UPLC-Q Exactive-Orbitrap MS法同时测定牛黄降压丸中15种胆酸类成分的含量

采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q Exactive-Orbitrap MS)进行牛黄降压丸中15种成分(牛磺胆酸、7-酮-3α,12-α-羟基胆烷酸、甘氨胆酸、3-氧代脱氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、猪胆酸、牛磺脱氧胆酸钠、猪去氧胆酸、胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、牛磺石胆酸钠、鹅去氧胆酸、去氧胆酸)的含量测定。色谱条件:采用Thermo Fisher Scientfic Bremen HYPERSIL GOLD(100 mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱,以0.1%甲酸水-甲醇为流动相,进行梯度洗脱;质谱采用加热电喷雾离子源(HESI)负离子模式,平行反应监测(PRM)扫描模式测定数据。结果表明,15种胆酸类成分在各自的质量浓度范围内具有良好的线性关系(r≥0.9990),加样回收率均在93.7%~105.2%之间(n=9)。采用建立好的方法测定15批样品的含量,结果表明不同批次牛黄降压丸中胆酸类成分的含量差异较大。本研究为牛黄降压丸的全面质量控制提供究提供思路及参考。

UPLC-Q Exactive静电场轨道阱高分辨质谱法同时测定金胆片中6种成分的含量

目的 建立UPLC-Q Exactive静电场轨道阱高分辨质谱法同时测定金胆片中龙胆苦苷、虎杖苷、芦丁、白藜芦醇、槲皮素、山柰素的含量。方法 分析采用HYPERSIL GOLD C18色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.9μm);流动相甲醇-0.2%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温35℃;电喷雾离子源;负离子扫描。结果 6种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 03),平均加样回收率96.4%~97.9%,RSD 0.6%~2.0%。结论 该方法快速简便,精密度好,灵敏度高,可用于金胆片的质量控制。

基于UPLC-Q/TOF的中药麻黄和麻黄根化学成分差异分析

本研究旨在分析中药麻黄和麻黄根的差异成分,以期发现麻黄和麻黄根功效相反的关联原因。通过超声提取法制备12种麻黄和麻黄根提取物,应用UPLC-Q/TOF对其化学成分进行检测,应用β2-AR双荧光素酶报告基因系统对相反功效进行研究,应用主成分分析法对差异成分进行分析。研究发现麻黄和麻黄根所含化学成分种类及其共有成分的含量均有较明显差别,这是其功效相反的主要原因。同时,这个快速且系统的方法对麻黄和麻黄根药材质控的标准化有着非常重要的作用,或许会成为建立其他中药材甚至食品关联活性质控的一个强有力的方法工具。

UPLC-Q/TOF-MS法快速分析天麻醒脑胶囊的化学成分及血中移行成分

目的采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术对天麻醒脑胶囊化学物质组和入血成分进行辨识研究,初步阐明其可能的药效物质基础。方法本研究建立了一种超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用方法鉴别天麻醒脑胶囊的化学成分。采集并分析大鼠给药后的血浆样品,探究天麻醒脑胶囊在大鼠体内暴露成分。结果通过UPLC-Q/TOF-MS分析,共鉴别出天麻醒脑胶囊组方中195种化学成分,分为苯酚类、三萜皂苷类、苯乙醇苷类、环烯醚萜类、脂质类和苯丙素类等,包含了天麻、地龙、肉苁蓉、熟地黄、远志、石菖蒲的特征性成分。在给药大鼠血浆样品中鉴定出37个天麻醒脑胶囊原型成分和3个代谢产物。结论该方法简便高效、灵敏准确,初步阐明了天麻醒脑胶囊的药效物质基础,对天麻醒脑胶囊及其入血成分进行了较全面地研究。本研究为天麻醒脑胶囊的药效物质基础的阐明提供了依据,对揭示天麻醒脑胶囊的药理作用机制具有一定参考意义。

