超高效液相色谱-蒸发光散射检测法同时测定重楼消瘤方中5种皂苷类成分含量

建立了同时测定抗肿瘤中药复方——重楼消瘤方中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅶ、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d 5种皂苷类成分含量的超高效液相色谱-蒸发光散射检测(UPLC-ELSD)法。复方制剂经甲醇提取,采用Waters Cortecs UPLC C18(150 mm×2.1 mm,1.6μm)色谱柱分离,乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,蒸发光散射检测器进行检测,以外标法定量。结果显示,5种皂苷类成分的分离度良好,分别在7.1174~177.94μg/mL、 9.4072~235.18μg/mL、 8.8726~221.82μg/mL、 7.4862~187.15μg/mL、9.761 3~244.03μg/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)为0.999 2~0.999 8,检出限为0.7~1.0μg/mL,定量下限为1.8~2.4μg/mL;平均回收率分别为93.9%、103%、102%、104%、105%,相对标准偏差(RSD)分别为3.8%、4.0%、4.2%、3.6%、3.2%。该方法简便、快速、准确,可同时对重楼消瘤方中的5个皂苷类成分进行分析,能有效地消除杂质干扰,为重楼消瘤方的质量评价提供实验依据。

UPLC-UV-ELSD测定不同产地炒酸枣仁饮片中酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素和6′′′-阿魏酰斯皮诺素的含量

目的建立超高效液相色谱(UPLC)-紫外(UV)-蒸发光散射检测法(ELSD)同时测定不同产地炒酸枣仁饮片中酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素和6′′′-阿魏酰斯皮诺素的含量,对不同产地炒酸枣仁饮片进行质量评价。方法采用Waters Acquity UPLC色谱系统,UV检测器,ELSD检测器,色谱柱为ACQUITY C18柱(150 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸水-乙腈(梯度洗脱),流速0.3 mL/min,柱温35℃,UV检测波长335 nm,进样量3μL,喷雾器参数50%,ELSD条件气压172 kPa,漂移管温度60℃。结果在上述色谱条件下测得酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素和6′′′-阿魏酰斯皮诺素分别在27.20~435.20 mg/mL、12.60~200.80 mg/mL、26.38~422.00 mg/mL、24.38~390.00 mg/mL时与色谱峰面积线性关系良好,平均回收率分别为100.01%、99.99%、100.00%、100.04%,相对标准偏差分别为0.17%、0.32%、0.32%、0.32%。结论UPLC-UV-ELSD法准确、灵敏,可作为不同产地炒酸枣仁饮片的质量控制方法,测定结果表明,河北产炒酸枣仁饮片中4种成分含量相对较高。

重组蛋白中G418残留量超高效液相色谱-蒸发光散射检测方法的建立

目的建立定量检测重组蛋白中G418残留量的超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)-蒸发光散射检测(evaporative light scattering detection,ELSD)法,并进行验证。方法G418经UPLC洗脱后,通过蒸发光散射检测器检测,首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶,然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发,余下不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中进行检测,通过标准曲线计算质控品中G418浓度。对建立的方法进行专属性、重复性、中间精密度、定量限、耐用性、线性验证。结果G418浓度在0.01~0.20 mg/mL范围内,标准曲线的线性较好,R2>0.99,定量限为0.01 mg/mL;质控品的加样回收率在80%~120%之间;中间精密度试验回收率的RSD为3.44%;定量限试验回收率的RSD为5.38%;耐用性试验回收率的RSD为4.56%。结论UPLC-ELSD法精密度良好,可用于重组蛋白研发及生产过程中G418残留的监测。

摘花对不同种源不同生长时期浙贝母不同部位中3种生物碱含量的影响

目的:研究摘花对不同种源浙贝母在不同生长时期的不同部位中3种生物碱含量的影响。方法:采用超高效液相色谱-蒸发光散射(UPLC-ELSD)法,ACQUITY UPLC BEH C;色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7μm);流动相0.02%三乙胺水溶液(A)和甲醇(B)梯度洗脱(0~2 min,45%A;2~5 min,45%~25%A;5~7 min,25%A;7~17 min,25%~10%A;17~20 min,10%A),流速0.20 m L·min^(-1),柱温35℃,样品室温度20℃,漂移管温度45℃;喷雾器参数40%,进样量为3μL,同时测定不同生长时期不同种源摘花处理及未摘花的浙贝母鳞茎、须根、茎和叶中贝母素甲、贝母素乙和贝母辛的含量。结果:摘花处理可以明显提高不同种源浙贝母的产量(P<0.05);现蕾期种源为浙江宁波、浙江磐安和江苏南通的浙贝母摘花处理后鳞茎中生物碱含量较未摘花有明显提高(P<0.05),种源为重庆奉节的浙贝母摘花与未摘花处理鳞茎中生物碱含量差异无统计学意义;花期种源为江苏南通的浙贝母摘花处理后鳞茎中生物碱含量明显高于未摘花处理(P<0.05),种源为浙江磐安和重庆奉节的浙贝母摘花后鳞茎中生物碱含量明显低于未摘花处理(P<0.05),种源为浙江宁波的浙贝母摘花与未摘花处理鳞茎中生物碱含量差异无统计学意义;鳞茎膨大期种源为浙江宁波和浙江磐安的浙贝母摘花处理后鳞茎中生物碱含量明显高于未摘花处理(P<0.05),种源为江苏南通的浙贝母摘花后鳞茎中生物碱含量明显低于未摘花处理(P<0.05),种源为重庆奉节的浙贝母摘花与未摘花处理鳞茎中生物碱含量差异无统计学意义;收获期除种源为浙江磐安的浙贝母摘花处理后鳞茎中生物碱含量明显高于未摘花处理外(P<0.05),其余种源的浙贝母摘花后鳞茎中生物碱含量均明显低于未摘花处理(P<0.05);各处理的不同种源浙贝母叶中生物碱含量在各生长时期均明显高于鳞茎(P<0.05)。结论:人工摘花处理可以提高浙贝母产量,摘花后多数浙贝母现蕾期鳞茎生物碱含量高于未摘花处理而收获期鳞茎生物碱含量低于未摘花处理,种源为浙江磐安的浙贝母摘花后产量及生物碱含量均明显提高,浙贝母地上部分具有潜在开发价值。