隔山消治疗溃疡性结肠炎的机制:基于UPLC-QE-MS、网络药理学及代谢组学技术

目的基于UPLC-QE-MS与网络药理学挖掘隔山消防治溃疡性结肠炎(UC)的靶点及通路,并结合代谢组学技术探讨作用机制。方法采用UPLC-QE-MS技术鉴定隔山消醇提物化学成分,基于Swiss Target Prediction、GeneCards、Pubchem等数据库筛选相应靶点,获取核心PPI,进行GO、KEGG富集分析。将40只雄性C57小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组(0.2 g/kg)、隔山消组(2.28 g/kg),每组10只,除正常组外,其余各组自由饮用2.5%DSS诱导UC模型,造模期间给药组给予药物灌胃干预。通过体质量变化率、DAI得分评价治疗效果;HE及AB-PAS染色观察结肠组织病理变化;Western blotting技术检测JAK2、STAT3蛋白水平;代谢组学技术鉴别差异代谢物并挖掘代谢通路。结果鉴定出隔山消醇提物化学成分240个,其中甾体类(高含量)19个,得到隔山消(甾体类)靶点177个,UC基因5406个,隔山消与UC交集基因117个,JAK2、STAT3等为核心PPI,在脂质与动脉粥样硬化等通路富集显著。动物实验结果显示,经隔山消治疗后,小鼠体质量变化率上升、DAI评分显著下降(P<0.05),肠组织病理改变明显缓解,JAK2、STAT3蛋白水平显著降低(P<0.05)。鉴定出正常组、模型组及隔山消组之间交集差异代谢物83个,以甘油磷脂、类花生酸、氨基酸成分为主,与甘油磷脂代谢等通路相关。整合分析显示隔山消治疗UC的核心靶点参与了代谢物的调节。结论隔山消可通过调节JAK2、STAT3等核心靶点表达及内源性代谢物水平来缓解脂质及氨基酸代谢紊乱,发挥治疗UC的作用。

UPLC-QE-MS联合网络药理学分析补中益气丸治疗溃疡性结肠炎的机制及实验验证

目的:在网络药理学和实验验证的基础上,探讨补中益气丸在治疗溃疡性结肠炎中的作用机制。方法:采用UPLC-QE-MS对补中益气丸进行定性分析。从GeneCards中检索到化学成分和疾病的靶点,然后构建蛋白质-蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction networks,PPI),从GO term分析和KEGG通路分析中筛选核心靶点,建立溃疡性结肠炎小鼠模型,验证其关键靶点。结果:共筛选出123个交集靶点和24个核心靶点,共鉴定出补中益气丸的41种化学成分。KEGG分析和PPI网络分析表明,补中益气丸可能通过Akt、PI3K等途径在溃疡性结肠炎的治疗中发挥作用。动物实验结果显示,补中益气丸可显著改善溃疡性结肠炎的症状,降低血清中IL-6和TNF-α水平(P<0.01),抑制Akt-PI3K信号通路,降低PI3K蛋白表达(P<0.05)。结论:补中益气丸可能通过抑制AktPI3K信号通路,抑制PI3K表达,降低IL-6和TNF-α水平,在溃疡性结肠炎中发挥作用。