基于UPLC-Q/TOF-MS技术结合多元统计学方法分析乳香醋炙前后化学成分

目的:对乳香及醋乳香的化学成分进行快速分析,并找到醋炙前后差异成分。方法:采用UPLC-Q/TOFMS技术对乳香及醋乳香的化学成分进行数据采集,UNIFI Protal软件结合自建乳香化学成分数据库对乳香及醋乳香化学成分进行定性分析;Progenesis QI软件和EZinfo 2.0软件对采集得到的谱图进行峰标准化、峰提取、峰对齐、峰匹配校正等处理,得到包含化合物保留时间和质荷比信息。利用SIMCA-P 14.0软件进行主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA),探讨乳香醋炙前后的差异成分。结果:从乳香和醋乳香中共鉴定出98个成分;通过PCA和OPLS-DA结果表明乳香醋炙前后化学成分含量存在明显差异,通过VIP>1筛选得到27个差异成分,包括15个二萜类、1个酚类、11个三萜类化合物。结论:醋炙可以使乳香中的化学成分发生明显变化。

基于UPLC-Q/TOF-MS研究广西甜茶在大鼠体内的入血成分

目的:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q/TOF-MS)法分析大鼠口服广西甜茶后的入血成分,为阐明其活性成分在机体转化和代谢情况提供基础。方法:超声法提取药物;大鼠灌胃给予广西甜茶提取物后,采用眼球后静脉丛取血;收集不同时间段的血浆,通过超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q/TOF-MS)法,比较广西甜茶提取物、大鼠空白血浆、灌胃给予广西甜茶的大鼠血浆,初步鉴定和推测灌胃给予广西甜茶后大鼠血浆中的入血成分。结果:本实验共鉴定出50个原型入血成分,主要包括10个多酚类成分,13个黄酮类成分,20个二萜类成分,7个三萜类成分。结论:本实验初步阐明了广西甜茶中的入血成分,为其活性成分在机体转化和代谢情况提供基础,且为广西甜茶的后续开发利用提供了理论依据。

UPLC-Q/Orbitrap HRMS测定口服液中6种西地那非衍生物的不确定度分析

为了保证高分辨质谱法测定壮阳类口服液中西地那非类似物的结果准确性和可靠性,对测定结果进行不确定度评定是十分必要的。本研究采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q/Orbitrap HRMS)测定口服液保健食品中6种西地那非衍生物的含量,依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》,建立数学模型,进行测量不确定度评定。当口服液中N-去甲基西地那非、去甲基硫代西地那非、二甲基西地那非、羟基硫代豪莫西地那非、硫代豪莫西地那非、硫代西地那非的含量为0.90、1.04、1.22、2.01、1.51、1.14 mg/kg时,扩展不确定度分别为0.07、0.09、0.10、0.16、0.13、0.09 mg/kg(k=2)。评定结果表明,不确定度主要来自UPLC-Q/Orbitrap HRMS仪器、标准溶液配制、回收率和随机效应。

基于UPLC-Q Exactive Orbitrap-MS的不同产地半枝莲药材差异分析

目的采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q Exactive Orbitrap-MS)技术,结合多元统计分析半枝莲药材不同产地的差异代谢物,为分析影响药材质量的指标控制提供依据。方法采集不同产地半枝莲质谱数据,以热图Pearson聚类、主成分分析(Principal components analysis,PCA)、偏最小二乘法判别分析(Partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)等多元统计分析手段,确定不同产地半枝莲药材的差异成分。结果通过数据库比对共鉴别39个化合物,聚类热图结果表明21批样品可以分为5类,且在31个化合物上存在明显差异,PCA结果分析得到3个主成分可以实现不同产地半枝莲的区分,累积解释率为93.68%,其中野黄芩苷对主成分1影响较大,黄芩苷、芹菜素对主成分2影响较大。PLS-DA可以实现5个产地样本的分离,通过特征值大于1,得到关键差异化合物与PCA结果一致。结论所建立的方法能用于不同产地半枝莲药材差异分析及质量评价。

