基于UPLC/Q-TOF MS代谢组学技术研究远志不同品种间的化学差异性

目的:通过对远志不同品种-晋远1号(简称JY1)、汾远2号(简称FY2)及传统汾阳产远志(简称FY)的差异性研究,以期为筛选远志良种提供参考。方法:采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS)对JY1、FY2、FY样品进行测定,采用主成分分析(PCA)等多种统计分析方法,进行代谢组学分析并找出差异代谢物。结果:与FY相比,JY1及FY2中的蔗糖酯(如sibiricoses A5、tenuifoliside B等)及低聚糖(如tenuifoliose K等)对PCA分类贡献较大;而与JY1相比,FY2中的蔗糖酯(如tenuifoliside B、tenuifoliside A等)及低聚糖(如tenuifoliose A等)对PCA分类也有较大贡献。此外,sibiricaxanthone A、3,6'-disinapoly sucrose及seneginⅢ在FY、JY1、FY2中的相对含量也有较大差异。结论:与FY相比,JY1与FY2作为远志的新品种,在化学物质基础上存在一定差异且各具优势,这为今后远志的良种定向选育(即以体内某种或某几种活性物质含量高低为依据)提供了数据支持。

UPLC/Q-TOFMS对三七中皂苷类成分的快速化学表征

本文主要运用超高效液相串联四级杆飞行时间质谱联用技术(UPLC/Q-TOF MS)对三七中皂苷类成分进行快速分离和鉴定。以超高效液相为分离手段,飞行时间质谱仪为鉴定方法,水饱和正丁醇为提取溶剂,以0.05%甲酸水(A)-0.05%甲酸乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,采用ESI负离子模式进行数据采集。根据实验结果,并结合相关参考文献,二级质谱裂解数据以及元素组成,分离、鉴定出17种皂苷类成分,并发现三七中含有姜糖酯B成分。实验结果表明经过超高效液相的分离,以及Q-TOF MS的二级负离子信息的鉴定,为分析三七中皂苷类成分提供了一种快速、简便、可靠的方法。

UPLC-Q-TOF法分析双丹明目胶囊化学成分

目的通过超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)法分析双丹明目胶囊化学成分。方法该胶囊内容物的分析采用Agilent Extend C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm);流动相0.1%甲酸(A)-乙腈(B),梯度洗脱;体积流量0.4 m L/min。根据对照品的相对分子质量、质谱碎片离子信息,结合参考文献对成分进行鉴定。结果从中共鉴定出102种成分,包括酚酸、黄酮及其苷类、萜类、香豆素、木脂素等。其中,24种来自旱墨莲,13种来自女贞子,11种来自丹参,14种来自泽泻,9种来自山茱萸,9种来自茯苓,6种来自牛膝,6种来自三七,4种来自牡丹皮,3种来自红土茯苓,3种来自山药。结论该方法灵敏、可靠、快速,可为双丹明目胶囊药效物质基础及质量控制研究提供依据。

山豆根和苦参生物碱类成分UPLC/Q-TOF MS^E比较研究

使用UPLC/Q-TOF MSE对山豆根和苦参的生物碱类成分进行详细的比较研究。色谱柱:Acquity UPLC BEH C18(2.1 mm×150 mm,1.7μm);流动相:乙腈-5 mmol/L甲酸铵水溶液;流速为0.5 m L/min;检测器:四极杆串联飞行时间质谱(Q-TOF),正离子检测模式。根据离子流色谱图中色谱峰的分子量及其二级质谱碎片离子的裂解规律,结合参考文献进行结构推定;利用主成分分析及正交偏最小二乘法进行聚类分析。结果从山豆根总生物碱中鉴定12个主要成分,从苦参生物碱中鉴定了11个主要成分,其中有10个是相同的结构,但相同成分在两种药材中的含量差异很大;聚类分析表明山豆根和苦参具有显著的差异。本研究表明山豆根和苦参的主要生物碱成分虽然结构相同,但含量差异很大,二者临床疗效差异,可能由于生物碱含量的差异,或生物碱以外的其他成分所引起。

