基于UPLC-UV-Q-TOF MS的僵蚕嘌呤(核苷)类成分多指标定量指纹图谱研究

嘌呤(核苷)是机体细胞生命活动中的主要遗传物质,但目前缺乏对僵蚕中该类成分的整体定量研究。该文采用ACE Excel 2 AQ水性柱(2.1 mm×150 mm,2μm)进行分离,以10 mmol/L磷酸二氢钾水溶液-甲醇为流动相,分别优化了样品提取与色谱条件,建立了中药僵蚕中嘌呤(核苷)类成分的超高效液相色谱-紫外(UPLC-UV)指纹图谱方法。利用四极杆-飞行时间质谱(Q-TOF MS)对9个特征峰物质进行二级鉴定,并对其质谱裂解规律进行总结。其中,2′-甲氧基-鸟苷单磷酸、6-(β-羟基乙基氨基)-嘌呤、2′-甲氧基-腺苷单磷酸和N6-(2-羟乙基)-腺苷首次从僵蚕中鉴定。基于该方法,对其中的鸟嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷、6-(β-羟基乙基氨基)-嘌呤、腺苷、N6-(2-羟乙基)-腺苷7个成分进行绝对定量测定。2′-甲氧基-鸟苷单磷酸和2′-甲氧基-腺苷单磷酸因缺乏对照品,采用相对定量分析。结果表明,各指标成分的精密度、重现性、稳定性、耐用性的相对标准偏差(RSD)均不大于5.0%,7种成分的线性关系良好(r^(2)≥0.9994),检出限(LOD)为0.266~0.474μg/mL,定量下限(LOQ)为0.843~1.58μg/mL,平均加标回收率为94.0%~101%,RSD不大于3.4%。采用该方法对13批不同产地僵蚕药材进行分析,发现各成分含量具有显著差异。该研究可为僵蚕的质量评价提供技术支持和科学依据。

UPLC-UV-QDa联用系统快速分析野生樱桃李叶化学成分

采用UPLC-UV-QDa联用系统测定了4种不同野生樱桃李叶中黄酮苷元的含量,并对醇提物成分进行快速分析。结果表明,槲皮素和山奈酚为野生樱桃李叶主要黄酮苷元。UPLC测定2种苷元可在7.0min内达到基线分离,线性关系良好,平均回收率分别为98.65%(RSD=1.08%,n=3),102.02%(RSD=1.17%,n=3),表明该方法快速、准确、重复性好。不同品种和生长环境的野生樱桃李叶中黄酮苷元含量有差异,但均以山奈酚为主。阳坡紫果叶山奈酚含量最高为(7.68±0.45)mg/g,沟谷红果叶最低为(4.59±0.32)mg/g,总黄酮含量变化幅度为16.21～33.25 mg/g。通过UPLC-UV-QDa联用系统快速鉴别,阳坡紫果叶醇提物主成分为1种单咖啡酰奎宁酸、4种槲皮素苷、7种山奈酚苷。

有机相阴离子交换SPE-UPLC-UV法快速测定食用植物油中的抗氧化剂TBHQ和BHA

建立了基于有机相阴离子交换SPE前处理的UPLC-UV法,快速测定食用植物油中的抗氧化剂TBHQ和BHA。食用植物油样品用正己烷稀释后,直接上样至Oasis MAX聚合物材质阴离子交换SPE柱中进行净化,用正庚烷淋洗去除甘油酯成分,用0.5%甲酸-四氢呋喃溶液洗脱。以纯水和甲醇为流动相,TBHQ和BHA在Eclipse Plus C18上和梯度洗脱条件下3.4 min内达到基线分离;检测波长为290 nm;进样量为1μL。TBHQ和BHA在5~200 mg/L范围内线性关系良好(r≥0.999 95);在10、50、200 mg/kg这3个水平的加标回收率为91.5%~104%,相对标准偏差为1.2%~4.4%。方法定量限为0.5 mg/kg。与已有方法相比,该方法样品前处理更简便快速、色谱分离时间短、结果准确,可广泛用于食用植物油样品中TBHQ和BHA等抗氧化剂的快速检测。

不同药用部位茯苓UPLC-UV-MS指纹图谱比较研究

目的:建立并比较研究不同药用部位茯苓中三萜类成分的UPLC-UV-MS指纹图谱。方法:以去氢茯苓酸为对照品,采用Shim-pack XR-ODSⅡ(75 mm×2.0 mm,2.2μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱;检测波长242 nm,流速为0.5 mL/min,柱温30℃;采用SPSS 16.0进行聚类分析。结果:建立茯苓中三萜类成分的UPLC-UV-MS指纹图谱,共标定22个峰,其中12个为共有峰,方法学考察结果符合指纹图谱技术要求;相似度和聚类分析结果表明,茯苓皮和茯苓块中三萜类成分存在显著差异,茯苓块药材质量与其产地有关,而茯苓皮药材不同产地间差别不大。结论:该研究方法稳定、可靠、重现性好,可用来控制茯苓的质量。