基于UPLC-Q/TOF-MS的甘草酸单铵和甘草酸二铵在大鼠体内移行成分表征

目的采用超高效液相色谱-四极杆/飞行时间高分辨质谱技术(UPLC-Q/TOF-MS)对甘草酸单铵和甘草酸二铵在大鼠体内的代谢轮廓进行表征,探讨两者可能的代谢途径。方法大鼠分别灌胃给予甘草酸单铵和甘草酸二铵后,收集不同时间点大鼠脑组织、血浆、尿液、粪样等生物样本。经沉淀蛋白后,采用UPLC-Q/TOF-MS技术,以含0.1%甲酸的水-乙腈为流动相进行梯度洗脱;在正离子模式下采集生物样本的质谱数据。采用质量残差亏损过滤技术并结合原型成分的质谱裂解规律,预测代谢物类型,对两者相关的体内代谢产物进行鉴定。结果甘草酸单铵和甘草酸二铵在大鼠体内主要以代谢物形式存在,共鉴定得到20个代谢产物,两者主要通过肠道排泄,在体内原型化合物脱糖基形成的甘草次酸基础上发生一系列的Ⅰ相氧化还原反应是主要代谢类型;甘草次酸是在生物样本中主要暴露成分,提示了其可能是甘草酸单铵及甘草酸二铵在体内发挥药效的关键药效成分。结论首次阐明了甘草酸单铵及甘草酸二铵在大鼠体内的代谢轮廓,为进一步对两者发挥功效作用的物质基础及药效作用机制揭示和开发利用提供参考。

基于UPLC-Q/TOF MS技术的痛风患者血清代谢组学研究

采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q/TOF MS)对恩施土家族苗族自治州60例健康志愿者(对照组)和65例痛风患者(痛风组)的血清样本建立代谢图谱,基于主成分分析及正交偏最小二乘判别分析对所得数据进行模式识别,并结合变量权重投影分析及火山图筛选出痛风患者的血清代谢标志物。通过数据分析和数据库检索,共筛选出63种差异代谢物,其中27种代谢物显著上调(P<0.05),36种代谢物显著下调(P<0.05),主要包括甘油磷脂类、氨基酸类及胆碱等成分。首先,对以上差异代谢物进行受试者工作特征曲线(ROC)分析,其中曲线下面积(AUC)大于0.8的14种代谢物是诊断效能较好的代谢物;然后对筛选的63种差异代谢物进行代谢通路富集分析,以Impact>0.1且P <0.05为标准,得到影响最大的代谢通路主要有甘油磷脂代谢、醚性脂质代谢、亚油酸代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、花生四烯酸代谢及戊糖和葡萄醛酸的互相转化等。综上,痛风患者和健康对照人群的血清代谢水平有明显差异,差异代谢物的鉴定为痛风的发病机制和早期筛查提供了实验依据。

UPLC-QE/MS法分析丹参酒炙前后5种质变化合物

目的通过UPLC-QE/MS法分析丹参Salvia miltiorrhiza Bge.酒炙前后5种质变化合物(迷迭香酸、丹酚酸B、隐丹参酮、二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ_A)的转化机制。方法采用已知对照品模拟炮制技术,制备丹参酒炙前后5种质变化合物的模拟炮制品,其80%甲醇溶液的分析采用Halo C_(18)柱(100 mm×2.1 mm,2.7μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;柱温45℃;体积流量0.25 mL/min;检测波长280 nm。结果丹参中5种主要成分发生了质变,丹酚酸B模拟炮制品中检出了丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸C;隐丹参酮模拟炮制品中检出了丹参酮Ⅱ_A;二氢丹参酮Ⅰ模拟炮制品中检出了极少的丹参酮Ⅰ;丹参酮Ⅱ_A模拟炮制品中检出了二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅰ;迷迭香酸模拟炮制品中检出了丹参素、咖啡酸、阿魏酸。结论丹参酒炙后主要酚酸类成分和丹参酮类成分均发生了质变。

