柯诺辛碱对创伤性脑损伤大鼠线粒体自噬的影响

目的:探究柯诺辛碱(Cor)对创伤性脑损伤(TBI)大鼠的治疗作用及其对线粒体自噬的影响。方法:将80只大鼠随机分为假手术组(n=10)、造模组(n=70)。假手术组大鼠仅切开皮肤,不进行造模;造模组大鼠建立TBI大鼠模型。将58只造模成功大鼠随机分为模型组(n=12)、低剂量组(n=12)、中剂量组(n=12)、高剂量组(n=11)、抑制剂组(n=11)。低、中、高剂量组大鼠分别予低[5 mg/(kg·d)]、中[10 mg/(kg·d)]、高[20 mg/(kg·d)]剂量柯诺辛碱治疗,抑制剂组大鼠予柯诺辛碱[20 mg/(kg·d)]和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)[15 mg/(kg·d)]治疗。给药14 d后,采用改良神经功能缺损评分法进行神经功能评分,采用Morris水迷宫实验评价认知功能,采用蔗糖偏好实验和旷场实验评价行为学。通过苏木素-伊红(HE)染色和TUNEL染色评价脑组织损伤和神经元凋亡。检测脑组织含水量、脑组织氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)]水平。采用Western blotting检测脑组织Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3、LC3B、p62和Beclin-1蛋白表达。结果:低、中、高剂量组大鼠的神经功能评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、TUNEL阳性率、MDA水平,以及Bax、cleaved Caspase-3、p62蛋白表达水平均低于模型组(P<0.05);低、中、高剂量组大鼠穿越平台次数、蔗糖偏好率、水平活动分数、垂直活动分数,SOD、CAT和GSH-Px水平,以及Bcl-2、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达水平均高于模型组(P<0.05)。抑制剂组大鼠的神经功能评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、TUNEL阳性率、MDA水平,以及Bax、cleaved Caspase-3、p62蛋白表达水平均高于高剂量组(P<0.05);抑制剂组大鼠穿越平台次数、蔗糖偏好率、水平活动分数、垂直活动分数,SOD、CAT和GSH-Px水平,以及Bcl-2、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达水平均低于高剂量组(P<0.05)。结论:柯诺辛碱可有效减轻TBI后的继发性损伤,抑制神经元凋亡和氧化应激,其机制可能与激活线粒体自噬有关。

HPLC测定安神养血口服液中3种生物碱延胡索乙素、钩藤碱和异钩藤碱含量

目的:深入研究安神养血口服液(钩藤、金不换、制何首乌、首乌藤、松针)含量测定方法,为该药质量标准研究和完善提供科学依据。方法:HPLC测定该药中3种生物碱延胡索乙素、钩藤碱和异钩藤碱含量,色谱柱:依利特Kromasil C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相:甲醇-水(55∶45)(含0.01 mol/L三乙胺,用冰醋酸调pH值至7.5),柱温:25℃,15 min前检测波长为281 nm,15 min后为254 nm,流速1.0 mL/min。结果:延胡索乙素、钩藤碱、异钩藤碱平均回收率分别为98.47%,99.04%,98.75%,延胡索乙素在进样量0.01μg～0.10μg范围内、钩藤碱在进样量0.16μg～1.6μg范围内,异钩藤碱在进样量0.12μg～1.2μg范围内与峰面积呈良好线性关系。结论:该方法简便、快速和准确,可用于该药质量控制。

中药材钩藤扦插苗生产技术规程

以《中药材生产质量管理规范》(GAP)为指导原则,对中药材钩藤扦插苗的苗圃建设、扦插品种、材料处理、扦插后管理、出圃管理、贮存和运输方法等一系列生产过程展开描述,制定了中药材钩藤扦插苗生产技术规程。经融安县飞腾中草药专业合作社种植实践,证明运用该生产技术规程生产出的种苗周期短、生产旺盛,药材质量安全、有效、可控。

正交设计优选钩藤总黄酮的提取工艺

目的:本文以正交设计优选钩藤总黄酮的提取工艺。方法:以钩藤总黄酮的含量为评价指标,考察溶剂用量、乙醇浓度、提取时间、提取温度对钩藤总黄酮提取效果的影响,并在单因素实验基础上采用L9(3^4)正交试验进行工艺参数的优化,以分光光度法测定钩藤总黄酮含量,确定最佳提取工艺。结果:乙醇加热回流法提取效果最好。最佳提取工艺为乙醇浓度40%,溶剂用量50倍,提取时间70 min,提取温度90℃,黄酮平均得率可达9.294%。结论:以乙醇加热回流法提取钩藤总黄酮操作简单,提取率高,正交试验结果可靠,为钩藤的应用提供参考和依据。

离子液体-微波辅助提取钩藤中生物碱的工艺研究

目的优选钩藤中生物碱的提取工艺条件,制定出最佳提取工艺方案。方法采用离子液体-微波法提取,以4种代表生物碱(钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱)含量作为指标,通过单因素实验考察离子液体浓度、液料比、提取时间和pH值4个因素对提取率的影响,并通过均匀设计法优选最佳提取工艺参数。实验中用高效液相色谱法测定钩藤4种代表生物碱的含量。结果钩藤中生物碱的最佳提取条件为:选用0.54 mol.L-1离子液体[C4MIM]BF4的水溶液为提取溶剂,pH值调至1.42,液料比100∶1 mL.g-1,提取时间8 min。钩藤中4种代表生物碱的质量分数达2.52 mg.g-1。结论该提取工艺操作简便合理,重复性良好,具有可行性。