UPLC-UV法测定不同产地青蒿中青蒿素的含量

目的:建立快速简便检测青蒿素的超高效液相-紫外(UPLC-UV)法,并对不同产地青蒿中青蒿素的含量进行检测。方法:色谱柱Agilent Eclipse Plus C18(2.1 mm×50 mm,1.8μm),流动相乙腈/水(45/55),流速1.0mL/min,柱温28℃,波长200 nm。结果:该方法对青蒿素的分离度较好,保留时间缩短为1.5 min。并且,整个分析过程可以在2 min内完成。线性范围0.101 17～10.117μg,进样量与峰面积线性相关,A=109.4C+6.7026,R2=0.9 993(n=9),加样回收率为99.3%(RSD=2.6%,n=6)。结论:UPLC-UV法分析时间短、样品前处理简单、精密度、稳定性、加样回收率等符合分析检测要求,对于青蒿中青蒿素的含量能进行快速准确的分析。

UPLC-UV法应用于丹红注射液多个活性成分的稳定性研究

[目的]考察丹红注射液多个活性成分在高温、强光照射、与不同注射液配伍后的稳定性。[方法]采用已建立的超高效液相色谱-紫外法(UPLC-UV)检测丹红注射液中16个主要活性成分在60℃高温、(4 500±500)lx强光照射,与0.9%氯化钠注射液和5%葡萄糖注射液配伍混合后的含量变化情况。[结果]丹红注射液5-羟甲基糠醛、酚酸类成分(咖啡酸、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、A、C等)在高温和强光照射下含量降低;紫草酸在高温下含量增加。丹红注射液与两种不同注射液配伍后,丹酚酸B、A、C迅速下降;在4 h内丹酚酸A随着时间延长不断降低,丹酚酸C随着时间延长不断升高;其他成分基本稳定。[结论]阐明了影响丹红注射液中多个活性成分稳定性的影响因素,为丹红注射液的储存和临床用药提供了科学依据。

UPLC-UV法快速测定烟草中游离茄尼醇的含量

为了简化烟草样品的前处理步骤，采用甲醇直接萃取烟草样品得到甲醇萃取液，优化超高效液相色谱的测试条件，测定了甲醇萃取液中的茄尼醇含量。结果表明：①最佳萃取条件为：萃取溶剂为甲醇。萃取温度25℃，萃取时间20min；②茄尼醇工作曲线的浓度范围为10～200mg／L时，质量浓度与峰面积具有良好的线性关系，相关系数为0．9997；③方法的检出限为0．054mg／L，相对标准偏差为2．1％，平均回收率为105．5％。该方法可以快速、简便、准确地测试烟草中游离茄尼醇的含量。

三棱UPLC-UV特征图谱研究

目的:建立三棱化学成分的超高效液相色谱-紫外法(UPLC-UV)特征图谱,并对主要特征峰进行指认。方法:色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,线性梯度洗脱,双波长切换检测,0~12 min为300 nm,12~16 min为240 nm,测定10批三棱药材UPLCUV图,确定共有特征峰并计算相似度,利用对照品及超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(UPLC-Q/TOF-MS)对主要特征峰进行指认。结果:采集了10批三棱药材UPLC-UV指纹图谱,确定11个特征峰,相似度均大于0.9,认定了9个特征峰,其中通过对照品指认了咖啡酸、对羟基苯甲酸、对香豆酸,通过质谱解析指认了2个苯丙素乙酰蔗糖酯、3个苯丙素甘油酯及首次在三棱中发现的三棱酮。结论:建立了三棱UPLC-UV特征图谱,能够表征不同结构类型的三棱化学成分,为三棱药材质量控制提供了参考。

