基于UPLC-Q-TOF/MS整合网络药理学探讨平肝益肾方治疗自发性高血压大鼠靶器官损害的效应机制

目的 探究平肝益肾方治疗自发性高血压大鼠靶器官损害的效应机制。方法 使用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)测定平肝益肾方的化学成分,结合网络药理学方法对平肝益肾方的化学成分进行靶标分析、功能富集,预测平肝益肾方治疗高血压及其靶器官损害的潜在作用机制。将自发性高血压大鼠随机分为模型组、平肝益肾方低剂量组(2 g·kg^(-1))、平肝益肾方高剂量组(5 g·kg^(-1))和缬沙坦组(7.2 mg·kg^-1)),每组6只。Wistar-Kyoto大鼠作为对照组,对照组和模型组大鼠灌胃生理盐水,连续灌胃8周。采用HE和Masson染色,观察大鼠心脏和胸主动脉的病理学损伤和纤维化程度。采用免疫组织化学染色和Western blot检测大鼠心脏、肝脏和肾脏中EGFR的表达水平。采用免疫荧光染色检测大鼠心脏、肝脏和肾脏中EGFR和EEA1共定位情况。结果 通过UPLC-Q-TOF/MS检测出平肝益肾方中的26种化学成分。网络药理学揭示EGFR、PIK3R1和EP300等可能是平肝益肾方治疗高血压及其靶器官损害的关键治疗靶点,平肝益肾方治疗高血压及其靶器官损害可能与EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性、血脂与动脉粥样硬化和HIF-1信号通路等密切相关。平肝益肾方高剂量组可显著降低大鼠的收缩压和平均动脉压(P<0.05,P<0.01),减轻心脏和胸主动脉的病理学损伤和纤维化程度(P<0.01,P<0.001),显著降低大鼠肝脏和肾脏中EGFR的表达水平(P<0.01),改善肝脏与肾脏的纤维化,显著降低肾脏中EGFR和EEA1的共定位水平(P<0.001),调节EGFR在早期内体的堆积,改善肾脏的纤维化。结论 整合UPLC-Q-TOF/MS、网络药理学和自发性高血压大鼠模型初步探索平肝益肾方治疗高血压及其靶器官损害的效应机制,为平肝益肾方治疗高血压进一步的机制研究和临床应用提供科学依据。

基于UPLC-Q-TOF/MS技术的白及中菲类化学成分分析

目的采用UPLC-Q-TOF/MS技术结合整合定性策略对白及中菲类化学成分进行快速定性分析。方法采用ACQUITY UPLC HSS T3柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以乙腈溶液(A)-体积分数为0.1%甲酸溶液(B)为流动相体系进行梯度洗脱,柱温为40℃,流速为0.4 mL·min^(-1);采用Xevo G2 Q-TOF质谱,ESI离子源,负离子检测模式;整合了质量亏损过滤技术、产物离子过滤技术、中性丢失过滤技术和化学结构-色谱保留关联技术,对白及的质谱测试结果进行数据挖掘,通过化学成分数据库建立、UNIFI平台自动筛查、对照品比对和人工校验核实等步骤对菲类化学成分进行表征。结果在白及中共表征了104种化学成分。结论该方法能够快速准确的表征白及中菲类化学成分,为阐明白及的药效物质基础和建立质量控制标准提供了科学依据。

基于UPLC-Q-TOF/MS的连桂宁心汤体外与入血成分分析及鉴定

目的采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(ultra-performance liquid chromatography-quadrupole-time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS)对连桂宁心汤化学成分和入血成分进行分析,初步阐明其可能的药效物质基础。方法采用ACQUITYTM UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为A(0.1%甲酸的水溶液)-B(0.1%甲酸的乙腈溶液),梯度洗脱,柱温为45℃,进样量为5μL。采用电喷雾离子源,正/负离子双模式检测,离子源温度120℃,脱溶剂和雾化气为高纯N_(2),锥孔N_(2)反吹流量50 L/h,锥孔电压30 V;毛细管电压3.0 kV(正)/2.0 kV(负);脱溶剂温度450℃,流量800 L/h;分子量范围50~1200 Da。结果结合文献报道和一级MS、二级MS/MS高分辨质谱数据,在连桂宁心汤水煎液中鉴定出68个成分,以黄酮类、生物碱类、三萜类为主,在给药大鼠血浆样本中鉴定出33个成分,以黄酮类、生物碱类、三萜类、挥发油类为主,其中黄酮类及生物碱类鉴定出的成分数量及丰度较体外明显降低。结论UPLC/Q-TOF MS/MS技术是鉴定中药复方成分的有效手段,结合连桂宁心汤化学成分及其入血成分,初步阐明连桂宁心汤的药效物质基础,为探讨其作用机制及其质量控制提供了有效的科学依据。

