基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS^(n)技术的红曲茯苓组方物质基础分析

目的采用超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱组合式高分辨质谱联用(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS^(n))技术对红曲茯苓组方中的化学成分进行定性鉴别,为其确定功效相关质量控制指标提供依据。方法采用Waters ACQUITY UPLC BHEC18(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,柱温35℃,流速0.3 mL·min^(-1),正、负离子模式进行扫描获得高分辨质谱信息。通过与对照品的保留时间及质谱数据信息对比,并结合相关文献报道对相应化合物的相对分子质量、质谱裂解规律进行匹配,对红曲茯苓组方中所含的成分群进行定性分析归类。结果共鉴定了84个化学成分,包括41个黄酮类、11个莫那可林类、10个红曲色素类、8个倍半萜类、4个氨基酸类、2个三萜类、3个多糖类以及5个有机酸类成分,并明确了各化学成分的来源归属以及结合文献报道确定功效相关成分。结论该研究准确地识别了红曲茯苓组方中的化学成分,可为其进一步开发及质量控制提供参考。

4种秦艽中化学成分的UPLC-LTQ-Orbitrap-MS快速分析研究

目的利用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术对4种秦艽药材的化学成分进行定性分析。方法采用Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),在电喷雾正负离子模式下采集数据。将母离子列表(PIL)-MS2和高分辨质谱结合,用于秦艽药材中化学成分的鉴别。结果结合质谱数据和文献数据共鉴定、推断出66个成分,其中包括环烯醚萜类36个、木脂素类5个、黄酮类5个、三萜类12个、其他类8个。其中19个成分为首次报道。结论4种秦艽成分大致相同,利用UPLC-LTQOrbitrap-MS技术结合母离子列表的方法可以快速筛选《中国药典》规定的4种秦艽中的化学成分,为秦艽化学成分的提取分离及其药效物质基础研究提供参考。

UPLC-LTQ-Orbitrap-MS法快速分析鬼箭羽中的化学成分

利用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术结合文献报道的鬼箭羽已知化学成分及其裂解规律快速鉴定鬼箭羽药材中的化学成分。利用文献中鬼箭羽化学成分的分子式、相对分子质量、碎片离子等信息建立鬼箭羽快速识别数据库,依据化合物的精确分子质量、色谱保留时间、特征碎片离子等信息对已知成分进行验证;对于鬼箭羽中未知成分,通过总结同类化合物的质谱裂解规律,并查阅相关文献确定其相对分子质量、特征碎片离子、色谱保留时间等信息,并进行结构表征。实验共鉴定得到65种成分,包括36种黄酮类、4种酚酸类、7种三萜类、12种脂肪族和6种其他类成分,其中,有28种化合物是首次在鬼箭羽中发现。该方法可以快速、全面地分析鬼箭羽药材中的化学成分,可为鬼箭羽药材的质量控制研究奠定基础。

UPLC-LTQ-Orbitrap-MS法分析大承气汤化学成分

目的建立超高效液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)法分析大承气汤(大黄、枳实、厚朴等)化学成分。方法该药物甲醇溶液的分析采用Dikma Endeavorsil C(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm);流动相水(含0.1%甲酸)-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;ESI离子源;正负离子检测模式。结果鉴定出73个化合物,主要包括蒽醌、黄酮、木脂素等。结论该方法快速准确,可为大承气汤临床应用及质量控制研究提供参考。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术分析黄芩清肺汤中黄芩、栀子单煎与合煎的成分变化

目的研究黄芩清肺汤中黄芩、栀子配伍前后的成分变化,探讨二者配伍的合理性。方法采用超高效液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱联用(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)技术建立黄芩、栀子配伍前后的化学指纹图谱,通过正交偏最小二乘判别法分析药对配伍前后的化学成分变化,并对筛选到的化学标记物进行鉴定。结果黄芩、栀子合并液与合煎液化学成分存在明显差异,合煎后京尼平苷酸(geniposidic acid)、栀子苷(gardenoside)等含量显著下降,黄芩素(baicalein)、槲皮素(quercetin)等含量显著升高。结论黄芩清肺汤中黄芩、栀子配伍后,可促进多种活性成分在合煎液中的溶出,这些成分可能是黄芩、栀子配伍协同增效的物质基础。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术快速解析杜仲颗粒化学成分