UPLC-UV法同时测定葛酮通络胶囊中的6种活性成分

【目的】应用超高液相色谱—紫外(UPLC-UV)法同时测定葛酮通络胶囊中6种活性成分。【方法】采用WatersACQUITY UPLC系统,BEH Shielded RP-C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),柱温35℃,流动相采用乙腈和0.1%甲酸水,流速为0.2 mL·min-1。紫外检测波长为250 nm。【结果】所选6种活性成分可以同时实现分离并定量,所有6种成分的标准曲线的相关系数都大于0.998。6种成分的平均加样回收率及相对标准偏差(s R)分别为:3’-羟基葛根素,100.29,1.21%;葛根素,100.11,1.40%;大豆苷,99.73,1.15%;染料木苷,99.93,1.24%;大豆苷元,100.99,1.31%;染料木素,99.68,1.04%。【结论】本方法准确、快速、重复性好,可以作为全面控制葛酮通络胶囊质量的新方法。

西洋参UPLC-UV-ELSD指纹图谱研究

目的采用UPLC-UV-ELSD法研究6个产地28个批次西洋参药材,对不同产地西洋参采用指纹图谱聚类分析、主成分分析(PCA)及相似度评价等技术进行研究,为西洋参药材的品质评价及生产区划提供参考。方法采用Waters Acquity UPLC色谱系统,TUV检测器,ELSD检测器,色谱柱为ACQUITYUPLC^(TM) BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-水进行二元梯度洗脱,检测波长203 nm,柱温30℃,漂移管温度为50℃,喷雾器参数50%,氮气压力为275.8 kPa(40 psi)。结果建立了西洋参的UPLC特征指纹图谱共有模式,标定12个共有峰,采用10个对照品指认了10个共有峰,PCA分析结果显示,北京、吉林、黑龙江地区的西洋参中人参皂苷Rg_1、Re、Rc、Rb_2、Rb_3等成分要区别于美国、山东、陕西地区的西洋参;而美国、山东、陕西产区西洋参中人参皂苷Rg_2、Rb_1、Rd区别于北京、吉林、黑龙江地区。结论所建立色谱条件稳定性及重复性良好,可为西洋参药材的质量评价及质量控制提供依据。

基于UPLC-UV-Q-TOF-MS建立玛咖的质量评价方法

为了确定玛咖中主要化学成分并建立其定量评价方法,对不同玛咖进行了质量评价。利用UPLC-UV-Q-TOF-MS技术结合对照品鉴定了玛咖中19个主要成分的结构,选择其中有紫外吸收、含量较高的7个化合物建立了其同时含量测定方法,采用Waters Acquity I-ClassTM液相色谱系统,PDA检测器,色谱柱为Waters Acquity Cortecs C18+(2.1 mm×100 mm,1.6μm),乙腈-0.2%磷酸水为流动相(0.45 mL·min-1)梯度洗脱,柱温40℃,检测波长195 nm。对羟基苄基芥子油苷、苄基芥子油苷、9Z,12Z,15Z-N-苄基-十八碳三烯酰胺、9Z,12Z-N-苄基-十八碳二烯酰胺、N-(3-甲氧基苄基)-十六碳酰胺、N-苄基-十六碳酰胺、9Z-N-苄基-十八碳烯酰胺7个成分在玛咖中分离良好,精密度、稳定性和重复性良好,且线性良好(R2>0.999),线性范围较宽(0.197~4.980μg·mL-1到193.67~796.8μg·mL-1),平均加样回收率在96.71%~103.9%。玛咖中芥子油苷类和玛咖酰胺类化合物的平均质量分数分别为1.20%,0.20%;国产玛咖中,黄玛咖和黑玛咖中芥子油苷类质量分数相对较高(1.55%),白玛咖次之(0.93%),紫玛咖最低(0.76%);黄玛咖、紫玛咖和白玛咖中玛咖酰胺类质量分数接近(0.23%~0.29%),黑玛咖中质量分数最低(0.15%);秘鲁玛咖中2类化合物的含量都最低。该质量评价方法快速、准确,较为全面的反映了玛咖中主要化学成分的含量,为玛咖的质量控制和评价提供了有益参考。

UPLC-UV-MS法应用于胃肠安丸中11个活性成分的定性与定量分析

目的:建立超高效液相色谱-紫外-串联质谱法应用于胃肠安丸中11个活性成分(川芎嗪、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、和厚朴酚、厚朴酚、大黄酚、大黄素甲醚)的定性、定量分析方法。方法:采用ACQUITY UPLCBEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0～7.5 min,90%A→25%A),流速0.3 mL.min-1,DAD波长切换检测模式[0～1.92 min,320 nm(川芎嗪、阿魏酸);1.93～3.00 min,283 nm(柚皮苷、橙皮苷);3.01～5.50 min,254 nm(芦荟大黄素、大黄酸);5.51～6.26 min,294 nm(大黄素、和厚朴酚);6.27～7.50 min,254 nm(厚朴酚、大黄酚、大黄素甲醚)],柱温40℃,进样量2μL;Waters Quattro Premier XE质谱仪,正/负离子检测模式。结果:各成分在7.5 min内分离良好,通过与对照品的保留时间(tR)和质谱信息的对比,确定了胃肠安丸中的11个活性成分;它们在相应的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均>0.9977;加样回收率(n=5)为96.6%～107.2%,RSD均小于3.0%。批内精密度RSD均小于1.0%,批间精密度RSD均小于3.5%。结论:本方法简便、快速、准确,精密度高,重复性好,适用于胃肠安丸中多种活性成分的快速定性、定量分析。

