目的研究依赖性受体Unc5H4诱导人神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞系SH-SY5Y细胞凋亡而其配体Netrin-1抑制其凋亡诱导的作用。方法人NB细胞系SH-SY5Y细胞中转染Unc5H4质粒,在有/无配体Netrin-1作用下进行平板克隆形成实验,探讨Unc5H...目的研究依赖性受体Unc5H4诱导人神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞系SH-SY5Y细胞凋亡而其配体Netrin-1抑制其凋亡诱导的作用。方法人NB细胞系SH-SY5Y细胞中转染Unc5H4质粒,在有/无配体Netrin-1作用下进行平板克隆形成实验,探讨Unc5H4是否诱导细胞凋亡以及诱导细胞凋亡作用是否受Netrin-1蛋白作用的影响。进一步在SH-SY5Y细胞中表达Unc5H4,在阿霉素(ADR)刺激下,在有/无配体Netrin-1蛋白作用时检测Unc5H4蛋白条带的变化,即Unc5H4释放死亡结构域后的截断蛋白诱导细胞凋亡的变化。结果 Caspase-3活性检测结果显示,过表达Unc5H4可诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,其相对Caspase-3活性(180%±20%)明显高于对照组(100%),差异有显著统计学意义(P?0.01)。而加入Netrin-1组细胞的相对Caspase-3活性(112%±14%)明显低于无Netrin-1组(180%?20%),差异有统计学意义(P?0.01),与对照组(100%)相比差异无统计学意义。SH-SY5Y细胞中转染Unc5H4质粒,在同时受到ADR诱导的DNA损伤时,在无Netrin-1蛋白作用下,可以检测到Unc5H4截断蛋白(酶切死亡结构域,60 k Da)的表达,而Netrin-1能够阻止Unc5H4蛋白的截断,从而阻止其诱导凋亡的作用。结论依赖性受体Unc5H4能够诱导人NB细胞凋亡,其配体Netrin-1能够通过阻止其发生蛋白截断而抑制其诱导凋亡的功能,从而使NB细胞获得增殖。展开更多
文摘目的研究依赖性受体Unc5H4诱导人神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞系SH-SY5Y细胞凋亡而其配体Netrin-1抑制其凋亡诱导的作用。方法人NB细胞系SH-SY5Y细胞中转染Unc5H4质粒,在有/无配体Netrin-1作用下进行平板克隆形成实验,探讨Unc5H4是否诱导细胞凋亡以及诱导细胞凋亡作用是否受Netrin-1蛋白作用的影响。进一步在SH-SY5Y细胞中表达Unc5H4,在阿霉素(ADR)刺激下,在有/无配体Netrin-1蛋白作用时检测Unc5H4蛋白条带的变化,即Unc5H4释放死亡结构域后的截断蛋白诱导细胞凋亡的变化。结果 Caspase-3活性检测结果显示,过表达Unc5H4可诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,其相对Caspase-3活性(180%±20%)明显高于对照组(100%),差异有显著统计学意义(P?0.01)。而加入Netrin-1组细胞的相对Caspase-3活性(112%±14%)明显低于无Netrin-1组(180%?20%),差异有统计学意义(P?0.01),与对照组(100%)相比差异无统计学意义。SH-SY5Y细胞中转染Unc5H4质粒,在同时受到ADR诱导的DNA损伤时,在无Netrin-1蛋白作用下,可以检测到Unc5H4截断蛋白(酶切死亡结构域,60 k Da)的表达,而Netrin-1能够阻止Unc5H4蛋白的截断,从而阻止其诱导凋亡的作用。结论依赖性受体Unc5H4能够诱导人NB细胞凋亡,其配体Netrin-1能够通过阻止其发生蛋白截断而抑制其诱导凋亡的功能,从而使NB细胞获得增殖。