基于网络药理学和UPLC-QE-MS探讨和肝汤治疗功能性消化不良的作用机制

目的 通过网络药理学分析和分子对接以及超高效液相色谱-四级杆静电场轨道阱质谱(ultra performance liquid chromatography q exactive mass spectrometry, UPLC-QE-MS)非靶向代谢组学法,探讨和肝汤治疗功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)的潜在作用机制。方法 首先,通过TCMSP、TCMID数据库提取和肝汤相关的活性成分;通过DisGeNET、CTD和GeneCards数据库提取FD相关基因靶点;采用Cytoscape3.7.0建立处方-活性成分-靶点网络;由STRING构建蛋白相互作用(Protein-Protein interaction,PPI)网;通过R进行GO分析和KEGG通路富集分析,并采用MOL2和AutoDock进行分子对接;运用UPLC-QE-MS技术对和肝汤活性成分进行分析。结果 共筛选出76个和肝汤活性成分和75个FD潜在治疗靶标。处方-活性成分-靶点网络显示:山柰酚、槲皮素、金合花素、木犀草素、桉树醇、丁香酚等8个活性成分,以及p53、前列腺素E受体2、核因子红系2相关因子2、胱天蛋白酶3、钾电压门控通道亚家族H成员2这5个靶点基因在网络中存在最多关联,而肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)和白介素(interleukin,IL)-8等在PPI网络中MCC度最高。富集分析提示TNF和IL-17信号通路可能是关键的信号通路。UPLC-QE-MS结果显示,和肝汤颗粒内共识别出644个成分,其中10个成分与候选成分相匹配。分子对接显示山柰酚和刺芒柄花素与TNF、IL-8、IL-1β和IL-2具有较强的结合能力。结论 和肝汤含有山柰酚和刺芒柄花素等多种活性成分,其可能通过包括TNF信号通路、IL-17信号通路等多个通路和TNF、IL-8、IL-1β和IL-2等多个靶点,发挥免疫炎症调节作用,进而对FD产生治疗作用。

鼠曲草抗COPD有效成分及作用机制研究:基于UPLC-QE-MS结合网络药理学

目的:系统研究鼠曲草的化学成分,并探讨其发挥治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的主要药效成分和潜在作用机制。方法:运用UPLC-QE-MS技术,通过XCMS软件对鼠曲草提取物正、负离子质谱数据进行分析,应用TCMSP数据库获取鼠曲草活性成分及靶点;以GeneCards和OMIM数据库检索、获取疾病靶点,使用Venny 2.1.0找出药物-疾病共同靶点。应用Metascape数据库对共同靶点进行GO功能富集分析、KEGG通路富集分析。结果:在Composite Score>0.99的情况下UPLC-QE-MS共鉴定出化合物133个,其中正离子模式鉴定82个成分、负离子模式鉴定51个。基于各数据库收集,共获得10个鼠曲草活性成分及185个可用于后续分析的靶点,1637个COPD作用靶点(Relevance score≥20),交集靶点共91个。GO生物过程共449条,包括BP有23条、MF 128条、CC 91条;KEGG相关信号通路包括p53信号通路、PI3K-Akt信号通路、IL-17信号通路、HIF-1信号通路、MAPK信号通路等。结论:采用UPLC-QE-MS技术进行定性分析,方法稳定可靠,为鼠曲草的质量控制提供了一定的参考依据。网络药理学研究表明,鼠曲草防治COPD的作用机制具有“多成分、多通路、多靶点”的特点,研究结果可为阐明鼠曲草的药理作用机制提供重要参考。

基于UPLC-QE-MS技术分析甘姜苓术配方颗粒的化学成分

目的研究甘姜苓术配方颗粒的化学成分,为后续的研发和应用奠定基础。方法采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B)为流动体系,采用电喷雾离子源,正、负离子模式下进行数据采集。结果共鉴定出67个化合物,包含22个黄酮类化合物、6个酚类化合物、10个苯丙素类化合物、10个萜类化合物、5个生物碱类化合物、5个氨基酸类和9个其他类化合物。结论对甘姜苓术配方颗粒的化学成分进行定性分析,为甘姜苓术配方颗粒的质量控制和临床应用提供了一定的依据。