基于UPLC/Q-TOF MS/MS的稳心颗粒主要成分分析及鉴定

[目的]采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS/MS)技术,对稳心颗粒中的化学成分进行初步分析。[方法]采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-水(含体积比0.1%甲酸)为流动相梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,电喷雾电离源,正/负离子双模式检测,通过UPLC/Q-TOF MS/MS所得到的化合物分子量以及MS/MS碰撞解离碎片,结合文献报道,对稳心颗粒的主要化学成分进行分析鉴定。[结果]结合文献报道和一级MS、二级MS/MS高分辨质谱数据,对其中68个化合物进行了初步鉴定,结果显示,稳心颗粒成分以糖类、皂苷类、黄酮类为主,其中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1丰度较高。[结论]UPLC/Q-TOF MS/MS技术是鉴定中药复方成分的有效手段,本研究首次利用该技术对稳心颗粒的主要成分进行定性分析,为阐明该复方药效物质基础、探讨其作用机制及其质量控制提供了有效的科学依据。

基于UPLC/Q-TOFMS的大鼠血浆磷脂成分的快速分析

采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱(UPLC/Q-TOF MS)联用技术,对大鼠血浆磷脂提取液进行分析,建立了一种快速、简便、可靠的血浆磷脂鉴别方法。以经典的氯仿甲醇法为磷脂的提取方法,以10 mmol/L甲酸铵水溶液(A)-含10 mmol/L甲酸铵的乙腈-异丙醇(1∶1)混合溶液(B)为流动相,采用ESI源,分别在正、负离子模式下进行数据采集。根据实验结果,结合二级质谱裂解数据、元素组成、数据库匹配,鉴定出81个成分,其中包括7个PE、7个PI和1个SM,其余均为PC。所建立的液相色谱-质谱联用分析方法,可为大鼠血浆中磷脂成分的鉴别提供一种快速、简便、可靠的分析手段,以及为血浆磷脂代谢组学的研究奠定基础。

基于UPLC/Q-TOFMS技术的白术药材化学成分快速识别研究

建立了超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS)法快速鉴定白术生药材中的多种化学成分。采用Aquity UPLC/Q-TOF micro联用仪,以水-乙腈流动相梯度洗脱,ESI+模式采集数据,Masslynx4.1软件分析处理数据。实验分析了白术药材中的24个峰信号,鉴定了其中的20种化学成分。结果表明,应用UPLC/Q-TOF MS技术能够快速鉴定白术药材的化学成分,是中药成分分析的有效手段。

UPLC/Q-TOF MS/MS负离子模式下环氧烷型环烯醚萜苷的结构表征

利用四极杆飞行时间串联质谱(Q-TOF MS/MS)研究4个环氧烷型环烯醚萜苷同系组分(胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ、胡麻属苷、梓醇)的质谱裂解行为。在大气压化学电离源负离子(APCI^-)模式下,该类同系组分主要的裂解途径除了常见的母环上取代基的断裂,如中性丢失H_2O、CO_2和葡萄糖基等,生成^(1,6)F^-、^(1,4)F^-等特征碎片离子;另外还存在葡萄糖基环的断裂,生成^(0,4)A_1^-、^(1,4)A_1^-及^(2,4)A_1^-等碎片离子。通过对上述环氧烷型同系组分的质谱裂解行为进行归纳总结,依据其裂解规律,利用UPLC/Q-TOF MS/MS对胡黄连提取物中的环烯醚萜苷类化合物进行表征,共初步鉴定出10个环烯醚萜苷,其中包括8个环氧烷型环烯醚萜苷(胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ、胡黄连苷Ⅲ、胡黄连苷Ⅳ、黄金树苷、梓苷、婆婆纳苷和Piscroside B)和2个环戊烷型环烯醚萜(Boschnaloside和Mussaenosidic acid)。该方法有助于推动胡黄连在物质基础表征、质量控制和临床应用上的开发和利用。