基于UPLC-Q-TOF/MS的甘青青兰化学成分鉴定及其疏肝和胃的网络药理学研究

目的:采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术对甘青青兰的化学成分进行鉴别,并利用网络药理学和分子对接技术初步分析甘青青兰疏肝和胃的作用机制。方法:依据质谱分析结果结合文献对甘青青兰中的化学成分进行鉴定,借助TCMSP平台及PubChem数据库预测成分潜在作用靶点,通过GeneCards及OMIM数据库筛选疏肝和胃相关靶点,利用STRING数据库建立靶点蛋白相互作用PPI网络,开展“药物-成分-靶点-通路”网络的构建与分析,获取网络中的核心靶点与关键组分,再基于DAVID数据库进行GO富集分析和KEGG通路分析,最后利用分子对接技术进行初步验证。结果:最终从甘青青兰中鉴定出33个化合物,包括黄酮类21个、酚酸类9个、三萜类3个。其中,丹酚酸I、胡麻素-5-O-葡萄糖苷、胡麻素-4'-O-葡萄糖苷、3'-甲氧基藿香素-7-O-葡萄糖苷、胡麻素-3'-O-(6''-O-乙酰基)-葡萄糖苷为首次在本植物中鉴定出来的5个化合物。网络药理学分析结合分子对接验证预测,甘青青兰主要通过熊果酸、齐墩果酸、白桦脂酸作用于GAPDH、ACTB、ALB、TP53、AKT1、TNF、HSP90AA1等靶点,调节脂质与动脉粥样硬化、癌症的发病途径及缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、白细胞介素-17(IL-17)等信号通路发挥疏肝和胃作用。结论:甘青青兰发挥疏肝和胃功效是多成分、多靶点、多途径协同作用的结果,此为进一步开展甘青青兰治疗肝胃不和证候的质量标志物及新药开发等研究提供科学依据。

基于UPLC-Q-TOF/MS技术的枳实大鼠血清药物化学研究

目的:运用血清药物化学方法分析大鼠口服枳实后的入血成分,初步阐明其可能的药效物质基础。方法:采用Agilent ZORBAX SB-C_(18)(3.0 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,飞行时间质谱作为检测器分析样品。通过比较枳实提取物、空白血浆以及给药血浆的图谱差异,根据保留时间、精确相对分子质量、二级质谱裂解碎片及代谢产物的中性丢失等,鉴定大鼠灌胃给予枳实提取物后的血中原形成分及其代谢产物。结果:在给药后的大鼠血清中分析表征了21个入血成分,其中15个原形成分、6个代谢产物。结论:借助UPLC-Q-TOF/MS方法鉴定了大鼠口服枳实后血清中的化学成分,初步分析了枳实的入血成分,为阐明枳实质量标志物提供了理论依据。

UPLC-Q-TOF/MS法分析大柴胡汤体内外成分

目的建立超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)法分析大柴胡汤的体内外成分。方法该药物分析采用Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相0.1%甲酸-乙腈、0.1%甲酸-水,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温45℃;电喷雾离子源;正负离子扫描。大鼠灌胃给药3 d后采血,取肝脏、心脏、结肠、肾脏,根据保留时间、精确相对分子质量、一级和二级质谱数据,结合相关对照品、参考文献鉴定血浆和各组织中成分分布。结果共鉴定出60种成分,包括黄酮类33种、蒽醌类7种、酚酸类2种、黄烷醇类1种、类黄酮类1种、异黄酮类1种、香豆素类1种、其他类14种,从大鼠血浆、心脏、肝脏、结肠、肾脏中分别检测到15、5、6、11、7种成分。结论该方法可为大柴胡汤药效物质基础及其作用机制研究提供实验依据。

