人转录因子USF基因在大肠杆菌中的表达、纯化及在FAK启动子中的结合研究

目的:在大肠杆菌中表达人源转录因子USF(upstream stimulatory factor)并进行分离纯化,进一步分析其在FAK(focaladhesion kinase)启动子中的DNA结合能力。方法:将人源USF cDNA克隆到表达质粒pET28a载体,然后将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达带His6-Tag的融合蛋白His-USF,通过镍柱亲和层析纯化,SDS-PAGE分析鉴定。EM-SA分析纯化后的蛋白与FAK启动子的DNA结合情况。结果:His-USF在大肠杆菌中获得高效表达,镍柱亲和层析纯化得到了高纯度的蛋白,并能够结合到FAK的启动子上。结论:获得高效表达的高纯度His-USF融合蛋白,为USF对其靶基因的结合与转录调控的进一步研究奠定了基础。

猪USF1基因克隆与序列分析

研究克隆了猪USF1基因1 382 bp的cDNA序列(登录号:EF 219407)和5 516 bp的DNA序列(登录号:EF 625885)。序列分析发现猪USF1基因编码区序列与人、小鼠的同源性分别为99%和98%。基因组序列分析发现猪USF1基因包含11个外显子和10个内含子,内含子的剪接方式均符合"GT-AG"法则。

猪USF1基因的多态性及与生产性状的关联分析

分离克隆了猪USF1基因第10内含子的序列,测序发现在130 bp处存在一T-C突变,引起Alu I酶切多态。利用PCR-RFLP方法对国内外4个猪种USF1基因第10内含子的多态性进行分析,在国外猪种中等位基因T的频率占优势;而在中国猪种中C等位基因的频率占优势;在421头大梅F2代资源家系中进行性状关联分析发现该多态与瘦肥肉比例、屠宰率、平均背膘厚、眼肌宽、眼肌面积、背最长肌含水量显著相关(P<0.05),与瘦肉率、眼肌高极显著相关(P<0.01)。

新疆维吾尔族和汉族子宫颈癌中POU5F1和NANOG在mRNA水平的表达及临床意义

目的探讨维吾尔族和汉族子宫颈癌(CC)患者中肿瘤干细胞相关基因POU5F1和NANOG在mRNA水平表达的差异及其与临床病理的关系。方法采用实时荧光定量PCR法(RT-PCR),检测69例子宫颈癌组织和16例子宫颈癌组织及其相应的癌旁新鲜组织标本中POU5F1、NANOG在mRNA水平上的表达情况,了解其在维吾尔族和汉族间的表达差异。根据患者临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移进行分组,比较不同亚组患者中维吾尔族和汉族患者间POU5F1、NANOG表达水平的差异性。结果子宫颈癌组织中POU5F1 mRNA、NANOG mRNA的表达水平均较癌旁组织高(P﹤0.05)。维吾尔族CC患者POU5F1 mRNA、NANOG mRNA表达水平均高于汉族CC患者(P﹤0.05)。临床分期为Ⅱa~Ⅲ期、淋巴结转移阴性时,维吾尔族与汉族CC患者子宫颈癌组织中POU5F1 mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(P﹤0.05);临床分期为Ⅱa~Ⅲ期、中-高分化、淋巴结转移阴性时,维吾尔族与汉族CC患者子宫颈癌组织中NANOG mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论 CC中肿瘤干细胞相关基因POU5F1 mRNA和NANOG mRNA的表达在维吾尔族和汉族人群中存在差异性,而此种差异性在Ⅱa~Ⅲ期、中高分化、淋巴结转移阴性的CC中表现更加明显。