染料配体固相萃取剂的制备及萃取性能

利用无孔脲醛树脂-ZrO2复合物微球表面的酰胺键与三嗪染料-活性艳蓝X-BR分子中三嗪环上的活泼氯反应,将染料键合到微球表面,合成了一种新型无孔染料配体固相萃取剂。以牛血清白蛋白(BSA)为样品,考察了该萃取剂对BSA静态吸附的动力学和热力学性能。结果表明,该萃取剂对BSA的饱和萃取量达到34.5 mg/g,可以用Langmuir吸附等温方程进行描述;在pH=4.6时,BSA的萃取量达到最大;实验进行2 h后,BSA的萃取量达到最大值的80%,萃取的蛋白很容易用1 mol/L KSCN进行洗脱,洗脱率达93.5%,并且洗脱实验的重现性较好。由此可见,该萃取剂可用于生物大分子HPLC分析柱前干扰蛋白的除去和目标蛋白的富集。

一种新型金属螯合亲和色谱固定相的制备及评价

采用溶胶-凝胶法,在正庚烷乳液中生成1.5μm的无孔脲醛树脂-二氧化锆复合微球基体,其与丙烯酸甲酯进行迈克尔加成反应后,通过亲核取代反应与螯合剂亚氨基二乙酸(IDA)键合,制成IDA-UF-ZrO2固定相,此固定相与铜离子(Ⅱ)螯合后,形成金属螯合亲和色谱固定相(Cu-IDA-UF-ZrO2).以牛血清白蛋白(BSA)为样品,考察了两种新合成的固定相的色谱性能,结果表明BSA在Cu-IDA-UF-ZrO2上的保留时间比在IDA-UF-ZrO2上的保留时间有所增加,同时BSA在Cu-IDA-UF-ZrO2上的保留主要受固定金属离子与蛋白质侧链上氨基酸间配位作用的影响.

用作亲和色谱固定相基体的二氧化锆与脲醛树脂复合物微球的合成

文中研究了一种用作生物大分子亲和色谱基体的二氧化锆与脲醛树脂复合物微球的制备方法。以水合氯化氧锆为起始原料 ,六次甲基四胺和尿素作为沉淀剂 ,在正庚烷乳液中生成 3～ 5μm的二氧化锆与脲醛树脂复合物微球。探讨了乳化剂和乳化助剂的种类、比例、搅拌速度等对复合物微球球径的影响。

染料配体脲醛树脂-二氧化锆复合微球的制备及对牛血清白蛋白的萃取性能

采用溶胶-凝胶法制备无孔脲醛树脂-二氧化锆复合微球,在碳酸盐缓冲溶液中,利用微球表面的酰胺键与三嗪染料-活性艳蓝X-BR分子中三嗪环上的活泼氯反应,将染料键合到微球表面,以牛血清白蛋白(BSA)为样品,考察了不同条件下,该萃取剂对BSA的萃取能力。结果表明,该萃取剂对BSA的饱和萃取量达到30.3 mg.g-1,同时萃取的蛋白易于洗脱,1.0 mol.L-1氰化钾的洗脱率达到93.5%。

牛血清白蛋白-脲醛树脂-二氧化锆固相萃取剂的制备及评价

合成了3μm无孔脲醛树脂-二氧化锆(UF-ZrO2)复合微球,并用扫描电子显微镜对其进行表征.利用基体表面上的酰胺键与丙烯酸甲酯和乙二胺进行三次马氏加成反应和胺化反应,形成末端为胺基的聚胺基酰胺星型树状间隔臂.再用咪唑法将牛血清白蛋白(BSA)对其表面进行修饰,制成BSA-UF-ZrO2固相萃取剂.以溶菌酶和卵清蛋白作为测试蛋白,分别考察了时间,pH值,洗脱试剂及其浓度对BSA-UF-ZrO2固相萃取剂吸附量的影响.结果表明,溶菌酶和卵清蛋白最佳吸附时间是4 h,缓冲溶液的pH值是6.0和5.0,最佳洗脱试剂是0.0625 mol.mL-1的KSCN(溶菌酶)和0.1250 mol.mL-1的KSCN(卵清蛋白).