基于UPLC-QE-Orbitrap-MS/MS技术分析新疆鼠尾草乙酸乙酯提取物化学成分及入血成分

目的采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-QE-Orbitrap-MS/MS)技术分析新疆鼠尾草乙酸乙酯提取物(Ethyl acetate extraction of Salvia deserta Schang,SDS-EE)的化学成分及入血成分。方法新疆鼠尾草根加20倍量95%乙醇,85℃回流提取3次,每次2.5 h,浓缩得醇提浸膏,加水混悬后,再加等比例的乙酸乙酯萃取5次即得SDS-EE。取SD大鼠12只,随机分成空白组和给药组,每组6只。给药组灌胃给予SDS-EE溶液160 mg·kg^(-1)·d^(-1),空白组灌胃给予相同体积0.5%CMC-Na溶液,连续给药20 d。采用三氯化铁诱导建立SD大鼠血栓模型,腹主动脉取血并收集血清样品。采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸乙腈溶液(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.5 mL/min,进样量5μL,采用UPLC-QE-Orbitrap-MS/MS技术,利用Orbitrap Exploris 120质谱,在正、负离子两种模式下获取SDS-EE和血清样品中化合物的相对分子质量、二级质谱裂解碎片离子信息和保留时间,结合相关文献、对照品比对和数据库信息,分析鉴定SDS-EE和吸收入血的化学成分。结果从SDS-EE中共鉴定出52个化合物,包括7个苯丙素类、3个香豆素类、12个萜类、7个酚酸类、3个醌类、5个醛类、5个黄酮类、9个有机酸类和1个其它类。鉴定出入血成分11个,其中9个为原型成分,2个是代谢产物,其主要代谢途径为氧化反应。结论通过UPLC-QE-Orbitrap-MS/MS技术快速分析了新疆鼠尾草SES-EE的化学成分及入血成分。

基于UPLC-QE-Orbitrap-MS/MS和网络药理学探讨肉苁蓉水提物治疗糖尿病肾病的作用机制

探究肉苁蓉水提物(the aqueous extract of Cistanche tubulosa,AECT)化学成分和AECT治疗糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的作用机制。利用UPLC-MS/MS对化合物进行分析鉴定;借助PubChem、GeneCards、OMIM、DAVID等数据库预测有效成分防治DN的作用靶点及通路,对核心基因进行GO、KEGG富集分析,并使用Cytoscape软件构建“成分-靶点-通路”可视化网络图。MTT法测定AECT的抗DN活性;生化试剂盒检测过氧化指标超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxide,GSH-Px)含量水平;ELISA法检测炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)水平;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率;Western blot检测相关蛋白的表达。从AECT中共鉴定出84个化学成分,并推测出15个化合物可能的裂解途径;筛选出AECT治疗DN的70个潜在靶点和多个信号通路。体外实验发现AECT能够增加高糖高脂环境中的HK-2细胞存活率抑制细胞凋亡;并上调SOD活性和GSH-Px含量,抑制炎症因子IL-1β、TNF-α和TGF-β表达水平;Western blot结果证明AECT影响PI3K-AKT信号通路。本研究初步探明了AECT中的主要有效成分及其治疗DN的潜在靶点与作用机制,为AECT治疗DN后续的深入研究提供思路。

基于UPLC-QE-HF-MS/MS技术分析红凉伞化学成分及入血成分

目的 分析红凉伞提取物化学成分及入血成分,初步阐明其可能的药效物质基础。方法 采用配对比较法将12只大鼠随机分为空白组和红凉伞给药组,每组6只。每天上、下午各给药1次,连续3 d;第4天再次给药后,取血后制备血清样品。采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱技术对红凉伞提取物和血清样品中化学成分进行分析鉴定。使用Compound Discoverer 3.0软件进行保留时间矫正、峰识别、峰提取等工作,根据二级质谱信息,利用Thermo mzCloud在线数据库、Thermo mzVault本地数据库,并参照有关文献和对照品质谱信息,初步鉴定红凉伞化学成分及入血成分。结果 从红凉伞提取物中共鉴定出34个化合物,主要为香豆素类、黄酮类、有机酸类、氨基酸类等成分,包括岩白菜素、槲皮素、没食子酸、L-焦谷氨酸等化合物;从血清样本中共鉴定出5个入血成分,分别为L-焦谷氨酸、丁香酸、岩白菜素、朱砂根皂苷A、麦考酚酸。结论 本研究初步推测L-焦谷氨酸、丁香酸、岩白菜素、朱砂根皂苷A、麦考酚酸是红凉伞的药效物质基础。