UPLC-Q/TOF-MS法测定虎杖中虎杖苷、白藜芦醇、大黄素在高脂血症鼠体内的药代动力学

目的:基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q/TOF-MS)的高分辨多反应监测扫描模式(MRMHR),建立同时测定虎杖中指标性成分虎杖苷、白藜芦醇和大黄素血药浓度的分析方法,并研究其在高脂血症模型鼠体内的药代动力学特征。方法:以乙酸乙酯液液萃取法前处理血浆样本,采用乙腈-0.1%甲酸水二元梯度洗脱系统,经Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱分析,进行MRMHR定量。采用DAS软件估算高脂血症模型鼠灌服虎杖提取物后指标性成分的药代动力学参数。结果:虎杖苷血药浓度在1~1000 ng·mL^(-1),白藜芦醇和大黄素的血药浓度在0.5~500 ng·mL^(-1)范围内,线性关系均良好。批内和批间精密度、准确度、稳定性以及基质效应均符合生物样本检定要求。高脂血症模型鼠灌服虎杖提取物后,3个指标性成分可快速达到血药浓度峰值,其中虎杖苷体内暴露量最大;大黄素血药浓度-时间曲线呈现双峰现象,且体内暴露量最小。结论:该方法灵敏度高、准确性好、专属性强,成功应用于高脂血症模型鼠体内虎杖指标性成分的药代动力学研究。

基于UPLC-Q TOF/MS^E方法的凉血活血胶囊口服给药后入血成分初探

利用血清药物化学方法以及先进的UPLC-Q TOF/MSE技术对凉血活血方含药血清进行研究,初步鉴定了大黄素、芍药苷、羟基茜草素及紫草萘醌类化合物四个成分,分别来自方中的大黄、赤芍、茜草及紫草。揭示了凉血活血方的体内部分化学成分,为凉血活血胶囊的制剂工艺再优化及作用机理阐释奠定基础。

基于UPLC-Q/TOF-MS技术的尖叶假龙胆全成分分析

目的:利用UPLC-Q/TOF-MS技术对尖叶假龙胆的化学成分进行分析。方法:采用75%乙醇浸泡尖叶假龙胆30 min,热回流提取、过滤、回收、浓缩、冷冻干燥,最后得到尖叶假龙胆提取物冻干粉。利用正、负离子模式分别对尖叶假龙胆提取物进行采集分析。结果:在正、负离子模式下表征了65个成分,包括木脂素类、香豆素类、苯丙素类、环烯醚萜类、黄酮类、生物碱类、有机酸类、糖苷类等。结论:本研究建立了基于UPLC-Q/TOF-MS技术的尖叶假龙胆全成分分析方法,可为尖叶假龙胆药材的质量评价与药效物质基础研究提供参考。

“桂枝与白芍”药对化学成分UPLC-Q/TOF-MS分析

目的采用液质联用技术(UPLC-Q/TOF-MS)对"桂枝与白芍"药对中的化学成分进行定性分析。方法采用Agilent 1290 UPLC和YMC-Triart C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱进行快速物质分离;流动相为乙腈-0.1%冰醋酸梯度洗脱;温度:30℃;进样量:5μL;检测波长:254 nm;流速:0.3 mL/min;AB 5600质谱使用ESI离子源分别在正离子与负离子模式下采集数据。结果结合对照品确认了8个化合物,通过质谱信息与相关文献数据推测13个化学成分,对其进行成分归属。其中主要含有没食子酸、原儿茶酸等6种有机酸,芍药苷、芍药内酯苷等10种芍药总苷单萜类化合物及香豆素类成分。结论采用UPLC-Q/TOF-MS确定"桂枝与白芍"药对中的化学成分,为阐明"桂枝与白芍"药对的药效物质基础提供有力的证据。

基于UPLC-Q/TOF MS及网络药理学的丹参川芎嗪注射液抗血瘀活性成分和机制研究

运用网络药理学方法研究丹参川芎嗪注射液抗血瘀的活性成分及机制,采用UPLC-Q/TOF MS技术测定其化学成分,通过UNIFI天然产物分析平台,对比各成分的精确分子质量、保留时间及质谱碎片离子信息,并分析鉴定其结构。利用里宾斯基五规则筛选出全成分中的活性成分,运用TCMSP、DisGeNET、DAVID等数据库预测活性成分的作用靶点、疾病靶点和生物通路,通过Cytoscape软件构建活性成分、作用靶点、生物通路网络。本实验共鉴定出40个成分,经筛选得到20个活性成分,涉及51个疾病靶点,作用于PI3K-Akt、MAPK等10条信号通路。该方法初步揭示了丹参川芎嗪注射液的药效物质基础,可为阐明该注射液抗血瘀作用机制提供参考。

