肾衰灵方作用于SHH信号通路对UUO大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨当代名医国医大师郑新经验方—肾衰灵方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的抑制作用。方法1.50只雄性SD大鼠随机分为五组:假手术组、模型组、肾衰灵方低剂量组、肾衰灵方中剂量组、肾衰灵方高剂量组。除假手术组,其余各组结扎单侧输尿管建立肾间质纤维化动物模型,肾衰灵方低中高剂量组予肾衰灵方(5、15、25 mg·kg-1)连续灌胃14天。检测各组大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),乳酸脱氢酶(LDH)。采用real-time PCR检测结缔生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)核酸水平,采用Masson染色方法检测肾组织观察肾小管和间质病理形态变化。2.根据结果选择肾衰灵中剂量组为治疗组,再将30只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、肾衰灵方治疗组共3组。用Western blot方法检测音猬因子(Sonic hedgehog,SHH)、神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1(Glioma related cancer gene homologous proteins 1,Gli1)、锌指转录因子(Snail Family Zinc Finger 1,Snail)蛋白的表达。结果与模型组相比,模型组和肾衰灵各剂量组大鼠血清SCr和BUN的表达水平均明显下调,其中肾衰灵中剂量组疗效最佳(P<0.05);Masson染色发现相较模型组,肾衰灵方各剂量组肾间质纤维化明显减轻,其中肾衰灵中剂量组疗效最佳(P<0.05);real-time PCR结果发现肾衰灵各剂量组CTGF核酸水平均较模型组下调,其中肾衰灵中剂量组核酸水平最低(P<0.05)。相较假手术组,模型组与肾衰灵方组SHH、Gli1、Snai1蛋白的表达均升高(P<0.05);与模型组相比,肾衰灵方组SHH、Gli1、Snai1蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型中,肾衰灵方可以通过抑制肾间质纤维化改善大鼠肾功能,其作用可能与其阻断SHH信号通路相关。

抗纤灵冲剂对单侧输尿管梗阻大鼠CTGF基因调控的影响

目的探讨抗纤灵冲剂防治肾间质纤维化可能的作用靶点及分子生物学机制。方法将72只SPF级SD大鼠中54只行经典单侧输尿管结扎,制备UUO大鼠模型,造模成功后分为模型组、抗纤灵组、氯沙坦组。药物干预后分批于14d,21d,28d处死,留取左侧肾组织,运用PCR Array法,检测肾间质纤维化基因CTGF的阳性表达。结果各时间点模型组CTGF基因水平分别较假手术组上调7.12倍、8.26倍及6.55倍,均>2倍,具有非常显著差异。各时间点抗纤灵组CTGF基因表达分别比模型组下调1.79倍、1.63倍、1.63倍,下调均>1.5倍,具有明显差异。结论抗纤灵冲剂作用靶点及分子生物学机制之一是有效诱导CTGF基因表达下调而发挥抗肾间质纤维化效应。

山茱萸对肾间质纤维化的保护作用及机制研究

为评价山茱萸对肾间质纤维化的保护作用及其作用机制。36只5周龄体重相近的雄性SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(U组)、山茱萸(300 mg/Kg)干预组(D组)。分别于术后第7 d、第14 d处死三组中的6只SD大鼠。观察肾组织病理改变和肾间质纤维化程度、YKL-40、β-catenin、Wnt4蛋白表达。结果显示D组各时间点肾小管间质损伤指数、肾间质纤维化指数、YKL-40、β-catenin均低于同期U组,D14组高于D7组(P<0.05﹚。而D组Wnt4和β-catenin、YKL-40蛋白表达量显著降低,与U组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。表明山茱萸对肾脏具有一定的保护作用。

Notch信号通路在慢性肾衰竭中的表达及芪黄补肾泄浊方的肾保护作用

目的 探讨芪黄补肾泄浊方对UUO大鼠模型Notch信号通路表达的影响,探讨其延缓慢性肾衰竭(CRF)肾间质纤维化(RIF)进展的机制。方法 将80只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、芪黄补肾泄浊方组(芪黄补肾组)与厄贝沙坦组,每组20只。采用左侧输尿管完全梗阻法(UUO)建立慢性肾衰竭肾间质纤维化模型,大鼠灌胃,芪黄补肾泄浊方组及厄贝沙坦组给予相应药物水溶液灌胃,假手术组与模型组给予等体积蒸馏水灌胃,每日1次。观察大鼠一般状态;收集大鼠尿液、血清进行尿量、24hUPQ、血清肌酐、血清尿素氮检测;收集各组大鼠梗阻侧肾组织,HE、Masson染色观察肾脏病理改变。免疫组化法观察Notch1、Jagged1和Hes1蛋白表达;Real-Time PCR法检测Notch1 mRNA、Jagged1 mRNA、Hes1 mRNA基因转录;Western blot法检测Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达。结果 与假手术组相比,模型组大鼠状态差,皮毛暗淡,反应迟钝,活动减少,喜蜷卧,饮食量明显减少,芪黄补肾泄浊方可以改善UUO大鼠一般状态,且优于厄贝沙坦组。模型组大鼠24hUPQ、血清肌酐及血清尿素氮与假手术组相比明显升高(P<0.05);芪黄补肾泄浊方及厄贝沙坦可降低UUO大鼠24hUPQ、血清肌酐及血清尿素氮水平(P<0.05)。HE及Masson染色结果显示:与模型组比,芪黄补肾泄浊方可改善UUO大鼠肾脏的病理变化程度,可减少UUO大鼠肾组织纤维化面积百分比(P<0.05)。免疫组化、Real-Time PCR、Western blot结果显示:在大鼠肾组织中,与假手术组相比,Notch1、Jagged1、Hes1蛋白及mRNA表达在模型组明显增加(P<0.05),在芪黄补肾组、厄贝沙坦组中的表达均少于模型组(P<0.05),且芪黄补肾组少于厄贝沙坦组(P<0.05)。结论 芪黄补肾泄浊方可改善肾功能,延缓慢性肾衰竭肾间质纤维化,其作用可能与降低Notch1mRNA、Jagged1mRNA、Hes1mRNA基因转录,下调Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达,从而抑制Notch信号通路有关。