厚朴姜制前后化学成分UPLC-Q-TOF/MS分析

目的借助超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF/MS)对厚朴及其姜制品的成分进行快速分类及鉴定,分析炮制前后的化学成分变化。方法采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液(A)和0.1%甲酸乙腈(B)进行梯度洗脱,在正负离子模式下扫描,结合对照品、数据库及相关文献,运用MassLynx软件对厚朴及姜制品进行化学成分鉴定,分析主要成分裂解过程;并结合软件进行主成分分析和差异性分析,筛选得到厚朴炮制前后差异成分。结果鉴定出38种成分,并筛选出10种主要差异性成分,其中厚朴木脂素A、木兰醛B经姜制后不存在,厚朴木脂素E、和厚朴酚、厚朴酚、辣薄荷基厚朴酚含量减少,武当木兰碱、木兰箭毒碱、木兰花碱、降荷叶碱含量增加。结论厚朴中主要含有苷类、木脂素类及生物碱类成分,姜制后生物碱类和木脂素类成分产生了量变,这可能是导致厚朴姜制前后功效不同的主要原因,为厚朴临床应用提供了一定科学依据。

UPLC-Q-TOF/MS法鉴定不同基原水柏枝的化学成分

目的鉴定不同基原水柏枝的化学成分,筛选种间差异成分。方法采用UPLC-Q-TOF/MS法定性分析水柏枝药材中的化学成分,结合偏最小二乘法判别分析和方差分析筛选种间差异成分。结果从中得到36个化合物,包括6个黄酮类、17个酚酸类、2个生物碱类、3个氨基酸、8个其他类。首次发现4个品种(秀丽水柏枝Myricariae elegans、具鳞水柏枝M.squamosa、三春水柏枝M.paniculata、小花水柏枝M.wardii)之间的差异标志物为水柏枝素A、阿福豆苷、对羟基桂皮酸、3,4-二甲氧基没食子酸、没食子酸甲酯、2,4,6-三羟基苯甲酸甲酯、香草酸甲酯。结论该方法准确可行,可用于鉴定不同基原水柏枝药材的化学成分差异,为其品种鉴别和临床应用提供参考。

UPLC-Q-TOF/MS法分析对叶百部蜜炙前后化学成分的变化

目的采用超高效液相-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)法分析对叶百部Stemona tuberosa Lour.蜜炙前后化学成分的变化。方法分析采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱;以0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈为流动相,梯度洗脱;正离子模式下采集数据。主成分分析(PCA)法和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)法进行数据处理。结果蜜炙后,百部宁、oxystemoninine、百部碱、N-氧-对叶百部碱及其同分异构体、对叶百部碱H含有量减少。结论对叶百部蜜炙前后化学成分差异显著,可能是该植物增效减毒的物质基础。

UPLC-Q-TOF/MS法鉴定大鼠体内甘草素的代谢产物

[目的]研究甘草素在大鼠体内的代谢产物。[方法]采用静脉注射(iv)、灌胃(ig)两种给药方式,剂量20 mg/kg,收集大鼠血浆、尿液、粪便、胆汁,应用UPLC-Q-TOF/MS法鉴定甘草素的代谢产物。[结果]血浆、尿液、粪便、胆汁样品中共鉴定15种代谢产物,主要有异甘草素、(异)甘草素葡萄糖醛酸结合物和硫酸结合物、二氢异甘草素、二氢异甘草素硫酸结合物、异甘草素甲基化及甘草素脱氢的代谢产物;其主要代谢途径为异构化、葡萄糖醛酸化、硫酸化、甲基化、脱氢反应。[结论]构建的UPLC-Q-TOF/MS法可用于大鼠体内甘草素代谢产物的研究。

UPLC-Q-TOF/MS法快速分析血塞通、血栓通注射液化学成分

目的通过超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF/MS)法快速分析血塞通、血栓通注射液化学成分。方法这些药物20%乙腈提取液的分析采用Acquity UPLC HSS T3 C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm);以水-乙腈为流动相,梯度洗脱;柱温40℃;体积流量0.2 mL/min。结果共鉴定出46种皂苷类成分,并首次检测到以人参二醇脱氢产物为苷元母核的新型皂苷。结论该方法快速准确,可用于血塞通、血栓通注射液的质量控制。

