯,诱导急性肝内胆汁淤积模型。第7天给药1 h后进行胆管插管手术,记录各给药组在2 h内的胆汁流量,并且取血清测定其中的总胆汁酸(TBA)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)水平,HE染色法观察大鼠肝组织病理形态,并采用UPLC-LTQ-Orbitrap对30%乙醇洗脱部位进行定性分析。结果与模型大鼠比较,栀子不同洗脱部位均能在120 min中内的各个时间点增加肝内淤积大鼠的胆汁流量,其中栀子30%乙醇洗脱部位最大程度增加胆汁流量(P<0.05,P<0.01);栀子30%、70%、95%乙醇洗脱部位组能降低肝内淤积大鼠血清中TBIL、TBA水平(P<0.05,P<0.01),栀子30%乙醇洗脱部位组能降低肝内淤积大鼠血清中DBIL、ALT水平(P<0.05,P<0.01)。病理切片结果表明,栀子30%乙醇洗脱部位对模型大鼠肝组织病理症状具有明显改善作用。栀子30%乙醇洗脱部位共鉴定出12个化合物。结论栀子30%乙醇洗脱部位具有较好的改善肝内胆汁淤积的作用,其主要活性成分为环烯醚萜苷类。

六味地黄丸入血、入脑成分分析

目的分析六味地黄丸入血、入脑成分。方法12只大鼠随机分为2组,分别灌胃给予双蒸水、六味地黄丸混悬液(1.62 g/kg),于0.5、1、1.5、2 h采血,抽取脑脊液,超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)法进行分析。结果共鉴定出38种入血成分,其中29种为原型,9种为代谢产物,同时还鉴定出10种原型入脑成分。结论六味地黄丸入血、入脑成分大多有神经保护作用,可为该制剂抗中枢神经系统疾病作用的发挥奠定物质基础。

超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱鉴别纺织品中禁用芳香胺及其异构体

针对目前纺织品中禁用偶氮染料检测中的假阳性问题,建立了一套应用超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱（UPLC-LTQ/Orbitrap）同时筛选24种禁用芳香胺及其常见的14种异构体的方法。样品经连二亚硫酸钠还原,叔丁基甲醚提取后,以水/甲醇（9/1,v/v）稀释定容,用ZORBAX SB-C18色谱柱（150 mm×2.1mm,5μm）分离,以0.1%甲酸水溶液和甲醇为流动相,电喷雾正离子（ESI＋）模式电离。以准分子离子峰的精确质量数和保留时间定性,以提取的色谱图峰面积定量。38种芳香胺的线性相关系数大于0.99,方法检出限为0.5-5μg/kg。该方法可通过一次实验同时对24种禁用芳香胺及其常见的14种异构体准确定性定量,大大缩短检测周期,实际样品检测也进一步验证了其灵敏性和准确性。

超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱直接分析葡萄酒中38种多酚类化合物

建立了超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱检测葡萄酒中38种多酚化合物的检测方法。样品过聚醚砜（PES）滤膜后直接上样分析,Hypersil Gold C18色谱柱分离,以乙腈（含0.1%甲酸）和0.1%甲酸水作为流动相梯度洗脱。在m/z 50-1 000范围内进行一级质谱全扫描。以准分子离子峰的精确质量数和提取的色谱图峰面积进行筛查分析和定量,以保留时间和数据依赖扫描（data-dependent scan）模式获得的子离子质谱图进行定性确证。38种多酚化合物的质量偏差不大于5×10^-6（5 ppm）,浓度与特征离子峰面积的线性关系良好（浓度线性范围为两个数量级）,相关系数（R^2）大于0.99,方法检出限为0.002-0.50 mg/kg。3个添加水平的回收率范围为90%-102%,相对标准偏差为0.51%-2.56%。应用该方法检测了葡萄酒中38种多酚化合物的含量,该方法准确、可靠。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS的二十五味大汤丸化学成分分析

目的 采用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS法对二十五味大汤丸的化学成分进行分析鉴定。方法 利用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱技术(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)进行检测,正、负离子模式采集数据,采用TraceFinder 4.1 软件筛查目标化合物,分析化合物特征碎片离子,结合相关文献对数据进行系统分析和各成分的中药来源进行归属。结果 在正、负离子模式下共鉴定出102个化合物,包括黄酮类30个,有机酸类22个,萜类及三萜类11个,苯丙素类17个,鞣质类10个,其他类12个。结论 应用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术可快速有效、全面地表征二十五味大汤丸中的主要化学成分,为深入揭示其药效物质及作用机制提供依据。

基于超高效液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱的代谢组学方法分析枸杞酒发酵前后酚类物质的变化

酚类物质作为枸杞重要的次生代谢产物,具有降血脂、降血糖、抗炎、抗癌、抗氧化等多种生理功能。为了解枸杞酒发酵前后酚类物质的变化情况,以宁杞1号枸杞干果为材料,采用超高效液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱(ultra performance liquid chromatography-linear ion trap quadrupole-Orbitrap-mass-spectrometry,UPLC-LTQ-Orbitrap-MS),对枸杞汁及枸杞酒中的酚类物质进行分析,共鉴定出55种酚类物质,其中枸杞汁特有的6种,枸杞酒特有的3种,二者共有的物质46种。然后利用广泛靶向代谢组学技术对枸杞酒发酵前后酚类物质的变化进行了对比分析,结果发现,枸杞酒发酵前后存在较大的代谢物差异,共筛选出13种差异代谢物,其中包括8种酚酸类、2种黄酮类、2种酚酰胺衍生物及1种香豆素。最终确定了发酵前后枸杞酒中酚类代谢物的变化,研究拓展了对枸杞汁及枸杞酒中多酚类成分的基础研究,为枸杞的功能性食品开发提供理论依据。