基于UPLC/Q-TOF MS代谢组学技术分析影响远志商品药材质量的关键因素

目的针对性地分析了产地、生长方式、药用部位等因素对山西产远志商品药材质量的影响,并找出关键影响因素。方法首先将样品进行超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱分析,并采用主成分分析及聚类分析等多元统计学方法,分别比较了产地、生长方式、药用部位等因素对山西产远志商品药材质量的影响。结果 (1)产地因素是影响现有远志商品药材质量的关键因素,指标性成分3,6’-二芥子酰基蔗糖与远志口山酮Ⅲ的含量高低可以间接反映出远志药材整体质量。(2)山西石楼、静乐、盂县的野生远志质量较优,而襄汾、闻喜的栽培远志质量较好。(3)远志筒中化合物的相对含量高于根,根与筒间的主要差异物质为Sibiricoses A6,3,6’-二芥子酰基蔗糖,Tenuifoliose C,远志口山酮Ⅲ,远志根与筒的选择依据应充分考虑临床所治疗疾病的特性,而不能一概而论。结论产地因素是影响现有远志商品药材质量的关键因素,本研究为今后指导远志规范化种植以及产地粗加工和临床精确用药提供了科学依据。

基于UPLC/Q-TOF MS/MS的花生油成分分析

采用超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS/MS)联用仪对花生油甲醇提取液分离检测,分析花生油成分,并通过二级质谱图和标准品确定物质。结果表明:正离子模式下检出86种化合物,鉴定30种物质,其中芥酸、棕榈酰胺、硬酯酰胺、油酸酰胺、11Z-二十二碳二烯酸为已知的花生油成分,亚油酰乙醇胺、亚油酰胺、鞘氨醇、N-油酰乙醇胺、十八碳四烯酸、顺-4-癸二酸等26种物质均为首次被检出;在负离子模式下,共检出27种化合物,鉴定15种物质,其中包括花生油中常见的7种脂肪酸,首次检出(Z)-13-氧-9-十八烯酸、蓖麻油酸、烯油酸、13-羟基十八酸和2(R)-羟基海藻酸5种脂肪酸和其他3种物质。

基于UPLC/Q-TOF MS法分析生何首乌药材的化学成分

目的采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS)对生何首乌药材的化学成分进行分析及鉴定。方法采用ACQUITY UPLCTM BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm×1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,进样量为5μL,柱温为30℃,ESI源负离子模式下采集数据,根据Masslynx4.1软件分析结果并结合文献报道与数据库信息对比,对其中的化学成分进行有效辨别。结果鉴定了生何首乌药材中的22种化学成分,包括蒽醌类化合物7个,二苯乙烯苷类化合物5个,黄酮类化合物3个,有机酸2个,其他类化合物5个;其中2种二聚体化学成分(峰18,tR=12.771 min,m/z=757.1793;峰22,tR=20.997 min,m/z=523.1379)为首次从生何首乌药材中发现。结论建立了一种快速、有效鉴定生何首乌药材化学成分的UPLC/Q-TOF MS分析方法。

基于UPLC/Q-TOFMS的大豆异黄酮保健食品中异黄酮成分的快速分析

目的:采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱(UPLC/Q-TOF MS)联用技术,对大豆异黄酮保健食品甲醇提取液进行分析,建立了一种快速、简便、可靠的异黄酮鉴别方法。方法:Agilent Eclipse Plus C18 RRHD(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱;以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱;流速0.3 m L·min-1;柱温25℃;质谱定性采用飞行时间质谱,负离子模式扫描。结果:实验分析时间为10 min,结合二级质谱裂解数据、元素组成、数据库匹配,鉴定出5个异黄酮成分。结论:该方法准确、快速、灵敏,为保健食品的质量控制提供参考。