基于液质联用技术和网络药理学方法探讨神牡安神胶囊改善失眠的潜在药效成分和作用机制

目的研究神牡安神胶囊治疗神经衰弱引起失眠的药效物质基础及潜在作用机制。方法运用UPLC-QE-Orbitrap-MS并结合文献,对神牡安神胶囊的主要化学成分进行分析鉴定;通过TCMSP数据库及文献查阅对神牡安神胶囊的潜在有效成分进行筛选及补充;通过Swiss Target Prediction数据库预测活性成分潜在靶点;搜索OMIM、GeneCards及TTD数据库获取失眠症相关靶点;使用Venny软件收集成分靶点-疾病靶点交集,在Cytoscape软件中构建药物-成分-靶点网络图;利用STRING平台构建PPI网络,借助Metascape数据库对交集靶点进行GO富集分析与KEGG通路分析,利用Cytoscape构建成分-靶点-通路图。进一步建立对氯苯丙氨酸(PCPA)诱导的失眠小鼠模型,通过延长戊巴比妥钠睡眠时间实验考察神牡安神胶囊改善失眠动物模型睡眠的作用,通过ELISA法检测各组小鼠血清中5-羟色胺(5-HT)水平,考察神牡安神胶囊改善睡眠的可能机制。结果通过与数据库对比、文献分析以及质谱裂解规律解析,从神牡安神胶囊样品中鉴定出40个化合物;通过网络药理学共筛选出122个候选成分和917个预测靶点,与失眠共同靶点185个,关键靶点主要涉及TP53、EP300、HDAC1、TNF、APP等;KEGG富集分析预测神牡安神胶囊主要通过神经退行性病变相关信号通路(pathways of neurodegeneration-multiple diseases)、多巴胺能突触信号通路(dopaminergic synapse)、帕金森病信号通路(Parkinson disease)及5-羟色胺能神经突触信号通路(serotonergic synapse)等信号通路发挥治疗失眠作用。延长戊巴比妥钠睡眠时间实验中,与模型组相比,神牡安神胶囊中、高剂量组小鼠睡眠时间显著延长(P<0.01);小鼠血清中5-HT的含量也明显升高(P<0.05)。结论初步明确了神牡安神胶囊的化学组成及其治疗神经衰弱失眠症的作用机制,其改善小鼠失眠作用可能是通过激活脑内抑制性单胺类神经递质,增加中枢对睡眠中枢的控制而发挥作用。

基于超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱和网络药理学技术的清肝颗粒质量评价研究

目的:阐明清肝颗粒治疗黄疸性肝炎的物质基础,建立科学的质量控制方法。方法:采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术对清肝颗粒的活性成分进行表征分析;以清肝颗粒中鉴定出的活性成分为目标对象,进行网络药理学和分子对接研析,并建立多成分含量测定方法。结果:共鉴定出134个成分,其中黄酮类50个、糖苷类8个、苯丙素类17个、三萜类11个、萜类6个、氨基酸类11个、有机酸类9个、脂肪酸类7个、生物碱类8个、挥发油类5个、醌类1个,并解析了黄酮类、萜类、有机酸类、生物碱类以及糖苷类代表性化合物的裂解规律。通过网络药理学分析筛选出8个核心靶点。预测了主要活性成分为异甘草素、腺苷、甘草素、鸟苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸等。其次,依据可测性、特征性以及活性相关性的原则,建立了3,4-二咖啡酰奎宁酸、(R,S)-告依春、甘草素、4,5-二咖啡酰奎宁酸和甘草酸铵等5个潜在活性成分的含量测定方法。结论:筛选出了清肝颗粒治疗黄疸性肝炎的主要药效活性成分,并展开定量研究,可为清肝颗粒质量控制水平的提高提供了依据。