建立了定性分析杜仲颗粒化学成分的超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱组合式高分辨质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)方法。杜仲颗粒采用甲醇超声提取,Thermo Scientific Syncronis C 18 色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9 μm)分离,以乙腈-0.1 %甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱。利用LTQ-Orbitrap-MS负离子模式采集,通过对照品比对及高分辨质谱数据解析,鉴定了25种化学成分,包括8种环烯醚萜类、8种黄酮类、5种苯丙素类、3种木脂素类化合物及1种非还原性双糖。该方法简便、快速、准确,可为进一步分析杜仲颗粒的药效物质基础提供依据。

UPLC-LTQ-Orbitrap-MS快速识别驱虫斑鸠菊中多酚类化合物

目的:对驱虫斑鸠菊乙醇提取物中的化学成分进行分析鉴定。方法:采用超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱组合式高分辨质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)联用技术,总结驱虫斑鸠菊中黄酮类和咖啡酰奎宁酸类化合物的质谱裂解规律,建立其乙醇提取物中多酚类成分的快速识别方法,并对其中的化学成分进行识别。结果:从其乙醇提取物中初步鉴定出43种多酚类化合物,其中包括30种黄酮类成分和13种酚酸类成分。结论:有26种化合物是首次在驱虫斑鸠菊中发现。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术分析越鞠丸水提物的化学成分及入血成分

目的:系统分析越鞠丸水提物的化学成分及入血成分,为阐明越鞠丸抗糖尿病的药效物质基础提供依据。方法:基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术,结合对照品、碎片离子信息、数据库及相关文献信息,运用Xcalibur 2.1软件鉴定化学成分;通过比对空白血清、越鞠丸含药血清,分析入血成分;结合PharmMapper、SwissTargetPrediction数据库筛选越鞠丸入血成分治疗糖尿病的作用靶点,Cytoscape软件做网络拓扑分析并筛选关键靶点,使用Autodock Vina软件对代表性入血成分与关键靶点进行分子对接。结果:越鞠丸水提物中共鉴定出116种化合物,包括黄酮类、环烯醚萜类、有机酸类、核苷类等,并对化合物的药材来源进行归属,在此基础上,发现34种成分可入血;越鞠丸治疗糖尿病的关键靶点37个,咖啡酸、栀子苷、黄芩苷、小檗碱与PPARγ、AKT1、TNF的对接结果良好(结合能<–20 kJ·mol^(–1))。结论:通过系统分析越鞠丸水提物的化学成分及入血成分,发现34种入血成分可能是越鞠丸抗糖尿病潜在的有效成分。

痛泻要方水煎液化学成分的UPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析

目的:采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)快速鉴定痛泻要方水煎液中的化学成分。方法:色谱条件为ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~4 min,5%~15%B;4~10 min,15%~25%B;10~15 min,25%~60%B;15~20 min,60%~90%B;20~25 min,90%~100%B;25~27 min,100%B;27~30 min,100%~5%B;30~32 min,5%B),流速0.3 m L·min^(-1),进样量3μL,柱温35℃。质谱条件为电喷雾离子源(ESI),扫描范围m/z 100~1 250,正、负离子模式下分别采集MS、MS/MS数据。结合对照品、数据库和文献信息,运用Trace Finder 4.1和Xcalibur 2.1软件对痛泻要方水煎液进行化学成分鉴定。结果:在正、负离子模式下,从痛泻要方水煎液中共鉴定出90个化合物,主要为黄酮类、香豆素类、单萜糖苷类、色原酮类、内酯类。通过对所有化合物的药材来源进行归属,发现其中9个化合物来源于白术,21个化合物来源于白芍,24个化合物来源于陈皮,29个化合物来源于防风,另有7个化合物来源于至少2味药材。结论:该方法能快速、有效、全面地识别痛泻要方水煎液中的化学成分,明确了痛泻要方化学组成。鉴定出的化合物涵盖了4味组方药材的主要活性成分且丰度较高,说明痛泻要方提取方法和药材配比具有一定科学性,可为该方物质基础和质量评价研究提供参考。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS及网络药理学的复方黄柏液治疗糖尿病足活性成分研究

