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海绵分离富集尿内17-酮类固醇和17-羟皮质类固醇的测定
被引量:
1
1
作者
荆照政
施晓红
傅兴平
《湖南医科大学学报》
CSCD
1998年第3期314-316,共3页
用聚氨脂海绵对人尿内17-酮类固醇(17-KS)和17-羟皮质类固醇(17-OHCS)进行分离和富集。用乙醇解吸附,分别用间二硝基苯和盐酸苯肼显色,分光光度法测定。本法标准差为±0.032,检出限为0.01μgm...
用聚氨脂海绵对人尿内17-酮类固醇(17-KS)和17-羟皮质类固醇(17-OHCS)进行分离和富集。用乙醇解吸附,分别用间二硝基苯和盐酸苯肼显色,分光光度法测定。本法标准差为±0.032,检出限为0.01μgml-1,回收率为99.0%~101.0%,变异系数小于6.23%。
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关键词
17
-酮类固醇
聚氨脂海绵
尿
17
羟皮质类固醇
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职称材料
全自动生化分析仪检测尿17-酮类固醇的性能评价
2
作者
程勇
刘辰庚
+3 位作者
张丽春
赵萍萍
王红彦
王培昌
《中国医学装备》
2019年第2期33-36,共4页
目的:分析全自动生化仪检测尿-17酮类固醇(17-KS)的指标及与手工方法的性能差异。方法:选取110例患者,根据病情将其分为高血压组(50例)、嗜铬细胞瘤组(30例)及库欣综合征组(30例);另随机抽取30名健康受试者作为健康对照组,选取30名高血...
目的:分析全自动生化仪检测尿-17酮类固醇(17-KS)的指标及与手工方法的性能差异。方法:选取110例患者,根据病情将其分为高血压组(50例)、嗜铬细胞瘤组(30例)及库欣综合征组(30例);另随机抽取30名健康受试者作为健康对照组,选取30名高血压待确诊患者作为待确诊组。分别评价生化仪法和手工法17-KS检测的正确度、精密度、线性范围和抗干扰等指标,且对5组临床样本检测进行比较。结果:生化仪法检测17-KS的正确度、精密度、线性范围和抗干扰等相关指标优于手工法;手工法和生化仪法检测定值质控品BIO-RAD的相对偏差分别为8.43%和4.23%,生化仪法临床标本检测的异常率略高于手工法。生化法检测嗜铬细胞瘤阳性率高于手工法,其差异有统计学意义(x^2=4.59,P<0.05)。结论:生化仪法17-KS检测比传统的手工法有更好的检测能力,生化仪法及试剂检测可为临床提供准确的检验数据。
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关键词
17
-酮类固醇
全自动生化仪法
手工法
性能评价
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职称材料
尿-17酮类固醇在评定男运动员负荷能力及机体疲劳程度方面的初步研究
3
作者
刘坚
刘华
《云南师范大学学报(自然科学版)》
1999年第4期54-60,共7页
男子运动员负荷能力与机体疲劳及恢复问题,多年来一直是运动训练和竞赛中关注的焦点。它们之间相互联系,互相制约,共同构成了运动训练和竞赛中成败的基本因素,本文研究的目的就是为了进一步弄清男子运动员在不同负荷状态下尿- 17...
男子运动员负荷能力与机体疲劳及恢复问题,多年来一直是运动训练和竞赛中关注的焦点。它们之间相互联系,互相制约,共同构成了运动训练和竞赛中成败的基本因素,本文研究的目的就是为了进一步弄清男子运动员在不同负荷状态下尿- 17 酮类固醇在体内分泌代谢的情况,把握其规律,力求为训练与竞赛负荷的安排及过渡训练的早期诊断提供参考依据。
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关键词
尿-
17
酮类固醇
运动员
负荷能力
机体疲劳
男性
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职称材料
均相酶免疫法测定尿激素类项目的性能验证
被引量:
1
4
作者
张晓红
郭拥军
刘向祎
《标记免疫分析与临床》
CAS
2018年第10期1568-1573,共6页
目的验证均相酶免疫法尿游离皮质醇(COR)、17-羟类固醇(17-OHCS)、17-酮类固醇(17-KS)和香草扁桃酸(VMA)试剂盒在全自动生化分析仪Beckman DXC800上的性能,并初步评价其临床应用价值。方法依据WS T420-2013文件(临床实验室对商品定量试...