参芪调肾方的化学成分分析

目的分析参芪调肾方(SQTS)的化学成分。方法基于超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术,以ACQUITY UPLC BEH C_(18)为色谱柱,0.1%甲酸溶液-0.1%甲酸乙腈溶液为流动相(梯度洗脱),流速为0.4 mL/min,柱温为40℃,进样量为5μL;采用电喷雾电离源进行正、负离子扫描,扫描范围为m/z 100~1500。结合TCMSP、PubChem等数据库,建立SQTS活性成分数据库并结合相关文献进行成分鉴定。结果与结论从SQTS中共鉴定出131个化学成分,涉及萜类23个、黄酮类22个、苯丙素类21个、生物碱类12个、酚类11个、氨基酸衍生物9个、脂肪酰类4个、有机酸3个等,包括芦丁、川陈皮素、辛弗林、肉桂酸、人参皂苷Rg1等成分;主要成分的裂解过程涉及糖苷键断裂、脱水等。

前列闭尔通栓对脂多糖诱导的前列腺炎细胞模型的影响及作用机制研究

目的:在体外探讨前列闭尔通栓(QS)改善前列腺炎症的作用机制。方法:离体制备QS肠吸收溶液(IQS),利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-QE-Orbitrap-MS)对其进行成分分析。建立脂多糖(LPS)诱导的人前列腺癌细胞株PC-3细胞炎症模型。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测炎症介质的基因表达水平;采用蛋白质免疫印迹法检测Toll样受体4(TLR4)信号通路关键蛋白的表达水平;采用免疫荧光技术检测核因子κB/p65、活化蛋白-1(AP-1)亚基c-Jun和干扰素调节因子3(IRF3)的核转位情况。结果:IQS主要含有小檗碱、绿原酸、阿魏酸等活性成分,其在6.25~400μg/mL浓度范围内对PC-3细胞活力无明显影响。IQS(200μg/mL和400μg/mL)能显著抑制LPS刺激下炎症介质肿瘤坏死因子-α(TNFA)、白细胞介素-6(IL-6)、C-X-C基序趋化因子配体10(CXCL10)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP1)和环氧合酶2(COX2)基因的表达,并能剂量依赖性地降低TLR4信号通路关键蛋白:蛋白激酶B(AKT)、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、IκB激酶α/β(IKKα/β)、p65、p38、c-Jun、TANK结合激酶1(TBK1)及IRF3的磷酸化水平,同时抑制LPS诱导的p65、c-Jun和IRF3的核转位。结论:IQS能改善LPS诱导的PC-3细胞炎症反应,其作用机制可能与抑制TLR4信号通路有关。

辛夷标准汤剂化学成分分析:基于UPLC-QE-Orbitrap-MS/MS技术

目的:采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS/MS)分析两种基原辛夷(望春花、武当玉兰)标准汤剂的化学成分。方法:采用YMC Triart C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm),以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱;采用HESI离子源,正、负离子分析模式采集数据,通过高分辨质谱解析结合文献报道以及对照品进行比对鉴别。结果:结合文献报道以及对照品比对共鉴别出56个化合物,包括26个木脂素类化合物、13个苯丙素类化合物、10个生物碱类化合物以及7个黄酮苷类化合物,其中7个化合物经对照品比对确定。结论:通过UPLC-QE-Orbitrap-MS/MS技术分析了两种基原辛夷(望春花、武当玉兰)标准汤剂的主要化学成分,为深入研究其药效物质基础以及建立辛夷标准汤剂质量标准提供参考依据。

UPLC-QE/MS法分析丹参酒炙前后5种质变化合物

目的通过UPLC-QE/MS法分析丹参Salvia miltiorrhiza Bge.酒炙前后5种质变化合物(迷迭香酸、丹酚酸B、隐丹参酮、二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ_A)的转化机制。方法采用已知对照品模拟炮制技术,制备丹参酒炙前后5种质变化合物的模拟炮制品,其80%甲醇溶液的分析采用Halo C_(18)柱(100 mm×2.1 mm,2.7μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;柱温45℃;体积流量0.25 mL/min;检测波长280 nm。结果丹参中5种主要成分发生了质变,丹酚酸B模拟炮制品中检出了丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸C;隐丹参酮模拟炮制品中检出了丹参酮Ⅱ_A;二氢丹参酮Ⅰ模拟炮制品中检出了极少的丹参酮Ⅰ;丹参酮Ⅱ_A模拟炮制品中检出了二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅰ;迷迭香酸模拟炮制品中检出了丹参素、咖啡酸、阿魏酸。结论丹参酒炙后主要酚酸类成分和丹参酮类成分均发生了质变。