该研究采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)对复方黄柏液化学成分进行定性分析,色谱柱为Waters HSS T3-C18色谱柱(2. 1 mm×100 mm,1. 8μm),流动相为0. 1%甲酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速0. 3 m L·min^-1。根据化合物的母离子、子离子的质谱信息,对照品比对、文献信息进行成分鉴定。在此基础上,利用网络药理学研究方法,对复方黄柏液化学成分进行靶标预测、功能富集以及分子对接验证,筛选出与糖尿病足相关的活性成分、阐释其作用机制。结果表明,从复方黄柏液中共鉴定了138种化合物,包括:生物碱28种,黄酮类16种,苯乙醇苷类11种,环烯醚类9种,环已基乙醇衍生物11种,酚酸及衍生物28种,木脂素类3种,萜类4种,挥发油及其他28种。从中共筛选出36种与糖尿病足相关的活性成分。靶标功能富集结果表明复方黄柏液主要从调控炎症反应、生长因子等7个功能方面实现对糖尿病足的治疗。该研究结合LTQ-Orbitrap-MS质谱分析与网络药理学研究方法,为复方黄柏液的有效成分的识别、质量标志物的筛选以及解析其作用机制提供参考。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS和网络药理学探索黄芪桂枝五物汤治疗类风湿关节炎的作用机制及实验验证

该研究采用超高效液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)对黄芪桂枝五物汤(HQGZ)的主要活性成分进行分析,从黄芪桂枝五物汤中共鉴定出活性成分50种,基于鉴定的化学成分通过网络药理学分析共得到潜在作用靶点108个,其中关键靶点87个;在此基础上,对活性成分进行靶标预测、功能研究及疾病富集。关键靶点的功能富集分析结果表明,黄芪桂枝五物汤可能主要通过鞘脂信号传导途径、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路等途径,以及核糖核酸(RNA)聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、炎症反应等生物过程发挥治疗作用。在HQGZ的活性成分进行网络药理学分析及预测的基础上,结合类风湿关节炎的疾病特点,该研究对TNF信号通路中的关键蛋白进行细胞学实验进行验证,实验结果表明,HQGZ可以显著降低TNF-α诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的CASP3、TNF、RELA和IKBKB蛋白表达。UPLC-LTQ-Orbitrap-MS、网络药理学和实验验证结果表明,HQGZ中活性成分可能通过调控TNF信号通路中的关键蛋白,从而发挥抑制炎症反应、调节免疫功能及调控细胞凋亡的作用来治疗类风湿关节炎。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS的小儿扶脾颗粒的化学成分研究

目的系统阐明中药复方小儿扶脾颗粒中的化学成分,建立一种对中药复方复杂成分快速鉴定的液质分析方法。方法采用超高效液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)对小儿扶脾颗粒成分进行分析,色谱柱为Waters HSS T3-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min。根据UPLC-LTQ-Orbitrap-MS扫描提供化合物的准确相对分子质量、多级质谱数据、质谱碎片离子信息等,参照对照品、文献报道等进行成分鉴定。结果共鉴定了小儿扶脾中颗粒共84个化学成分,主要包括黄酮类、糖苷类、酚酸及其酯类等,并对各成分的药材来源进行归属,同时根据质量规律和多级质谱裂解规律建立了快速鉴定黄酮类以及多甲氧基黄酮类化合物的方法。结论对小儿扶脾颗粒的化学成分进行了较为全面的分析,为其药效物质基础研究及质量控制提供了一定的理论依据。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS方法分析半夏泻心汤化学成分