目的验证均相酶免疫法尿游离皮质醇(COR)、17-羟类固醇(17-OHCS)、17-酮类固醇(17-KS)和香草扁桃酸(VMA)试剂盒在全自动生化分析仪Beckman DXC800上的性能,并初步评价其临床应用价值。方法依据WS T420-2013文件(临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证)进行实验设计。精密度验证:采用各项目试剂盒配套的2水平质控品重复测定3次,连测5天,计算尿游离COR、17-OHCS、17-KS和VMA的重复精密度、期间精密度和实验室内变异系数(coefficient of variation,CV),并与厂家提供的数值进行比较,如果实验数值小于厂家数值,则验证通过。正确度验证:采用各项目试剂盒配套的定值校准品进行批内重复测定2次,验证4个项目各个水平定值校准品的均值与厂家提供的定值是否一致(相对偏移<1/2允许总误差),如果一致则表示正确度验证通过。同时,尿游离COR还采用20例随机住院患者的新鲜尿液标本,通过本试剂盒与Beckman化学发光法试剂盒检测进行比对。另外,尿游离COR和VMA还采用回收试验进行正确度验证。线性范围验证:选择配套定值校准品中的最高值,与最低值按比例进行混合稀释后,每个水平测2次,计算均值和偏移,并计算相关系数平方r2。生物参考区间验证:选取20例表观健康体检人员的新鲜尿液标本,验证尿游离COR、17-OHCS、17-KS和VMA的参考区间。结果测定各项目试剂盒配套的2水平质控品,尿游离COR、17-OHCS、17-KS和VMA低值质控品实验室内CV分别为:5. 01%、3. 75%、7. 52%和6. 11%,高值质控品实验室内CV分别为:5. 24%、6. 32%、6. 26%和4. 38%,4个项目实验室内CV均小于厂家提供的数值(均为10%),精密度验证通过。正确度验证时,4个项目各水平定值校准品均值的相对偏移均小于1/2允许总误差(25%)。尿游离COR本试剂盒与Beckman化学发光法试剂盒检测结果一致。尿游离COR回收率为109. 75%,尿VMA回收率为93. 67%。线性范围验证时,尿游离COR的线性范围为20. 0~1600. 0 ng/ml,尿17-OHCS的线性范围为0. 0~60. 0 mg/L,尿17-KS的线性范围为2. 0~130. 0mg/L,尿VMA的线性范围为2. 0~100. 0 mg/L,各项目相关系数平方r2均大于0. 995。生物参考区间验证,20例表观健康体检人员的新鲜尿液标本,4个项目检测结果均在厂家提供的参考区间范围之内。结论此均相酶免疫法尿游离COR、17-OHCS、17-KS和VMA试剂盒在全自动生化分析仪Beckman DXC800上具有良好的精密度、正确度和线性范围,性能指标符合质量标准,可满足临床测试要求。
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关键词
皮质醇
17
-羟类固醇
17
-酮类固醇
香草扁桃酸
性能验证
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职称材料
紫红红球菌9α–羟化酶loop对酶活性的影响
被引量:
1
5
作者
刘扬
申雁冰
+1 位作者
王九彬
王敏
《天津科技大学学报》
CAS
2018年第1期14-19,共6页
3–甾酮–9α–羟化酶是转化雄甾–4–烯–3,17–二酮生成9α–羟基雄甾–4–烯–3,17–二酮的关键酶,其加氧酶组分在底物进入酶活性中心入口处,存在一个由16个氨基酸构成的柔性loop.为了明晰loop对酶活性的影响,利用定点突变技术对loo...
3–甾酮–9α–羟化酶是转化雄甾–4–烯–3,17–二酮生成9α–羟基雄甾–4–烯–3,17–二酮的关键酶,其加氧酶组分在底物进入酶活性中心入口处,存在一个由16个氨基酸构成的柔性loop.为了明晰loop对酶活性的影响,利用定点突变技术对loop上结构变化较大的氨基酸进行研究,解析出了各氨基酸的作用,T224、N225、Y226与周围α5螺旋和β折叠存在一定相互作用,共同调节底物通道与底物运送能力;D227和D228起到支撑固定loop结构的作用,使T224–Y226能与其周围的氨基酸产生相互作用.这为进一步采用蛋白质工程改造9α–羟化酶提供了理论依据.
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关键词
3–甾酮–9α–羟化酶
雄甾–4–烯–3
17
–二酮
9α–羟基雄甾–4–烯–3
17
–二酮
LOOP
定点突变
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职称材料
表达3-甾酮-△^(1)-脱氢酶降解植物甾醇合成雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮
被引量:
7
6
作者
张乐乐
张显
+4 位作者
邵明龙
陈榕榕
饶志明
李会
许正宏
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第11期1589-1600,共12页
构建分枝杆菌表达载体pMTac并在分枝杆菌Mycobacterium neoaurum JC-12中加强表达甾醇降解过程中的关键酶3-甾酮-△1-脱氢酶(KSDD)以提高雄甾-1,4-二烯-3,17-二铜(ADD)的产量。将p MF41的启动子pACE替换成tac启动子构建载体pMTac,在分...