QuEChERS结合超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法同时测定全血中10种新型合成大麻素

建立了QuEChERS结合超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-QE-Orbitrap MS)同时测定全血中10种新型合成大麻素的分析方法。全血样本经优化的QuEChERS法提取后,采用Hypersil GOLD^(TM) Vanquish色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm),以0.1%甲酸水和0.1%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱分离,在加热电喷雾离子源正离子/平行反应监测(HESI+/PRM)模式下同时进行检测。结果表明,10种目标物质在对应质量浓度范围内呈良好线性,相关系数(r^(2))均不小于0.9990,检出限(LOD)为0.01~0.05 ng/mL,定量下限(LOQ)为0.05~0.20 ng/mL,回收率为92.1%~115%,基质效应为86.6%~115%,日内相对标准偏差(RSD)均不大于8.5%,日间RSD均不大于10%。该方法具有操作简便、选择性好,检测灵敏度及回收率高的特点,适用于法庭科学全血样本中合成大麻素的检验鉴定。

基于代谢组学分析两种产地青花椒中非挥发性成分的差异

为深入探讨2种产地青花椒中非挥发性成分的差异,该研究创新性地采用基于超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(ultra performance liquid chromatography-quadrupole-electrostatic field orbital trap high resolution mass spectrometry,UPLC-QE-Orbitrap-MS)的非靶向代谢组学技术对其进行全面的鉴定,并使用主成分分析和正交偏最小二乘判别分析对其进行精确区分。结果表明,2种青花椒共有74种非挥发性差异代谢物,氨基酸类在江津青花椒中呈上调表达,有机酸类、多酚黄酮类、糖类成分总体上在金阳青花椒中呈上调表达。其中,9种具有极显著差异的代谢物被筛选作为区分2种青花椒的化学标记物,分别是羟基-α-山椒素、蔗糖、海藻糖、棉子糖、奎尼酸、莽草酸、2-异丙基苹果酸、L-精氨酸、L-赖氨酸。此外,研究进一步阐述了2种产地青花椒中非挥发性成分差异的可能发生机制,以期为今后青花椒的精深加工以及优良种质资源的筛选提供了一定的理论基础。

基于UPLC-QE-Orbitrap-MS技术分析乌灵胶囊的化学成分

目的:基于超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-QE-Orbitrap-MS)对乌灵胶囊中的化学成分进行定性分析。方法:采用Waters CORTECS UPLC C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.6μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,体积流量为0.3 mL/min,柱温为40℃,进样量为2μL。质谱采用ESI源在正、负离子两种模式下分别进行检测鉴定,通过化合物的精确质量数和同位素丰度比确定化合物的分子式,再结合文献和数据库,通过特征碎片离子和化合物的一般裂解规律,确定化合物的结构式,从而对检测到的化合物进行定性分析。结果:在乌灵胶囊的甲醇提取液中共鉴别出64种化学成分,包括氨基酸类、核苷类、有机酸类、生物碱类、黄酮类、香豆素类、甾醇类、三萜皂苷类等。结论:该研究首次采用UPLC-QE-Orbitrap-MS法对乌灵胶囊中的各类化学成分进行鉴定分析,为进一步阐明乌灵胶囊中的药效物质基础,选择合适的质控指标提供了依据。