目的:基于超高效液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)技术鉴定半夏泻心汤化学成分。方法:采用Dikma Endeavorsil C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水-乙腈为流动相体系,梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,质谱采用电喷雾(ESI)离子源,以正、负离子模式采集多级质谱碎片信息。结果:通过对照品比对、精确相对分子质量、多级质谱碎片信息,结合文献报道,从半夏泻心汤中鉴定出99个化学成分,包括54个黄酮类、10个生物碱类和16个皂苷类化合物,还有脂肪酸类、酚酸类、醇类、内酯等其他成分。结论:本研究建立的分析方法灵敏、高效,可应用于半夏泻心汤各类化学成分的鉴定分析,为研究半夏泻心汤药效物质基础和作用机制提供重要依据。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析四妙勇安汤的化学成分

基于超高效液相-离子阱-静电场轨道肼质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap MS)技术分析鉴定四妙勇安汤水煎液的化学成分。采用UPLC BEH C;色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 mL·min^(-1)。质谱使用加热电喷雾离子源(HESI),负离子模式采集数据。通过对照品比对总结各类成分裂解规律,结合精确相对分子质量和一二级质谱信息,以及相关文献和MassBank、HMDB等数据库的数据支持,从四妙勇安汤中鉴定出72个化学成分,包括30个环烯醚萜苷类,9个有机酸类,15个黄酮类,10个苯丙素类,7个三萜类和1个糖类成分。该研究建立的四妙勇安汤化学成分的鉴定方法较为全面、快速、准确,总结了四妙勇安汤各类型成分的裂解规律,为其物质基础和药效作用机制的阐明奠定基础。

UPLC⁃LTQ⁃Orbitrap⁃MS法分析甘草干姜汤配伍前后化学成分变化

目的采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)法分析甘草干姜汤配伍前后的化学成分变化。方法该药物的分析采用Dikma Endeavorsil C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm);流动相0.1%甲酸-乙腈,梯度洗脱;电喷雾离子源,负离子模式采集多级质谱信息,通过对照品、精确相对分子质量等质谱信息及文献报道,鉴定配伍前后的化学成分变化。结果共鉴定出66种成分,其中新甘草苷、新异甘草苷、桑辛素、光甘草酮等15种成分为配伍前后的差异物质。结论该方法灵敏、高效,可较全面反映甘草干姜汤配伍前后化学成分变化,为其配伍机制的阐释奠定基础。

UPLC⁃LTQ⁃Orbitrap⁃MS/MS法分析软坚清脉颗粒化学成分

目的建立UPLC-LTQ-Orbitrap-MS/MS法分析软坚清脉颗粒化学成分。方法该复方颗粒50%甲醇提取液的分析采用Acquity UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相0.1%甲酸水-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min。通过对照品、文献、Mass Frontier软件预测裂解规律,鉴定化学成分。结果共鉴定出58种成分,包括22种黄酮、9种萜类、3种脂肪酸、4种羧酸、20种其他类成分。结论该方法快速准确,可为软坚清脉颗粒物质基础和质量控制研究提供依据。

六味地黄丸入血、入脑成分分析

目的分析六味地黄丸入血、入脑成分。方法12只大鼠随机分为2组,分别灌胃给予双蒸水、六味地黄丸混悬液(1.62 g/kg),于0.5、1、1.5、2 h采血,抽取脑脊液,超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)法进行分析。结果共鉴定出38种入血成分,其中29种为原型,9种为代谢产物,同时还鉴定出10种原型入脑成分。结论六味地黄丸入血、入脑成分大多有神经保护作用,可为该制剂抗中枢神经系统疾病作用的发挥奠定物质基础。

