USP4通过去泛素化转化生长因子-βⅠ型受体调控乳腺癌细胞的生物学活性

目的观察泛素特异性蛋白酶USP4对转化生长因子-βⅠ型受体（TGFβRI）的去泛素化调节及其对乳腺癌细胞生物学活性的调控。方法通过慢病毒感染构建过表达USP4的稳定乳腺癌细胞株BT-549。在乳腺癌细胞中表达外源性泛素，通过泛素化实验验证USP4对TGFβRI的泛素化修饰。采用克隆形成实验和划痕实验检测USP4对乳腺癌细胞克隆形成能力、迁移能力的影响。结果过表达USP4的稳定乳腺癌细胞株中USP4mRNA的表达量（△Ct=3．43±0．05）是空白对照细胞（△Ct=7．26±0．03）的14．22倍，差异有统计学意义（t=69．350，P=0，000）；USP4蛋白的表达量是空白对照细胞的4．99倍，差异有统计学意义（t=28．440，P=0．000）。过表达USP4后TGFβ3RI的体外泛素化水平明显降低。在克隆形成实验中，稳定过表达USP4、病毒对照及空白对照的BT-549细胞克隆形成率分别为（25．83±1．01）％、（11．83±0．60）％、（7．17±0．60）％，分别t=11．880、15．840，差异有统计学意义（P=0．000）。在划痕试验中，放大200倍视野下观察稳定过表达USP4、病毒对照及空白对照的BT-549细胞，每个视野可见发生迁移的细胞个数为（56．67±1．76）、（27．00±1．16）、（27．33±1．45）个，t=14．070、12．840，差异有统计学意义（P=0．000）。结论USP4可通过其去泛素化酶的活性解除TGFβRI耦联的泛素链稳定TGFβRI的表达，从而增强乳腺癌细胞的生物学活性。

泛素特异性蛋白酶4在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义研究

目的 本研究旨在探讨USP4在非小细胞肺癌中的表达,并分析其与PET-CT SUVmax值、Ki67、及临床病理特征的相关性。方法 收集50例均确诊为非小细胞肺癌患者的癌组织与正常组织,用免疫组化的方法检测出USP4的表达情况,通过SPSS 20.0软件分析。结果(1)USP4在癌组织中呈低表达,在肺正常组织中呈高表达,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)肺癌患者中USP4的表达与年龄、性别、肿瘤位置及肿瘤直径均无相关性(P>0.05),与肿瘤的分化程度以及有无淋巴结转移呈正相关(P<0.05);(3)USP4在肺癌组织中的表达与对应的PET-CT SUVmax值、Ki67呈负相关,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论 非小细胞肺癌患者USP4表达与致癌、肿瘤生长、恶性程度有关,USP4是NSCLC的肿瘤抑制因子,也有可能成为NSCLC患者新型的预后标志物。

泛素特异性蛋白酶4对脂肪干细胞成骨分化的影响

目的:本研究通过使用泛素特异性蛋白酶4(USP4)抑制剂Vialinin A干预大鼠脂肪干细胞(ASCs)的生长分化,探究USP4对ASCs的成骨分化的影响。方法:将分离培养至第3代的ASCs细胞分为6组分别用含0、0.1、0.5、1、5、10μmol/L Vialinin A的培养基培养10 d,CCK-8检测各组细胞增殖情况。将第3代细胞分为实验组、阳性以及阴性对照组,分别用含0.5μmol/L Vialinin A的成骨诱导液、不含Vialinin A的成骨诱导液及普通的α-MEM培养。检测各组第7天细胞内USP4、β-catenin、碱性磷酸酶(ALP)及骨桥蛋白(OPN)基因的表达。将3组细胞培养至第4、7、10、14天进行ALP染色,检测ALP的活性;培养至21 d时进行茜素红染色,检测细胞矿化结节的形成。采用t检验比较组间数据差异,P<0.05时差异具有统计学意义。结果:0.5μmol/L Vialinin A处理的实验组细胞增殖趋势与对照组的差异无统计学意义,表明该浓度的Vialinin A对细胞增殖无影响,作为后续实验组浓度。ALP与茜素红染色结果显示实验组染色效果均较其他组显著。RT-qPCR结果显示与阴性对照组相比,阳性对照组与实验组细胞内USP4与β-catenin表达量较低,差异具有统计学意义。实验组与阳性对照组相比无显著性差异。与阳性对照组相比,实验组的ALP与OPN表达量显著升高,差异具有统计学意义。结论 :0.5μmol/L的USP4抑制剂Vialinin A可以促进大鼠ASCs内ALP与OPN基因的表达。但USP4可能并非通过β-catenin途径调节其成骨分化。

泛素特异性蛋白酶4对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的探讨泛素特异性蛋白酶4(USP4)对增生性瘢痕(HS)成纤维细胞增殖的影响。方法体外培养人HS成纤维细胞(HSFB),并取第4代细胞用于试验。利用Vialinin A(USP4抑制剂)干预HS成纤维细胞,Western blot检测干预细胞中不同时间段(0、12、24、48h)USP4、TβRI及Smad7蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测Vialinin A对HS成纤维细胞增殖的影响,分为试验组和对照组(不作干预)。结果 Vialinin A作用后,随着时间推移,HSFB中的USP4蛋白表达逐渐减低,TβRI的蛋白也逐渐减低,在作用12h后明显降低(P<0.05);Smad7的蛋白表达则逐渐升高(P<0.05)。Vialinin A同一浓度作用后,随着时间推移,HSFB增殖活性逐渐受到抑制,试验组与对照组同一时间段比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论USP4可能通过调控TGF-β/Smad信号通路影响瘢痕细胞增殖,抑制其表达可使HS成纤维细胞增殖减慢。

泛素特异蛋白酶4研究进展

泛素特异蛋白酶4(ubiquitin-specific protease 4,USP4)是一种重要的去泛素化酶,它通过识别特异性靶蛋白,使之去泛素化来阻碍其降解或改变其特性,在肿瘤、病毒感染及多种信号通路中发挥重要调节作用。但目前有关USP4在肿瘤形成和发展过程中究竟行使癌基因抑或是抑癌基因的功能尚存在争议。本文从USP4的结构、功能及信号通路等方面对其研究进展作一介绍。