黑糯米酒及黑糯米保健酒品质分析

为了分析比较黑糯米酒及黑糯米保健酒品质,通过气相色谱-质谱(GC-MS)法及超高效液相色谱-四级杆-轨道阱高分辨质谱联用(UPLC-QE-MS)法检测两种酒的挥发性成分及化学成分。GC-MS分析结果表明,两种酒中共检出53种挥发性物质,其中黑糯米保健酒45种,其主体风味成分为醇类(39.52%)、酮类(19.47%)、醛类(15.08%)、酸类(9.61%);黑糯米酒47种,其主体风味成分为醇类(57.28%)、醛类(13.16%)、酮类(11.36%)。UHPLC-MS/MS分析结果表明,两种酒中共检出534种化学成分,黑糯米保健酒529种,黑糯米酒527种,两者主体化学成分均为氨基酸(42.67%;37.71%)和酸类(20.38%;18.43%)。与黑糯米酒相比,黑糯米保健酒中黄酮类物质增加30余倍,其特有成分为雌马酚、大豆苷元和甘草酸,含量较大的成分为羟基香豆素和乙酰胆碱。

基于非靶向代谢组学的半夏及其炮制品抗炎活性药效物质基础研究

目的:基于非靶向代谢组学技术和细胞抗炎活性实验,对半夏及其炮制品水提取物进行代谢组学与药效学分析。方法:收集湖北潜江半夏,采用药典收录方法炮制为清半夏、法半夏、姜半夏各3批,提取所有样品水提物,经超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UPLC-QE/MS)检测,通过裂解规律分析并与自建二级质谱数据库匹配进行物质鉴定。同时将不同炮制品的水提物给药经LPS诱导的RAW246.7细胞炎症模型,实时荧光定量PCR评价其抗炎活性。结果:正、负离子模式下分别匹配到317和218种代谢物,不同炮制品峰面积数据主成分分析下分群明显,均处于置信区内,质控样品及内标L-2-氯苯丙氨酸的总离子流图色谱峰保留时间和信号强度重叠较好。正交偏最小二乘法判别分析模型以t检验P值小于0.05、第一主成分变量投影重要度大于1为条件筛选差异代谢物,置换检验所得R2和Q2值表明模型符合样本数据真实情况未过拟合。实时荧光定量PCR结果显示,各水提物对LPS诱导的RAW246.7细胞炎症模型均有不同程度的抑制作用,相关性分析提示与靶基因呈显著负相关的差异代谢物富集在氨基酸、生物碱和核苷等,可能与其抗炎活性有关,差异代谢物为炮制过程所导致的含量变化或引入其他新化合物。结论:半夏及其不同炮制品水提取物具有明显不同的代谢谱特征,炮制过程所致化学成分的变化与其抗炎活性有一定关联。

金银花水提物改善脓毒血症的物质基础研究

目的研究金银花水提物(LJFWE)的成分,并研究金银花水提物改善脓毒症的相关机制,利用RAW 264.7小鼠巨噬细胞在体外验证其对败血症的影响。方法(1)用超高效液相色谱-高分辨质谱技术(UPLC-QE Orbitrap MS)测定金银花水提物的主要成分;(2)使用多个疾病数据库收集脓毒症靶点并结合生物信息学分析金银花水提物改善脓毒症潜在靶点;(3)建立小鼠RAW264.7巨噬细胞脓毒症模型,利用RT-qPCR研究金银花水提物对脓毒症核心靶点基因及炎性因子的调控作用。结果用UPLC-QE Orbitrap MS在正、负离子模式下进行检测的结果与本地库及文献对比得到23个活性成分。预测出木犀草素、山奈酚、槲皮素、马钱子苷和咖啡酸可能为金银花改善脓毒症的主要活性成分,MAPK8、TP53、RELA、MAPK1及MYC可能为金银花改善脓毒症的关键靶点。RT-qPCR实验结果显示,与模型组相比较,金银花给药组中5个关键靶点基因(MAPK8、TP53、RELA、MAPK1、MYC)及炎性因子(IL-1β、IL-6、IL-10、iNOS、TNF-α)表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论木犀草素、山奈酚、槲皮素、马钱子苷和咖啡酸可能为金银花水提物治疗脓毒症的主要有效成分,靶点基因MAPK8、TP53、RELA、MAPK1、MYC及炎性因子(IL-1β、IL-6、IL-10、iNOS、TNF-α)可能为金银花水提物治疗脓毒症的关键靶点,该研究为后续金银花治疗脓毒症的作用机制研究提供理论基础。