基于UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS、网络药理学和实验验证探讨裸花紫珠抗H1N1活性成分及其作用机制

本实验首先对裸花紫珠的提取物进行萃取,得到不同的萃取部位,然后对各部位进行抗甲型流感病毒H1N1型(H1N1)活性筛选,确定裸花紫珠乙酸乙酯萃取部位(EACN)具有较好的体外抗H1N1的活性。采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱联用(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术对EACN进行定性分析。基于定性分析的结果,进一步使用数据挖掘和网络药理学,评估药物的活性成分、关键靶点和关键通路,最后使用H1N1感染BALB/c小鼠模型对预测结果进行验证。结果显示,在各个萃取部位中,乙酸乙酯部位体外抗H1N1效果最佳,半数抑制浓度(IC_(50))为51μg/mL,半数细胞毒浓度(CC_(50))为859.4μg/mL,选择指数(SI,CC_(50)/IC_(50))为16.85。从EACN中鉴定出34种化合物,在此基础上,利用网络药理学,筛选出和EACN抗H1N1相关的药物靶点67个,靶点共涉及生物过程491个,与抗H1N1相关的通路147个。H1N1感染BALB/c小鼠实验结果发现,EACN能改善H1N1感染引起的体重降低和肺指数的增加,降低小鼠肺组织的病毒载量,减轻小鼠肺组织的病理损伤,降低外周血血清中TNF-α、IFN-γ、IL-1β水平。实验结果提示EACN可能从直接抑制病毒、抗炎作用和免疫调节作用等多个途径发挥抗H1N1的作用。

UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS法同时测定牛黄上清片中18种胆汁酸的含量

目的 建立超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)法同时测定牛黄上清片中牛磺胆酸、7-酮-3α,12-α-羟基胆烷酸、甘氨猪去氧胆酸、12-脱氢胆酸、甘氨胆酸、3-酮-7α,12α-二羟基-5β-胆烷酸、牛磺鹅去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、猪胆酸、牛磺脱氧胆酸钠、猪去氧胆酸、胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、牛磺石胆酸钠、鹅去氧胆酸、去氧胆酸、石胆酸的含量。方法 分析采用Thermo Fisher Scientfic Bremen HYPERSIL GOLD色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.9μm);流动相0.1%甲酸-甲醇,梯度洗脱;体积流量0.2 mL/min;柱温40℃;加热电喷雾离子源;负离子扫描;平行反应监测模式。再进行化学模式识别。结果 18种胆汁酸在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率96.73%~104.07%,RSD 2.10%~4.07%。不同厂家样品中各胆汁酸在种类和含量上存在一定差异。结论 该方法灵敏可靠,专属性好,可用于牛黄上清片的质量控制。

基于UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS隔山消化学成分的鉴定

目的采用超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱高分辨质谱联用技术(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)对苗药隔山消中的化学成分进行定性分析。方法隔山消75%甲醇提取液采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7μm);流动相0.1%甲酸-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温40℃;进样量2μL。质谱采用ESI源,在正、负离子模式下分别采集数据。通过比对特征碎片离子及各类化合物的一般裂解规律,结合相关文献对化学成分进行定性鉴别。结果共鉴别出64个化合物,包括甾类、苯乙酮类、香豆素类等。结论该研究采用UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技术鉴定隔山消中的化学成分,为进一步阐明隔山消中的有效物质基础提供依据。

基于UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS的新癀片化学成分分析

目的采用超高效液相色谱-四极杆-静电轨道场离子阱质谱(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术对新癀片中的化学成分进行鉴定分析。方法对新癀片粉末进行加热回流提取,采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18色谱柱(1.7μm,2.1 mm×150 mm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温40℃,进样量5μL;采用ESI源在正、负离子模式下分别采集数据。根据化合物精确质荷比及二级碎片离子信息,结合参考文献数据,鉴定新癀片水提液中的主要化学成分。结果从新癀片水提液中鉴定出54个化学成分,包括皂苷、胆酸、酚酸、香豆素等各类化合物。结论本研究首次采用UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技术研究新癀片中的化学成分,为新癀片成分及机制层面的研究奠定基础。

UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS法鉴定白花蛇舌草注射液中化学成分

目的采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱联用技术(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)辨别分析白花蛇舌草注射液中化学成分。方法采用Waters Acquity UPLC HSS T3 C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,柱温30℃,体积流量0.30 mL/min,样品室温度10℃,进样体积10μL。采用电喷雾离子源(ESI),正、负离子模式下采集数据。通过NIST质谱数据库检索,结合保留时间、分子离子、主要碎片,并根据文献资料,推测其化学成分。结果白花蛇舌草注射液中共鉴定出22个化合物,其中包括黄酮类7个、有机酸类7个,糖类3个、萜类2个、嘌呤2个、丁香脂素和酚苷各1个。结论建立的方法能快速、准确、高效鉴定白花蛇舌草注射液中多种化学成分,为阐明白花蛇舌草的药效物质基础提供参考。

基于UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS整合网络药理学探讨金银花抗RSV肺炎的作用机制

目的:基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术、网络药理学和整体动物实验药理学的方法,初步探讨金银花抗RSV肺炎的作用机制。方法:采用滴鼻法建立呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)肺炎小鼠模型,设立空白组、模型组、阳性对照组、金银花低、中、高剂量给药组,以小鼠体质量、肛温、肺指数以及IFN-γ、TNF-α、MCP-1、IL-10、IL-6、IFN-β的变化为指标,探讨金银花抗RSV肺炎的作用机制。采用UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS对金银花中成分进行表征。采用网络药理学,将已定性成分-靶点网络与RSV肺炎-靶点网络进行映射,构建成分-RSV肺炎靶点网络。同时利用STRING数据库筛选网络中核心靶点,导入Cytoscape 3.6.1软件,构建核心靶点PPI网络,计算拓扑参数,推测核心靶点。结果:与模型组比较,各金银花给药组小鼠体质量均增加,肛温及肺指数均下降,炎性因子(IFN-γ、TNF-α、MCP-1、IL-10、IL-6)含量增加或减少,且有显著性差异;对金银花中39个成分进行表征,结合网络药理学获得成分对应靶点277个,疾病靶点390个,去重后生成PPI网络,PPI网络中根据度值确定核心靶点为TNF、AKTI、TLR4、IL-10、IL-2。结论:通过网络药理技术和整体动物实验推测,金银花可以通过下调TLR4/NK-κB通路,减少TNF-α、IL-6、IL-10等炎性因子的表达;作用于T细胞、自然杀伤细胞进而上调免疫因子IFN-γ的表达;降低MCP-1含量,减少炎性损伤、巨噬细胞的产生来协同发挥抗RSV感染肺炎的作用。

不同产地密蒙花指纹图谱研究

目的:建立UPLC指纹图谱结合化学模式识别以及化学成分分析的密蒙花药材质量评价方法。方法:建立密蒙花药材UPLC指纹图谱,采用化学计量法分析不同产地的密蒙花药材质量差异,采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)对指纹峰进行鉴别。结果:20批密蒙花药材指纹图谱相似度在0.9以上,确定了11个共有峰并得到鉴定,各批样品之间的相似度在0.9以上。聚类分析将20批密蒙花分为3类;主成分分析表明主成分1、2、3是影响密蒙花药材质量的主要因子,OPLS-DA分析筛选出6个差异性标志物。结论:该研究为深入密蒙花药材质量控制研究提供科学依据。

基于LC-MS及分子对接探讨白花蛇舌草注射液抗胃癌活性成分及作用机制

目的:采用UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS(LC-MS)和分子对接方法,探讨白花蛇舌草注射液抗胃癌活性成分及作用机制。方法:通过LC-MS分析鉴定白花蛇舌草注射液的化学成分,运用GeneCards在线疾病数据库筛选胃癌相关疾病靶点,采用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白-蛋白互作网络图(PPI)和拓扑学分析,采用分子对接技术验证白花蛇舌草注射液中化学成分与疾病靶点的相互关系。结果:经LC-MS分析,白花蛇舌草注射液共鉴定出22个化合物,通过GeneCards在线筛选出胃癌相关疾病靶点35个,其中TP53、PTEN、PIK3CA、MLH1、KRAS为核心靶点。分子对接结果显示化合物灯盏花甲素、3-阿拉伯糖葡糖基槲皮素、松三糖、槲皮素-3-鼠李糖甙、麦芽三糖、帕拉金糖、羟异栀子苷与TP53、PTEN、PIK3CA、MLH1、KRAS中的一个或多个靶点具有较好的结合作用。结论:灯盏花甲素、3-阿拉伯糖葡糖基槲皮素、松三糖等是白花蛇舌草注射液治疗胃癌的主要活性成分,其作用机制可能与胃癌TP53、PTEN、PIK3CA、MLH1、KRAS靶点相关。