薯蓣皂苷对UUO小鼠肾脏病理变化和TNF-α表达的影响

目的:探究薯蓣皂苷对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction, UUO)模型小鼠肾组织病理学改变和TNF-α表达的影响。方法:C57BL/6N小鼠80只,随机分为假手术组、UUO模型组(UUO模型组3 d、UUO模型组7 d)、薯蓣皂苷低剂量(50 mg/kg)组(UUO+薯蓣皂苷3 d组、UUO+薯蓣皂苷7 d组)、薯蓣皂苷高剂量(100 mg/kg)组(UUO+薯蓣皂苷3 d组、UUO+薯蓣皂苷7 d组);薯蓣皂苷组给药3 d或7 d,假手术组和UUO模型组予等体积生理盐水灌胃。HE和MASSON染色观察肾脏病理改变,采用免疫组化法检测肾脏TNF-α的表达。结果:薯蓣皂苷组小鼠肾组织病理损伤程度和TNF-α的表达水平低于模型组。结论:薯蓣皂苷通过抑制TNF-α的表达减轻炎症反应,延缓肾脏纤维化。

山茱萸对肾间质纤维化的保护作用及机制研究

为评价山茱萸对肾间质纤维化的保护作用及其作用机制。36只5周龄体重相近的雄性SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(U组)、山茱萸(300 mg/Kg)干预组(D组)。分别于术后第7 d、第14 d处死三组中的6只SD大鼠。观察肾组织病理改变和肾间质纤维化程度、YKL-40、β-catenin、Wnt4蛋白表达。结果显示D组各时间点肾小管间质损伤指数、肾间质纤维化指数、YKL-40、β-catenin均低于同期U组,D14组高于D7组(P<0.05﹚。而D组Wnt4和β-catenin、YKL-40蛋白表达量显著降低,与U组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。表明山茱萸对肾脏具有一定的保护作用。

白细胞介素1受体拮抗剂对大鼠肾间质纤维化干预作用的研究

目的:动态观察白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1ra)对单侧输尿管梗阻模型大鼠肾间质纤维化及肾功能的影响。方法:将72只大鼠随机等分为3组:假手术(SOR)组、单侧输尿管结扎(UUO)组和IL-1ra处理(Tre)组,UUO组和Tre组制备UUO模型,SOR组术式同UUO组但不结扎输尿管。Tre组每天给予的10%IL-1ra溶液腹腔注射,而另两组则腹腔注射等体积无菌注射用水。各组分别在术后第1、3、7和14天随机处死6只大鼠,采血并取梗阻侧肾脏,行HE和Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组化检测肾组织a-SMA的表达,同时检测血液中肌酐、尿素氮的含量。结果:随着梗阻时间的延长,UUO组与Tre组肾间质纤维化的程度均高于SOR组,肾功能具有先恶化后好转的趋势(P<0.05);与UUO组相比,Tre组肾间质纤维化程度有所减轻,肾功能好转趋势也较UUO组明显,其差异从第7天起具有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-1ra可延缓梗阻性肾间质纤维化进程,这一作用可能与其抑制白细胞介素1的促纤维化作用有关。