当归芍药散含药血浆UPLC-UV指纹图谱研究

目的建立当归芍药散含药血浆指纹图谱并分析给药后血中移行成分。方法大鼠ig给予当归芍药散提取液,制备11组含药血浆,采用超高效液相色谱-紫外(UPLC-UV)法构建11组当归芍药散含药血浆的指纹图谱,运用指纹图谱参数共有峰、相似度进行分析。超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q/TOF-MS)法分析大鼠ig当归芍药散后血中移行成分。结果建立了当归芍药散含药血浆指纹图谱,通过对含药血浆、空白血浆图谱进行比对,指定了15个共有峰,相似度在0.933以上。初步鉴定了当归芍药散入血的15个成分,其中原型成分10个和代谢产物5个。结论当归芍药散含药血浆指纹图谱研究为进一步血中移行成分的研究提供了基础。

中国传统豆制品中异黄酮的超高效液相色谱-紫外检测器快速定量法

建立了超高效液相色谱-紫外检测器(UPLC-UV)测定豆制品中大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素的检测方法。采用酸化提取条件,将豆制品中大豆异黄酮及其修饰物水解成3种葡萄糖苷和3种苷元。采用BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱,以0.1%甲酸和乙腈为流动相进行梯度洗脱,梯度洗脱程序为:0~10 min,10%~45%乙腈;10~12 min,45%~100%乙腈。流速为0.3 m L/min,柱温45℃,在波长260 nm处进行紫外检测。6种大豆异黄酮组分在7.5 min内达到完全分离。建立了外标校正标准曲线(R2≥0.9998),检出限在0.05~0.1 mg·L-1之间,加标回收率在96.8%~102.0%之间。利用本方法对腐竹、豆干、素百叶、素鸡、嫩豆腐、老豆腐和内酯豆腐等7种传统豆制品中大豆异黄酮进行了定性定量分析,总大豆异黄酮含量在8.67~25.83 g/kg间。不同豆制品间6种大豆异黄酮中以大豆苷和染料木苷为主要成分,占88.0%~93.4%。结果表明,本研究建立的UPLC法可有效降低杂质干扰,色谱基线稳定且峰型良好,在10 min内实现对6种大豆异黄酮的快速定量检测,可良好应用于常见市售豆制品的营养评估与质量控制。

抗球虫新药AC4在SD大鼠体内的药代动力学研究

本研究的目的是建立检测SD大鼠血浆内AC4的分析方法,考察高、中、低3个剂量的AC4在SD大鼠体内的药代动力学特征,获得主要的药代动力学参数。采用超高液相色谱法检测SD大鼠血浆内AC4含量,使用乙酸乙酯作为提取溶剂,妥曲珠利亚砜作为内标。研究表明,建立的方法专属性良好,标准曲线定量范围0.08-80μg/mL,线性关系良好;准确度和精密度均能达到检测目的,样品在室温放置8 h或者反复冻融3次后稳定;该方法灵敏、准确,可以用于检测SD大鼠血浆内AC4含量。药时曲线下面积和最大血药浓度存在剂量正相关关系,给药后4-5 h达到最大血药浓度,生物消除半衰期在不同性别、不同剂量组之间存在较大差异,AC4在SD大鼠的药动学存在较为明显的性别差异。本研究结果为AC4后期研究和临床合理应用提供了参考依据。

不同分散剂对沙咪珠利在比格犬体内暴露量影响的研究

沙咪珠利(EZL)是由中国农业科学院上海兽医研究所兽用抗感染药物创新团队自主研发的新型三嗪类抗球虫药物。前期的研究表明,沙咪珠利抗球虫效果好、低毒、安全性高,具有广阔的应用和开发前景。为了研究不同分散剂对沙咪珠利在实验动物比格犬体内暴露量的影响,本实验将水、0.5%羧甲基纤维素钠(CMCNa)、聚乙二醇(PEG)200三种分散剂分别制备沙咪珠利口灌液,对比格犬单次经口灌服后采集0～36 h不同时间点的血样,通过DAS3.0软件拟合获得沙咪珠利在比格犬体内主要药代动力学参数。结果表明:沙咪珠利经不同的分散剂制备的口灌液,给比格犬内服后,获得的AUC_((0-t))和C_(max)没有显著性差异(P>0.05),说明三种不同分散剂对沙咪珠利在比格犬体内的暴露量的影响差异不显著。通过暴露量研究,为该药的毒理学评价和临床的合理应用提供了理论参考。