基于UPLC/LTQ Orbitrap Velos MS的创伤性脑损伤代谢组学分析

目的联合非靶向和靶向代谢组学技术检测创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)差异代谢物,并评估其与病情严重程度及预后的关系。方法选取徐州医科大学附属医院2022年8月至12月就诊的TBI患者(TBI组)和体检健康者(健康人对照组)各40例,应用超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱组合式高分辨质谱(UPLC/LTQ Orbitrap Velos MS)筛选并验证差异代谢物。记录40例TBI患者入院12 h内格拉斯哥昏迷评分(glasgow coma scale,GCS)和伤后6个月格拉斯哥预后评分(glasgow outcome scale,GOS),结合差异代谢物评估疾病严重程度和预后。结果验证的4个差异代谢物(谷氨酸、尿酸、肌酐和乳酸)存在显著分离趋势,TBI组谷氨酸和乳酸水平显著高于健康人对照组,尿酸和肌酐水平显著低于健康人对照组;随着伤情加重,TBI患者谷氨酸和乳酸水平逐渐升高,尿酸和肌酐水平逐渐降低;影响预后不良的4种代谢物组ROC曲线下面积(AUC ROC)为0.818,敏感性为76.9%,特异性为81.5%(P<0.05)。结论谷氨酸、乳酸、尿酸和肌酐与TBI患者病情密切相关,四者联合或可用于预测TBI的预后。

基于血浆代谢组学和网络药理学探讨芎芷地龙汤治疗偏头痛的作用机制

目的:基于网络药理学和血浆代谢组学探讨芎芷地龙汤(Xiongzhi Dilong decoction,XZDLD)对降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)诱导的偏头痛的作用机制。方法:采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法(ultra-high-performance liquid chromatography-linear trap quadrupole orbitrap mass spectrometry,UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)对XZDLD的化学成分进行鉴定。经硬脑膜套管注射CGRP建立偏头痛大鼠模型,通过观察大鼠偏头痛样行为、测定机械痛阈和温度痛阈评估XZDLD治疗偏头痛的疗效。基于网络药理学和血浆代谢组学的联合分析识别其治疗偏头痛的关键靶点,并应用蛋白免疫印迹法和免疫组织化学对相关蛋白进行验证。结果:应用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS共识别出方中38个化合物。与模型大鼠相比,XZDLD各组在前30分钟显著改善了偏头痛样行为(均P<0.05),并在第19‒22天提高了机械痛阈(均P<0.05),在第20‒22天提高了温度痛阈(均P<0.05)。基于网络药理学识别出128个XZDLD治疗偏头痛的潜在靶点。基于血浆代谢组学识别出在对照组、模型组和XZDLD组中有17种不同的内源性代谢产物,主要与色氨酸和酪氨酸代谢途径相关。将二者联合分析后确定了6个关键靶点进行验证:MAOA、MAOB、CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1和ADH1C。与模型组相比,XZDLD显著降低了MAOA、MAOB和CYP1B1蛋白的表达(P=0.024;P=0.004;P=0.039),并升高了CYP1A1、CYP1A2和ADH1C的表达(P=0.033;P=0.045;P=0.027)。结论:芎芷地龙汤可以改善大鼠偏头痛样行为,提高痛阈,其作用机制可能与调节色氨酸和酪氨酸代谢途径有关,为其临床应用提供依据,同时为偏头痛研究提供思路。

超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱法测定纺织品中的游离态致癌芳香胺

建立了超高效液相色谱.线性离子阱／静电场轨道阱高分辨质谱（ UPLC.LTQ／Orbitrap MS）同时测定纺织品中24种游离态致癌芳香胺的方法。样品经二氯甲烷超声提取并稀释后，用ZORBAX SB.C18色谱柱（150 mm×2.1 mm，5μm）分离，以0.1％甲酸水溶液和甲醇为流动相，电喷雾正离子（ ESI＋）模式电离，以准分子离子峰的精确质量数和保留时间定性，以提取的色谱图峰面积定量。在0.5～500μg／L范围内，24种芳香胺的线性相关系数（ R2）大于0.99，样品加标回收率为87.8％～105.6％，相对标准偏差为1.6％～3.4％。方法检出限为0.5～1μg／kg。应用本方法检测山东地区进出口含氨纶纺织品样品14个，在5个样品中检出游离态芳香胺4，4′.二氨基二苯甲烷，含量范围为0.21～25.6 mg／kg。