大鼠肾间质纤维化动物模型的实验研究

目的 观察单侧输尿管结扎 (UUO)大鼠模型中肾脏病理改变 ,肾组织α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)和纤维连接蛋白 (FN)表达的变化 ,证明UUO方法可快速制作理想的肾脏细胞转分化和间质纤维化动物模型。方法 大鼠随机分为假手术组 (SOR)和UUO组。随机选取各组中的 6只大鼠分别于单侧输尿管结扎术后 3天、 7天、 14天、 2 1天和 2 8天处死 ,收集血清与肾组织供生化及病理分析。结果 ① 2 4小时尿蛋白定量 ,UUO组与假手术组无统计学差异。UUO术后 7～ 14天 ,大鼠出现明显血尿素氮、肌酐值升高 ;术后 2 1～ 2 8天 ,血尿素氮、肌酐值反而下降 ,但 2 8天时血肌酐值仍然高于假手术组 (P <0 0 5 )。②UUO组肾小管间质损伤评分 (TIS)明显高于假手术组。UUO术后 3天 ,肾脏组织出现了早期纤维化的病理改变。随着梗阻时间延长 ,小管间质纤维化程度和间质细胞增殖、炎细胞浸润逐渐加重 ,皮质变薄十分明显。术后 2 8天 ,Masson染色见皮质区、皮髓交界处纤维化明显 ,但肾小球仍无明显病变。③免疫组化结果显示 ,UUO术后 3天肾间质α SMA阳性细胞数和FN表达增加 ,并随时间递增。UUO术后 7天 ,可见少许α SMA阳性的转分化小管上皮细胞 ;术后14天转分化的小管上皮细胞明显增多。α SMA表达与FN表达成正相关 (r=0 996 ,P

中药抗复灵干预单侧输尿管梗阻大鼠肾脏病变的实验研究

目的:研究抗复灵干预单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾纤维化模型病变的作用。方法:健康SPF级雄性SD大鼠96只,随机分成假手术组,单侧输尿管结扎(UUO)组,抗复灵组(UUO+抗复灵),科素雅组(UUO+科素雅)分别于第7、14、21、28天各组处死6只大鼠;病理检查肾小管间质纤维化指数和免疫组化检查α-肌动蛋白(α-SMA)和COL1α2。结果:肾小管间质纤维化损害指数比较,抗复灵和氯沙坦组和模型组比较有显著性差异(P<0.01)。I型胶原UUO组和假手术组比较有非常显著统计学差异(P<0.01),抗复灵以及科素亚治疗组和UUO组比较有显著性差异(P<0.01),并且抗复灵组在14、21、28天和氯沙坦组相比较有非常显著统计学差异(P<0.01)。α-SMA有相同的变化趋势。结论:抗复灵是有效抑制肾纤维化的中药制剂。

兔单侧输尿管梗阻模型中TGF-β1变化的意义

目的 改进单侧输尿管梗阻模型的建立方法 ,探讨TGF - β1变化的意义及可能的治疗措施。 方法 对 40只兔进行分组实验。输尿管梗阻模型的方法 ,以输尿管内置导管 ,并结扎之。对肾脏进行病理学观察。测定血、尿中菊糖和TGF - β1的浓度。用统计学方法进行分析。结果 在 40只兔中 ,31例完成了系列实验。 4例死于麻醉 ,4例因导管插入过长引起肾盂内积血 ,1例感染。梗阻侧肾脏呈现出梗阻引起的一系列病理改变。梗阻侧尿液中菊糖浓度明显低于正常值 ;而梗阻侧尿液中TGF - β1浓度明显高于正常侧。 结论采用输尿管内置管建立的梗阻动物模型 ,易于进行标本的反复收集 ;输尿管梗阻引起肾小球滤过率下降 ,而TGF - β1mRNA表达增加 ,TGF - β1合成增加 ,引起肾间质纤维化。抗TGF - β1抗体对抗TGF - β1治疗、修饰素和抑制AngⅡ治疗 ,对减少肾间质纤维化 。