构建分枝杆菌表达载体pMTac并在分枝杆菌Mycobacterium neoaurum JC-12中加强表达甾醇降解过程中的关键酶3-甾酮-△1-脱氢酶(KSDD)以提高雄甾-1,4-二烯-3,17-二铜(ADD)的产量。将p MF41的启动子pACE替换成tac启动子构建载体pMTac,在分枝杆菌中分别表达报告基因绿色荧光蛋白(GFP)和关键酶KSDD,通过GFP亮度和KSDD酶活验证tac启动子在M.neoaurum JC-12中的效果,并发酵验证加强表达KSDD对产物ADD的影响。荧光显微照片表明两个载体均能在M.neoaurum JC-12表达GFP,但tac启动子的效果比pACE强。酶活测定结果为重组菌M.neoaurum JC-12/pMTac-ksdd破碎细胞上清液中KSDD酶活比原始菌提高了6.53倍,比M.neoaurum JC-12/pMF41-ksdd提高了4.36倍。摇瓶发酵显示重组菌M.neoaurum JC-12/pMTac-ksdd ADD的产量比原始菌提高了22.2%,由4.86 g/L提高到5.94 g/L,而AD的产量由0.92 g/L减少到0.17 g/L,降低了81.5%;与M.neoaurum JC-12/p MF41-ksdd比,ADD产量提高了12.7%,AD降低了71.2%。以20 g/L植物甾醇为底物,5 L发酵罐中重组菌M.neoaurum JC-12/pMTac-ksdd的ADD产量达到10.28 g/L。结果表明,构建的新型表达载体pMTac适用于在M.neoaurum JC-12中加强表达关键酶KSDD,而且在M.neoaurum JC-12中过量表达KSDD有助于ADD产量的提高,为目前报道的发酵法利用新金色分枝杆菌降解植物甾醇合成ADD的最高水平。
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关键词
MYCOBACTERIUM
neoaurum
JC-12
3-甾酮-△^(1)-脱氢酶
tac启动子
雄甾-4-烯-3
17
-二酮
雄甾-1
4-二烯-3
原文传递
3-甾酮-9α-羟基化酶基因在分枝杆菌中的异源表达与9α-羟基雄烯二酮的制备
被引量:
9
7
作者
袁家代
陈贵英
+4 位作者
程世君
葛方兰
王琼
李维
李江
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第4期523-533,共11页
9α-羟基雄烯二酮(9-OH-AD)是制备甾体类药物的重要中间产物。3-甾酮-9α-羟基化酶(KSH)能够转化雄烯二酮(AD)产生9α-羟基雄烯二酮(9-OH-AD),该酶由Ksh A和Ksh B两个亚基构成。为获得高效积累9-OH-AD的重组菌株,本研究选择耻垢分枝杆菌...
9α-羟基雄烯二酮(9-OH-AD)是制备甾体类药物的重要中间产物。3-甾酮-9α-羟基化酶(KSH)能够转化雄烯二酮(AD)产生9α-羟基雄烯二酮(9-OH-AD),该酶由Ksh A和Ksh B两个亚基构成。为获得高效积累9-OH-AD的重组菌株,本研究选择耻垢分枝杆菌Mycobacterium smegmatis mc2155和戈登氏菌Gordonia neofelifaecis NRRL B-59395,对其在胆固醇为唯一碳源条件下表达明显上调的ksh A和ksh B候选基因进行克隆,插入到分枝杆菌表达载体p NIT中,构建共表达质粒,并将它们导入分枝杆菌Mycobacterium sp.NRRL B-3805中,获得重组菌株。利用重组菌株分别对植物甾醇、胆固醇和谷甾醇进行生物转化,分离纯化转化产物,采用光谱学方法鉴定其化学结构,确定该转化产物为9α-羟基雄烯二酮,说明分枝杆菌Mycobacterium sp.NRRL B-3805由积累雄烯二酮变为积累9α-羟基雄烯二酮(9-OH-AD),进而证明导入的候选基因ksh A和ksh B确实为有功能的基因。生物转化实验表明,与胆固醇、谷甾醇相比,植物甾醇作为底物更易于转化;而用来源于耻垢分枝杆菌的ksh A、ksh B构建的重组菌转化率更高,可达90%,具有较高的应用价值。本研究通过对KSH编码基因的异源表达,成功地进行了分枝杆菌生物转化特性的改造,为探索各种甾体药物中间体的工业生产奠定了基础。
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关键词
分枝杆菌NRRL
B-3805
9α-羟基雄烯二酮
3-甾酮-9α-羟基化酶
异源表达
生物转化
原文传递
先天性肾上腺皮质增生症31例疗效观察
被引量:
2
8
作者
肖凤云
石大维
+2 位作者
刘玉凤
王静微
牟继红
《中国实用妇科与产科杂志》
CAS
CSCD
1995年第1期25-26,共2页
本文对31例先天性肾上腺皮质增生症(CAH)采用强的松及外生殖器畸形矫正手术。外生殖器异常按 Prader 的分型,其中Ⅰ型5例,Ⅱ型9例,Ⅲ型17例。除1例无闭经外,其余均为原发性闭经。所有病例乳房均未发育,呈男性乳头,治疗前先作地塞米松抑...