UPLC-Q TOF MS^E与镜像对比分析四种麻黄炮制过程的成分变化

利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q TOF MS^E)技术采集麻黄和其不同炮制品的复杂化学成分数据,通过对比分析,探究蜜炙、醋制、酒制、炒炭4种炮制过程中麻黄非挥发性化学成分的变化。根据时间依赖型质谱扫描模式(MS^E)采集的超高精度样品数据快速识别麻黄及其炮制品中的主要化学成分,并结合镜像对比分析,总结不同炮制工艺对化学成分与变化趋势的影响。结果显示,与生品麻黄相比,炮制品中共有4类主要成分:生物碱、黄酮、烯烃和有机酸,21种非挥发性化学成分发生变化。其中,生物碱类成分均有所下降,以酒制和炒炭炮制品下降最多;黄酮、烯烃和有机酸类成分经蜜炙后含量上升,而在其他炮制品中含量下降。麻黄及其炮制品物质基础复杂,药效是多类成分共同作用的结果,不同炮制过程会使麻黄的化学成分发生明显变化,炮制品功效可能会随之改变,该方法可为麻黄炮制的现代化研究提供物质基础,也可为临床区别用药提供借鉴。

基于UPLC-Q/TOF-MS技术对丹参川芎嗪注射液在大鼠体内代谢的研究

目的研究大鼠注射丹参川芎嗪注射液后,在体内的代谢产物,研究该制剂在大鼠体内的生物转化途径。方法采用超高效液相色谱与四极杆-飞行时间串联质谱联用技术(UPLC-Q/TOF-MS)对大鼠血浆、尿液、粪便、胆汁进行分析,鉴定注射液主要成分的代谢产物。结果在血浆、尿液、粪便、胆汁中共发现了13个代谢产物,主要的代谢途径包括羟基化、羧基化、乙酰化、硫酸酯化和葡萄糖醛酸化。结论该方法简便、高效、灵敏,可快速鉴别丹参川芎嗪注射液在大鼠体内的代谢产物,为更好地阐明丹参川芎嗪注射液在体内的代谢途径提供参考。

基于UPLC-Q/TOF-MS法研究“建昌帮”炆何首乌主成分差异

目的 比较炆何首乌与其他不同炮制品之间主成分的差异,为深入研究炆何首乌炮制机制提供数据支撑。方法 采用UPLC-Q/TOF-MS法检测何首乌不同炮制品中的化学成分,选择 ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm),流动相 0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B),梯度洗脱(0~18 min,5%~40%B;18~30 min,40%~95%B;30~35 min,95%B;35~35.1 min,95%~5%B;35.1~38 min,5%B),电喷雾离子源(ESI),负离子模式,质谱扫描范围 m/z 100~1500,通过对照品、相对分子量、质谱裂解规律和文献信息,鉴定何首乌化学成分;利用Marker view软件,建立何首乌各炮制品主成分分析(PCA)模型,获取 PCA 得分图。结果 鉴定出何首乌不同炮制品中的25个化合物,PCA分析显示不同何首乌炮制品之间的主成分差异较大。在负离子模式下,发现何首乌经炆制后有15个成分峰面积明显升高(CI>1.5),3个明显降低(CI<0.5);其主要成分2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚、大黄素等均明显升高。结论 不同炮制方法对何首乌主要有效成分二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚等含量影响较大,尤其是何首乌炆制品,含量升高最明显,可为阐述“建昌帮”炆何首乌炮制机制提供数据支撑。

UPLC-Q/TOF-MS结合UNIFI库快速分析西洋参茎叶三醇皂苷

对由西洋参茎叶总皂苷制得的西洋参茎叶三醇皂苷的化学成分进行快速分析鉴定,为阐明其药效物质基础提供参考。采用超高效液相色谱与飞行时间质谱联用(UPLC-Q/TOF-MS)技术对西洋参茎叶三醇皂苷化学成分进行分析。通过UNIFI天然产物平台,对比各成分的精确分子质量、保留时间及质谱碎片离子信息,对其中三萜皂苷类化学成分进行了快速分析与鉴定,共鉴定出31个三醇皂苷类化学成分,其中20位碳侧链未发生变化的21种,20位碳侧链发生变化的10种。本研究首次全面地对西洋参茎叶三醇皂苷化学成分进行了鉴定,为其药效物质基础阐明提供了科学依据。