USP28在ECA109细胞中不同表达状态对照射后凋亡及相关蛋白表达影响

目的采用基因转染技术观察USP28不同表达状态对ECA109细胞放射敏感性的影响,为食管癌的综合治疗提供理论依据。方法qRT-PCR检测USP28和c-Myc在食管上皮细胞Het-1A、食管癌细胞ECA109和放射抗拒细胞ECA109R中的表达。针对USP28基因和c-Myc基因设计特异性siRNA序列,构建pcDNA-USP28和pcDNA-c-Myc质粒,转染食管癌细胞ECA109,观察转染效果及相关蛋白表达情况。6 Gy X射线照射细胞,流式细胞仪检测各组的细胞凋亡情况。克隆形成实验评价放射敏感性。结果USP28和c-Myc在ECA109中的表达高于正常的食管上皮细胞Het-1A (P<0.05),在ECA109R中的表达高于ECA109(P<0.05)。成功构建pcDNA-USP28和pcDNA-c-Myc重组质粒,转染结果显示与阴性对照组比较无论mRNA水平和蛋白水平,si-USP28组中USP28的表达明显下降,而在pcDNA-USP28组中USP28的表达明显上升。针对c-Myc的研究得到类似结果。与对照组比较,pcDNA-USP28组c-Myc在蛋白水平表达明显升高,si-USP28中c-Myc表达下降(P<0.05)。6 Gy照射ECA109后pcDNA-USP28组细胞凋亡率下降,放射敏感性下降;ECA109R中si-USP28组是细胞凋亡率增加,放射敏感性增强。结论USP28的蛋白表达与食管癌细胞的放射敏感性密切相关,其机制可能与USP28对c-Myc的表达调控有关。

去泛素化酶U SP28结构、功能及靶向抑制剂的研究进展

泛素特异性蛋白酶28(USP28)是去泛素化酶USP家族成员,在真核细胞的细胞周期、细胞凋亡和DNA损伤修复等生命活动中扮演了重要的生理角色。USP28在多种肿瘤中过度表达,是近年来去泛素化蛋白酶家族中新发现的抗肿瘤药物靶标。一些USP28的选择性抑制剂已经显现出潜在的肿瘤靶向治疗前景。本文综述了近年来USP28的结构、功能、抑制剂开发及与重大疾病发生发展关系等方面的研究进展。

氯喹通过上调泛素-蛋白酶体相关分子表达抑制LPS活化巨噬细胞的实验研究

目的观察氯喹(chloroquine,CQ)对脂多糖/内毒素(lipopolysaccharide/endotoxin,LPS)刺激的巨噬细胞中泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)相关分子A20、TRIM33和USP28表达的影响。方法应用LPS刺激小鼠Raw264.7细胞,荧光定量PCR检测酸化抑制剂CQ对LPS诱导锌指蛋白A20、泛素连接酶TRIM33和泛素特异性蛋白酶USP28的mRNA表达,Western blot检测CQ对LPS诱导A20和TRIM33的蛋白表达。应用siRNA转染技术沉默A20,荧光定量PCR检测CQ对LPS诱导炎性细胞因子TNF的mRNA表达。结果与LPS对照组比较,经CQ预处理的Raw264.7细胞中,A20、TRIM33、USP28的mRNA表达均显著上调[(3.197±0.013)vs(1.292±0.009),(1.627±0.113)vs(0.797±0.083),(1.387±0.144)vs(0.742±0.061),P<0.05],A20和TRIM33的蛋白表达也同样上调。采用siRNA干扰A20基因表达,则CQ预处理组细胞中LPS诱导的TNF-αmRNA表达显著上调[(7.650±0.113)vs(4.145±0.120),P<0.01]。结论 CQ可显著上调LPS活化的巨噬细胞中泛素化相关分子A20、TRIM33和USP28的表达,而干扰A20基因表达可显著上调LPS活化Raw264.7细胞中TNF-α的mRNA表达,提示泛素-蛋白酶体系统及其相关分子参与CQ抑制LPS-TLR4信号通路的活化。