基于UPLC/Q-TOF MS技术对延胡索醋法炮制前后化学成分的研究

建立了超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(ACQUITY UPLCTM I-Class Xevo G2-XS Q-TOF MS)法快速鉴定醋法炮制前后延胡索化学成分差异的影响,使用UNIFI软件对数据进行了分析,以多元统计分析VIP>1,P<0.05作为判断标准,共发现28个延胡索生物碱标记物,除黄连碱、隐品碱醋制后含量降低以外,其余生物碱类成分均有所升高,尤其是延胡索甲素、四氢黄连碱、小檗碱、二氢血根碱、去氢海罂粟碱等。结果表明,应用UPLC/Q-TOF MS技术能够快速检定炮制后延胡索药材的化学成分差异,通过比较化学成分差异为临床疗效研究提供重要的参考。

联合酶解法结合UPLC Q-TOF高分辨质谱检测重组水蛭素蛋白的二硫键结构

采用联合酶切法结合UPLC Q-TOF高分辨质谱解析重组水蛭素蛋白的复杂二硫键交联结构。首先从蛋白水平验证重组水蛭素蛋白是否含有游离半胱氨酸,包括高分辨质谱表征相对分子质量和定量检测游离巯基;然后利用单一酶解法标注每个或每组二硫键在蛋白序列中所处的位置;最后根据单酶所测结果,设计混合酶切的方式确定具体的二硫键配对方式,并利用二硫苏糖醇还原法加以验证,最终确证重组水蛭素蛋白的二硫键位置。结果显示,重组水蛭素蛋白存在10个半胱氨酸,共形成5对二硫键,分别为Ṩ1(Cys1-Cys2)、Ṩ2-Ṩ3(Cys3-Cys5/Cys4-Cys6或Cys3-Cys6/Cys4-Cys5)、Ṩ4(Cys7-Cys9)和Ṩ5(Cys8-Cys10)。

采用UPLC/Q-TOF MS与NMR代谢组学技术研究生长年限对远志药材质量的影响

生长年限是影响远志药材质量的重要因素之一。本文对陕西合阳1～3年生栽培远志中的初级和次级代谢物进行了比较。首先对上述样品分别进行超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱和核磁共振分析,采用主成分分析等多种统计分析方法,找出差异代谢物并对其含量及相关性进行分析。结果显示,1年与2、3年生远志可明显区分,而2年与3年生远志则区分不明显。随着远志生长年限的延长,初级代谢物中蔗糖、果糖、胆碱的含量减少,而甘氨酸、棉籽糖的含量则增加;次级代谢物中皂苷类成分（onjisaponin Fg、polygalasaponin XXVIII、polygalasaponin XXXII）的含量增加,而口山酮（polygalaxanthone III）及部分低聚糖酯（tenuifoliose A、tenuifoliose C、tenuifoliose C2、tenuifoliose H）的含量则减少。生长年限对远志药材质量会产生较大影响,而商品远志药材的现有生长年限有一定的科学依据。本研究为现有中药材质量评价方法提供了一种新的思路。

十八反中藜芦与人参配伍化学成分变化的UPLC/Q-TOFMS研究

利用超高液相色谱串联飞行时间质谱(UPLC/Q-TOFMS)对中药十八反药对藜芦与人参配伍的合煎液与单煎后的合并液进行检测,经过MassLynx4.1软件分析,结果表明其化学成分存在差异,与人参配伍合煎后部分藜芦类甾体生物碱,如藜芦定碱、芥藜芦碱类、棋盘花胺类等的溶出增加,有可能致毒性增加;藜芦与人参配伍同时降低了人参皂苷类药效成分的含量,具有增毒减效的作用.

