UQCRB基因的原核表达和纯化

目的为研究UQCRB(ubiquinol-cytochrome c reductase binding protein)与中药的作用机制,本实验室进行了UQCRB基因的克隆、原核表达和纯化。方法提取人肝癌SMMC-7721细胞总RNA,反转录后采用特异引物进行PCR扩增获取UQCRB基因全长,产物纯化后连入T载体测定正确,克隆经NheI、XhoI双酶切后连入PET28a(+)载体,构建PET28a(+)-UQCRB原核表达质粒。在BL21(DE3)宿主菌中表达超声处理后,应用Amicon○R Pro Affinity Concentration Kit-Ni-NTA纯化,表达及纯化产物用westernblot验证。结果构建了PET28a(+)-UQCRB表达质粒,经过酶切鉴定和测序鉴定正确。重组UQCRB在BL21(DE3)中的最优表达条件为IPTG 1mM诱导5h。Westernblot证实了表达和纯化结果。结论重组UQCRB的原核表达和纯化成功,为进一步研究UQCRB的作用奠定了基础。

热应激对黄羽肉鸡心脏UQCRB基因表达的影响研究

[目的]研究热应激对黄羽肉鸡生长性能的影响。[方法]对新广黄公鸡和怀乡公鸡进行热应激处理,应用荧光定量PCR法检测UQCRB基因在新广黄公鸡和怀乡公鸡心脏组织中的表达水平,分析其对黄羽肉鸡体重、心脏相对重和心脏UQCRB基因相对表达量的影响。[结果]新广黄公鸡和怀乡公鸡21、28d体重以及28d心脏绝对重显著高于怀乡公鸡(P<0.05),2种公鸡心脏相对重差异不显著。28d试验组新广黄公鸡的体重显著低于对照组(P<0.05)。新广黄公鸡21d心脏UQCRB基因的相对表达量显著高于怀乡公鸡(P<0.05)。热应激显著降低了新广黄公鸡28d心脏UQCRB基因的相对表达量(P<0.05)。[结论]心脏UQCRB基因表达与黄羽肉鸡生长速度相关,在肉鸡其他组织器官的表达有待进一步研究。

基于氧化苦参碱相似化合物的UQCRB抑制剂的虚拟筛选

目的通过构建辅酶Q-细胞色素C还原酶结合蛋白(UQCRB)小分子抑制剂的药效团模型,对相似的氧化苦参碱化合物库进行虚拟筛选,寻找出UQCRB小分子抑制剂,为抗肿瘤药物的筛选奠定基础。方法使用Discovery Studio 2.5软件进行药效团模型的构建。首先使用具有活性预测能力的Hypogen算法构建出UQCRB小分子抑制剂药效团模型,再运用Ligand Profiler模块验证药效团模型,应用筛选出来的最佳药效团模型对氧化苦参碱相似化合物数据库进行虚拟筛选,再进行分子对接验证以及ADMET预测。结果应用Hypogen算法成功构建了具有最佳的活性和非活性分子识别能力的药效团模型,并筛选出了9个具有潜在活性的氧化苦参碱相似化合物。结论本研究为发现UQCRB小分子抑制剂提供了新思路。

一例线粒体复合物Ⅲ缺陷患儿的临床特点及UQCRB基因突变分析

目的探讨1例线粒体复合物Ⅲ缺陷症患儿的临床、生化代谢及基因突变特点。方法对患儿的临床表现及辅助检查结果进行分析，应用高通量平台进行线粒体基因组及相关核基因的二代测序，可疑位点经父母一代测序验证，杂合缺失经染色体芯片技术定位并由荧光定量PCR验证。结果患儿表现为反复发作的呕吐、气促伴发热、代谢性酸中毒、高乳酸血症及低血糖，凝血功能及免疫功能低下，乳酸脱氢酶及肌酸激酶同工酶增高，急性发作期血中丙氨酸及多个酰基肉碱增高，酮性双羧酸尿；体格生长及智力发育落后，肌张力低下。测序结果显示患儿UQCRB基因存在复合杂合突变：一个等位基因缺失／一个等位基因小缺失致移码突变[c．306_309delAAAA（p．Arg105Lysfs＊22）]，其中移码突变已有文献报道，而缺失突变为首次报道。结论明确了UQCRB基因突变引起的线粒体复合物Ⅲ缺陷症患儿的临床、生化代谢及基因突变特点。