药用菊花中10种化学成分的含量测定及主成分分析

目的:建立UPLC-UV法同时测定药用菊花中10种化学成分的含量;找到控制不同品种菊花质量的关键因素。方法:采用ACUITY UPLC BEH RP18(2.1mm×100 mm,1.7μm)色谱柱;流动相A为含0.1%甲酸的甲醇:乙腈(5∶2)溶液和B为0.1%甲酸进行梯度洗脱;流速0.2 ml·min-1;检测波长348 nm,柱温30℃,进样量1μl;采用SPSS软件进行相关性分析与主成分分析(PCA)。结果:各成分即绿原酸、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸、香叶木素-7-O-葡萄糖苷、大波斯菊苷、异绿原酸C、蒙花苷、田蓟苷基本达到基线分离,且线性关系良好(r>0.999)。平均加样回收率90%~105%,RSD均<1.5%,重复性和稳定性良好;相关性分析显示测定以上3类成分中各一种可反映菊花中主要成分的含量;PCA显示不同品种菊花各自聚在一起,相互分离。结论:所建立的测定方法快速、稳定、可靠,适用于药用菊花中的10种化学成分的含量测定。该含量测定方法结合PCA可以用于不同品种药用菊花的分类和质量评价。

超高效液相色谱-紫外/串联质谱法检测药品中非法添加的邻苯二甲酸二异癸酯

目的:建立超高效液相色谱-紫外/串联四极杆质谱法检测药品中非法添加的邻苯二甲酸二异癸酯(DIDP)。方法:色谱柱为ACQUITY UPLC^(TM)BEH C_8(50 mm×2.1mm,1.7μm),以甲醇(A)-0.1%甲酸(B)为流动相,梯度洗脱分离,紫外检测波长254 nm;同时采用串联四极杆质谱,电喷雾正离子扫描和多反应监测模式检测。结果:超高效液相-串联四极杆质谱法,DIDP被准确定性,定性离子对(m/z)为447.6/148.9和447.6/307.2。超高效液相-紫外法,DIDP的检测限为0.4 ng;在0.6~5.0μg·ml^(-1)质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 4;回收率为100.2%(RSD=4.8%)。结论:该方法专属、灵敏、测定结果准确,可用于定性、定量检测药品中非法添加的DIDP。

超高压液相色谱快速测定银杏黄酮苷元

为比较鄂西南不同核用银杏品种叶片中3种主要黄酮苷元含量,笔者采用超高压液相色谱-紫外检测方法,在5 min内实现了银杏叶中3种主要黄酮苷元的快速分离,该方法线性范围为1-12μg/m L,相关系数为0.9999,相对标准偏差小于2.5%。对不同核用银杏品种叶片测定结果表明,在5个核用银杏品种中,不同品种间总黄酮苷元含量具有显著差异,其中以‘恩银2号’含量最高;各品种槲皮素含量均较低,而异鼠李素含量在总苷元中占较高比例。对银杏叶的采收时机,仅仅考察总黄酮苷元是不够的,利用笔者建立的方法可以实现对银杏叶中3种主要黄酮苷元比例的快速分析,从而为银杏叶最佳采收时机确定提供合理依据。

不同产地川射干中总黄酮和射干苷的含量比较

目的:比较不同产地川射干中总黄酮和射干苷的含量差异,为寻找优质药材资源提供科学依据。方法:以紫外分光光度法测定不同产地川射干药材中总黄酮的含量,以射干苷为指标性成分,在265nm波长处进行测定。用超高效液相色谱法测定不同产地川射干药材中射干苷的含量,色谱条件为:色谱柱Waters BEH C18(50×2.1mm,1.7μm),流动相乙腈^-10.1%磷酸(15:85),流速0.4ml·min^-1,检测波长265nm,柱温35℃。结果:不同产地川射干中总黄酮含量为83.3~168.0mg·g^-1,射干苷含量为33.4~86.1mg·g^-1,10个产地川射干药材中,总黄酮和射干苷均以成都地区含量最高。结论:不同产地川射干中总黄酮和射干苷的含量存在一定差异,应注意产地对药材质量的影响。