UPLC-Q-TOF/MS技术结合诊断离子方法快速分析连钱草中黄酮类化合物

建立了超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术结合诊断离子法快速分析连钱草中黄酮类化合物。采用信息依赖型的扫描(IDA)模式,在电喷雾负离子模式下分析黄酮标准化合物的裂解规律及特征碎片离子信息,并以标准物质的特征碎片离子作为诊断离子,全面鉴别连钱草中的黄酮类成分。在连钱草中共鉴别出35个黄酮类化合物,其中有25个化合物为在该植物中首次发现;除白杨素、芹菜素、毛蕊异黄酮、木犀草素、山奈酚、槲皮素外,其他化合物均以黄酮苷的形式存在。该方法可为连钱草的质量控制及药效学研究提供技术支持。

UPLC-Q-TOF/MS法鉴定兽药磺胺二甲嘧啶在小鼠血液和尿液中的代谢产物

采用UPLC-Q-TOF/MS联用技术鉴定了兽药磺胺二甲嘧啶在小鼠血浆和尿液样品中的代谢产物.并运用Q-TOF质谱仪进行MS和MS/MS精确质量数的测定,得到磺胺二甲嘧啶和各个代谢产物的准确分子质量和化学组成.依据精确质量数据,结合Metabolynx XS辅助软件鉴定兽药磺胺二甲嘧啶在ESI源正离子模式下的代谢产物.研究结果表明,磺胺二甲嘧啶在小鼠的血样和尿样中主要的目标代谢途径为乙酰化反应,非目标代谢途径主要为甲基化和结合反应.

基于UPLC-Q-TOF/MS^E快速分析绵茵陈中化学成分

目的应用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS^E)对绵茵陈提取物中化学成分进行分析。方法以Acquity BEH C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.7μm)为色谱柱,乙腈和0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),采用ESI电喷雾源正离子模式检测。通过自建数据库与UNIFI自带数据库结合检索得到初筛化合物,人工复核各化合物的相对保留时间、分子质量、特征碎片等信息,并结合对照品信息和文献信息对其进行验证。结果共鉴定出41个化合物,包括13个黄酮类、6个香豆素类、11个有机酸类和11个其他类化合物。其中9个化合物为在绵茵陈中首次发现。结论对绵茵陈中的化学成分进行了快速的分析,为绵茵陈的质量控制和药效物质基础研究提供了参考。

基于UPLC-Q-TOF/MS技术的玉竹化学成分分析

目的应用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)对玉竹甲醇提取物进行了化学成分分析。方法色谱采用waters C18色谱柱(2.1×100 mm,1.7μm),0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈梯度洗脱,质谱负离子模式扫描。结果共表征或鉴定30个化合物,包括15个高异黄酮类成分,8个酰胺生物碱类成分、4个螺甾皂苷类成分及3个其他成分,其中8个化合物为玉竹质谱分析的首次报道。结论 UPLC-QTOF/MS技术能够提供丰富稳定的裂解碎片离子,为进一步研究玉竹体内药效物质基础提供科学基础数据。

基于UPLC-Q-TOF/MS技术分析砂连和胃胶囊的化学成分

目的采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术对砂连和胃胶囊中的化学成分进行定性分析。方法提取方法为甲醇超声溶解,色谱柱为Waters CORTECS UPLC C18柱(1.6μm,2.1 mm×100 mm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱(洗脱程序:0~18 min,5%~95%B;18~20 min,95%B;20~23 min,95%~5%B;23~25 min,5%B),体积流量为1 mL·min^-1,柱温为40℃,进样量为2μL,质谱采用ESI源,正、负离子两种模式下采集数据,依据高精度的质量数和同位素丰度比确定化合物的分子式,通过特征碎片离子比对、各类化合物一般裂解规律,结合文献报道,确定化合物的结构式,从而对检测到的化学成分进行定性分析。结果共鉴别和推测出72个化学成分,包括黄酮类、生物碱、香豆素、有机酸等多种类型。详细描述了其中有代表性的15种成分的裂解规律。结论该研究首次采用UPLC-Q-TOF/MS技术对砂连和胃胶囊中的各类化学成分进行研究,为进一步阐明砂连和胃胶囊中的有效物质基础、选择合理的质控指标提供了依据。

