和厚朴酚通过UbcH8诱导AML1-ETO蛋白降解

目的:研究和厚朴酚诱导AML1-ETO蛋白降解的可能机制。方法:用10、20、40 μmol/L的和厚朴酚处理Kasumi-1细胞,分别在24 h和48 h后qRT-PCR检测AML1-ETO、UbcH8 mRNA的表达;Western blot法检测蛋白表达;40 μmol/L和厚朴酚处理24 h,基因芯片分析寻找靶基因;构建UbcH8过表达质粒,通过反转录病毒转染Kasumi-1细胞,检测AML1-ETO蛋白;通过短发夹RNA(sh RNA)敲除Ubc H8的表达,40 μmol/L和厚朴酚处理48 h,同时检测AML1-ETO和UbcH8蛋白;构建异种移植小鼠模型,和厚朴酚处理,检测肿瘤的成瘤性和相关蛋白表达。结果:和厚朴酚减少Kasumi-1细胞中AML1-ETO蛋白的表达,并具有浓度和时间依赖性,但没有影响AML1-ETO mRNA的表达;和厚朴酚处理后的AML1-ETO蛋白稳定性降低;基因芯片分析发现,和厚朴酚将Ubc H8 m RNA的表达提高了约4倍;和厚朴酚处理后,Kasumi-1细胞中的Ubc H8 mRNA和蛋白的表达量均升高;过表达UbcH8的Kasumi-1细胞中,AML1-ETO蛋白表达量减少;用和厚朴酚处理Ubc H8敲除后的Kasumi-1细胞,AML1-ETO的降解被阻断;和厚朴酚抑制了异种移植小鼠模型的肿瘤生长,肿瘤中的AML1-ETO蛋白显著降低,而UBCH8表达升高。结论:和厚朴酚能通过UbcH8降解白血病细胞中的AML1-ETO蛋白。