刺梨冻干粉对肾纤维化模型大鼠的影响及干预机制研究

目的通过观察刺梨冻干粉对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)模型大鼠肾纤维化及免疫炎症因子的影响,探讨刺梨冻干粉延缓肾纤维化的干预机制。方法将SD雄性大鼠分为4组:假手术组、UUO模型组、氯沙坦钾组和刺梨冻干粉组,前两组均予以蒸馏水,氯沙坦钾、刺梨冻干粉组分别给予氯沙坦钾片(1 mg/100 g)及刺梨冻干粉(300 mg/100 g)灌胃治疗,首次给药后14 d处死大鼠,采集标本,观察各组大鼠肾组织病理改变,应用免疫组织化学法检测α平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actinα-SMA)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,Col-Ⅲ)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾脏组织转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、Toll样受体2(Toll-like receptor,TLR2)蛋白的表达。结果光镜下,假手术组肾组织结构基本正常,无明显炎性细胞浸润,间质无或少许胶原纤维;模型组肾组织结构紊乱,大量炎性细胞浸润,肾间质可见明显的胶原纤维沉积,氯沙坦钾、刺梨冻干粉组与模型组比较病理改变明显减轻。假手术组大鼠肾组织中仅少量α-SMA、Col-Ⅲ、TGF-β1、NF-κB p65及TLR2蛋白表达,模型组中上述蛋白表达显著升高;与模型组比较,刺梨冻干粉组、氯沙坦钾组大鼠肾组织中α-SMA、Col-Ⅲ、TGF-β1、NF-κB p65、TLR2蛋白显著降低(P<0.01);刺梨冻干粉组肾组织中TLR2、NF-κB p65蛋白较氯沙坦钾组表达显著降低(P<0.05),α-SMA、Col-Ⅲ、TGF-β1蛋白表达二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。刺梨冻干粉能够明显减轻UUO大鼠肾功能的损害及输尿管梗阻导致的肾纤维化。结论刺梨冻干粉对UUO模型大鼠肾组织局部的免疫微环境有调节作用,能改善肾纤维化。

兔慢性肾功能衰竭模型的建立与评价

目的建立兔慢性肾功能衰竭模型,为干细胞移植治疗和相关研究奠定基础。方法普通级大耳白兔随机分为正常对照组和单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)组。UUO组于输尿管结扎后2、4、6、8周进行血生化肾功能指标检测,并取肾组织观察肾脏病理学改变,通过SPECT动态观察肾小球滤过率的变化,采用免疫组织化学方法观察肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果①UUO组术后第2周,出现明显的血肌酐升高,尿素氮术后第8周开始升高(P<0.01)。②UUO组术后第4周,肾脏组织出现了早期间质纤维化的病理改变,术后第8周肾小球开始出现硬化,间质纤维化明显,皮质明显变薄。术后第12周,肾小球硬化比例增加,肾小管玻璃样变性,间质纤维化进一步加重(P<0.05)。③SPECT动态观察肾小球滤过率,UUO组第4周GFR值比正常对照组降低,到第8周时,GFR值进一步下降,结扎侧肾脏功能降低甚至丧失。④免疫组织化学染色显示,TGF-β1在术后第4、8、12周均明显增强,并且各时间点表达均有显著差异(P<0.05)。结论单侧输尿管结扎法成功制作比较稳定的慢性肾功能不全模型,UUO后第8周符合肾脏间质纤维化模型标准。

基于促炎因子探讨益肾通络方对单侧输尿管结扎大鼠肾功能的干预作用

目的:从促炎因子角度探讨益肾通络方对单侧输尿管结扎(UUO)模型大鼠肾功能的改善作用。方法:将30只雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、UUO模型组、贝那普利组和益肾通络方组,每组6只。正常组、假手术组及UUO模型组大鼠每日予10mL/kg蒸馏水灌胃,贝那普利组每日予盐酸贝那普利片1.0mg/kg灌胃,益肾通络方组每日予益肾通络方14.6g/kg灌胃,各组连续给药干预4周。用ELISA法测定各组大鼠血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和α1-微球蛋白的表达水平,用生化仪测定血清中尿素氮、肌酐、尿酸、24h尿蛋白定量的含量。结果:与UUO模型组比较,益肾通络方组各项数值均显著降低(P<0.05),益肾通络方组在尿素氮、肌酐、尿酸、α1-微球蛋白和24h尿蛋白定量方面较贝那普利组降低更显著(P<0.05),且对MCP-1的改善作用优于贝那普利组(P<0.05)。结论:益肾通络方可通过下调促炎因子缓解局部炎症反应、改善肾功能和延缓肾病进程.