UPLC-Q-TOF/MS法分析芒萁化学成分

目的:运用超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)对芒萁二氯甲烷及正丁醇萃取部位的化学成分进行分析鉴定。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸溶液-乙腈作为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL/min;质谱采用电离子喷雾离子源,于正、负离子模式下收集数据;使用Peakview软件的XIC Manager功能进行分析,结合对照品和相关文献查找比对,确定化合物结构式。结果:从芒萁两个萃取部位中共鉴定出61个化合物,其中黄酮类化合物34个,萜类化合物11个,其他类化合物16个。结论:UPLC-Q-TOF/MS具有高分离度、高灵敏性的特点,快速、准确地分析了芒萁中二氯甲烷部位和正丁醇部位的化学成分,为芒萁的开发利用提供参考依据。

基于UPLC-Q-TOF/MS法分析不同产地前胡药材质量

目的基于超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)法分析不同产地前胡药材的质量。方法前胡药材甲醇提取物的分析采用ZORBAX Eclipse plus C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相甲醇-水,梯度洗脱;柱温30℃;体积流量1 mL/min;检测波长270 nm。电喷雾离子源(ESI),正离子模式;扫描范围m/z 100～1 500;毛细管电压3 500 V;碎裂电压170 V;干燥气(N_2)体积流量10 L/min;干燥气温度350℃;雾化气压力344.75 kPa;碰撞诱导解离(CID)能量35 eV;碰撞气N_2。结果白花前胡甲素、白花前胡乙素、白花前胡E素分别在0.131 2～2.100μg(r=0.999 7)、0.062 5～1.030 0μg(r=0.999 6)、0.087 5～1.430 0μg(r=0.999 9)范围内线性关系良好,平均回收率分别为101.2%、99.7%、96.8%,RSD分别为1.3%、1.4%、1.7%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于前胡药材的质量控制。

基于UPLC-Q-TOF/MS法分析车前子生品和盐炙品化学成分研究

目的:利用超高效液相串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)法分析车前子及其盐炙品的成分,比较盐炙前后药物化学成分种类和含量的变化,探究车前子炮制前后药效变化的物质基础。方法:ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱;流动相:0.1%乙酸水-甲醇体系梯度洗脱;ESI离子源;负离子模式;基于Markerlynx分析软件,利用主成分分析法(PCA)和正交偏最小二乘判别法(OPLS-DA)分析车前子盐炙前后指纹图谱的差异。结果:盐炙品中京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的含量相对生品高。京尼平苷酸和毛蕊花糖苷可作为化学标记物区分生品与盐炙品。结论:基于UPLC-Q-TOF/MS法建立了车前子炮制前后的化学成分分析方法。车前子盐炙后有效成分含量增加。本实验的研究成果对于研究车前子盐炙的炮制原理具有重要意义,同时也为车前子盐炙品药效物质基础的阐明提供了重要依据。

UPLC-Q-TOF/MS结合指纹图谱在抱龙丸质量控制中的应用

目的:基于UPLC-Q-TOF/MS鉴定抱龙丸中的化学成分,建立UPLC指纹图谱。方法:采用Agilent ZORBAX SB-C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱;流动相为0.1%甲酸溶液-乙腈,梯度洗脱;流速为0.2 mL/min;柱温为30℃;进样量为4μL;以ESI为离子源,正、负离子模式分别采集一级、二级质谱数据。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004 A版)”建立指纹图谱共有模式,并进行相似度评价、聚类分析及偏最小二乘判别分析。结果:通过软件预测及文献数据,从抱龙丸中鉴定出46个成分。指纹图谱确定60个共有峰,13批样品与对照图谱的相似度为0.957~0.995。聚类分析及偏最小二乘判别分析均可将样品分为2类。结论:利用UPLC-Q-TOF/MS法系统阐明抱龙丸中化学成分,结合指纹图谱可为抱龙丸的质量控制提供参考。