基于代谢组学的中药川芎对寒凝血瘀证大鼠作用机制研究

目的:通过代谢组学研究方法,寻找大鼠寒凝证潜在的生物标志物;研究热性中药川芎对其潜在生物标志物的影响,探讨川芎治疗寒凝证的作用机制。方法:根据寒凝证的临床表现,制造寒凝血瘀大鼠模型;利用UPLC/Q-TOFMS BPI离子流图谱,分别绘制空白组、血瘀模型组、川芎大小剂量给药组的血浆BPI离子流指纹图谱,对图谱中分子离子峰进行分析,通过Markerlynx软件进行色谱峰自动识别和峰匹配,采用主成分分析法(PCA)对不同组间的数据进行模式识别,从而找到寒凝血瘀证潜在生物标志物及药物的作用靶点,阐明其作用机制。结果:找到寒凝血瘀证潜在生物标志物有N-甲基花生四烯酰胺、二氢神经鞘氨醇、N-丙基花生四烯酰胺、花生四烯酰基溶血卵磷脂、亚油酰基甘油磷脂酰胆碱、十六烷酸溶血磷脂酰胆碱、油酰甘油磷酯酰胆碱、十六烷基甘油磷脂酰胆碱8种。结论:热性药川芎对寒凝血瘀证大鼠的作用机制,可能是通过抑制使磷脂酰胆碱转化为花生四烯酸的磷脂酶A2,使血栓烷的合成水平降低,影响磷脂酰胆碱代谢途径,使血瘀症状减轻而发挥治疗作用的。

基于GC-MS和UPLC-Q-TOF-MS的麻黄汤化学成分识别

复方汤剂成分复杂,需要寻找一个高分离度、高稳定性的分析方法进行定性分析。采用梯度萃取法,将麻黄汤水煎液中的化学组分分为脂溶性和水溶性成分进行定性分析。采用GC-MS技术分离麻黄汤乙酸乙酯提取部分化学成分,质谱使用EI离子源,通过NIST MS Search 2.0标准质谱库定性分析,并结合相关文献资料,共鉴定出40个化学成分;采用UPLCQ-TOF-MS技术分离麻黄汤水提取部分化学成分,质谱使用ESI离子源,通过MZmine-2.9.1,Isotope Pattern软件以及质谱裂解规律定性分析,并对照对照品和结合相关文献资料,共鉴定出39个化学成分。该实验利用了GC-MS和UPLC-Q-TOF-MS对化学成分分析范围的差异,以及MS对未知化合物的准确鉴定优势,为麻黄汤药效物质的研究提供了依据,并为复方组分提供了一种简单快捷的分析鉴定方法。

离心超滤质谱法筛选中药复方二妙丸中黄嘌呤氧化酶抑制剂

采用离心超滤质谱分析技术(UF-UPLC/Q-TOF/MS),结合体外酶活性实验方法,对中药复方二妙丸提取物中的黄嘌呤氧化酶抑制剂进行了筛选.体外酶活性实验测得二妙丸水提液对黄嘌呤氧化酶的半数抑制浓度(IC50)为(0.218±0.0034)mg/mL,表明二妙丸具有较强的黄嘌呤氧化酶抑制活性.进一步采用离心超滤质谱技术对二妙丸水提物中潜在的黄嘌呤氧化酶抑制剂进行筛选,从中筛选并鉴定了9种具有潜在黄嘌呤氧化酶抑制活性的化合物,为开发黄嘌呤氧化酶抑制剂及阐明二妙丸治疗痛风和高尿酸血症的作用机制提供了一定的依据.

奋乃静在人胆汁中的代谢物分析

建立了超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS)检测并表征奋乃静在人胆汁中代谢物的方法。T管收集一名精神病患者服用奋乃静后的胆汁样品,经乙腈沉淀蛋白预处理后,采用UPLC/Q-TOF MS进行分析。根据高分辨质谱给出的准确分子质量信息推测可能的分子式,结合MSE功能采集的前体离子和产物离子信息,利用质量缺损过滤(MDF)和generic dealkylation等代谢物鉴定软件筛选代谢物。通过对比原形药物和代谢物的质谱裂解途径,推测可能的代谢物结构。在服药(4mg,b.i.d)后的人胆汁中,共检测到29种奋乃静代谢物,包括I相代谢物16种,II相代谢物13种,其中16种为首次报道的新颖代谢物。奋乃静在人体内的主要代谢途径包括羟基化、脱氢、N-去烷基化、甲基化、硫酸及葡萄糖醛酸结合等,该结果进一步完善了奋乃静在人体内的代谢途径。