Notch信号通路在慢性肾衰竭中的表达及芪黄补肾泄浊方的肾保护作用

目的 探讨芪黄补肾泄浊方对UUO大鼠模型Notch信号通路表达的影响,探讨其延缓慢性肾衰竭(CRF)肾间质纤维化(RIF)进展的机制。方法 将80只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、芪黄补肾泄浊方组(芪黄补肾组)与厄贝沙坦组,每组20只。采用左侧输尿管完全梗阻法(UUO)建立慢性肾衰竭肾间质纤维化模型,大鼠灌胃,芪黄补肾泄浊方组及厄贝沙坦组给予相应药物水溶液灌胃,假手术组与模型组给予等体积蒸馏水灌胃,每日1次。观察大鼠一般状态;收集大鼠尿液、血清进行尿量、24hUPQ、血清肌酐、血清尿素氮检测;收集各组大鼠梗阻侧肾组织,HE、Masson染色观察肾脏病理改变。免疫组化法观察Notch1、Jagged1和Hes1蛋白表达;Real-Time PCR法检测Notch1 mRNA、Jagged1 mRNA、Hes1 mRNA基因转录;Western blot法检测Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达。结果 与假手术组相比,模型组大鼠状态差,皮毛暗淡,反应迟钝,活动减少,喜蜷卧,饮食量明显减少,芪黄补肾泄浊方可以改善UUO大鼠一般状态,且优于厄贝沙坦组。模型组大鼠24hUPQ、血清肌酐及血清尿素氮与假手术组相比明显升高(P<0.05);芪黄补肾泄浊方及厄贝沙坦可降低UUO大鼠24hUPQ、血清肌酐及血清尿素氮水平(P<0.05)。HE及Masson染色结果显示:与模型组比,芪黄补肾泄浊方可改善UUO大鼠肾脏的病理变化程度,可减少UUO大鼠肾组织纤维化面积百分比(P<0.05)。免疫组化、Real-Time PCR、Western blot结果显示:在大鼠肾组织中,与假手术组相比,Notch1、Jagged1、Hes1蛋白及mRNA表达在模型组明显增加(P<0.05),在芪黄补肾组、厄贝沙坦组中的表达均少于模型组(P<0.05),且芪黄补肾组少于厄贝沙坦组(P<0.05)。结论 芪黄补肾泄浊方可改善肾功能,延缓慢性肾衰竭肾间质纤维化,其作用可能与降低Notch1mRNA、Jagged1mRNA、Hes1mRNA基因转录,下调Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达,从而抑制Notch信号通路有关。

扶正化瘀方对输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的治疗效果观察

目的:观察扶正化瘀方对单侧输尿管结扎所致大鼠肾间质纤维化的疗效。方法:70只SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、氯沙坦钾组及扶正化瘀方(FZHY)低、中、高剂量组,以单侧输尿管结扎术建立单侧输尿管梗阻(UUO)肾间质纤维化模型。观察大鼠一般情况、肾体比;检测肾功能(SCr和BUN),盐酸水解法检测肾组织羟脯氨酸(Hyp)含量;HE染色、天狼猩红染色观察肾组织病理形态。结果:与模型组相比,各治疗组大鼠肾体比不同程度降低(P<0.01),肾组织Hyp含量下降(P<0.01),SCr和BUN含量下降(P<0.01,P<0.05),肾脏纤维化程度明显减轻,其中FZHY中、高剂量药效明显。FEHY中、高剂量组大鼠肾体比、Hyp含量、SCr含量指标变化均优于氯沙坦甲组(P<0.05,P<0.01)。结论:扶正化瘀方能有效抑制UUO大鼠肾间质纤维化,改善大鼠肾功能,且具有一定的剂量依赖性。