本文对31例先天性肾上腺皮质增生症(CAH)采用强的松及外生殖器畸形矫正手术。外生殖器异常按 Prader 的分型,其中Ⅰ型5例,Ⅱ型9例,Ⅲ型17例。除1例无闭经外,其余均为原发性闭经。所有病例乳房均未发育,呈男性乳头,治疗前先作地塞米松抑制试验,试验后17—KS 值均明显下降,根据试验前17—KS 值选择强的松用量。全部患者第二性征得到改善,月经来潮。其中已婚11例,6例妊娠,4例足月妊娠,母婴健康。观察中发现部分病人停药后仍能维持月经周期。本文就此对 CAH 病人是否需终生服药问题进行了讨论。
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关键词
肾上腺皮质增生
羟化酶
尿
17
酮
药物疗法
疗效
原文传递
题名
海绵分离富集尿内17-酮类固醇和17-羟皮质类固醇的测定
被引量:
1
1
作者
荆照政
施晓红
傅兴平
机构
平江县中医院检验科
出处
《湖南医科大学学报》
CSCD
1998年第3期314-316,共3页
文摘
用聚氨脂海绵对人尿内17-酮类固醇(17-KS)和17-羟皮质类固醇(17-OHCS)进行分离和富集。用乙醇解吸附,分别用间二硝基苯和盐酸苯肼显色,分光光度法测定。本法标准差为±0.032,检出限为0.01μgml-1,回收率为99.0%~101.0%,变异系数小于6.23%。
关键词
17
-酮类固醇
聚氨脂海绵
尿
17
羟皮质类固醇
Keywords
17
ketosteroid
17
hydroxycorticosteroid
foam rubber*
spectrophotometry
分类号
R446.122 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
全自动生化分析仪检测尿17-酮类固醇的性能评价
2
作者
程勇
刘辰庚
张丽春
赵萍萍
王红彦
王培昌
机构
首都医科大学宣武医院检验科
出处
《中国医学装备》
2019年第2期33-36,共4页
文摘
目的:分析全自动生化仪检测尿-17酮类固醇(17-KS)的指标及与手工方法的性能差异。方法:选取110例患者,根据病情将其分为高血压组(50例)、嗜铬细胞瘤组(30例)及库欣综合征组(30例);另随机抽取30名健康受试者作为健康对照组,选取30名高血压待确诊患者作为待确诊组。分别评价生化仪法和手工法17-KS检测的正确度、精密度、线性范围和抗干扰等指标,且对5组临床样本检测进行比较。结果:生化仪法检测17-KS的正确度、精密度、线性范围和抗干扰等相关指标优于手工法;手工法和生化仪法检测定值质控品BIO-RAD的相对偏差分别为8.43%和4.23%,生化仪法临床标本检测的异常率略高于手工法。生化法检测嗜铬细胞瘤阳性率高于手工法,其差异有统计学意义(x^2=4.59,P<0.05)。结论:生化仪法17-KS检测比传统的手工法有更好的检测能力,生化仪法及试剂检测可为临床提供准确的检验数据。
关键词
17
-酮类固醇
全自动生化仪法
手工法
性能评价
Keywords
17
-
ketosteroid
e
Automatic biochemical analyzer
Manual method
Performance
分类号
R197.39 [医药卫生—卫生事业管理]
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职称材料
题名
尿-17酮类固醇在评定男运动员负荷能力及机体疲劳程度方面的初步研究
3
作者
刘坚
刘华
机构
云南师范大学体育学院
出处
《云南师范大学学报(自然科学版)》
1999年第4期54-60,共7页
文摘
男子运动员负荷能力与机体疲劳及恢复问题,多年来一直是运动训练和竞赛中关注的焦点。它们之间相互联系,互相制约,共同构成了运动训练和竞赛中成败的基本因素,本文研究的目的就是为了进一步弄清男子运动员在不同负荷状态下尿- 17 酮类固醇在体内分泌代谢的情况,把握其规律,力求为训练与竞赛负荷的安排及过渡训练的早期诊断提供参考依据。
关键词
尿-
17
酮类固醇
运动员
负荷能力
机体疲劳
男性
Keywords
urine-17 ketosteroid
Assess
Male athlete
Load
Ability
Organism fatigue
分类号
G808.16 [文化科学—体育训练]
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职称材料
题名
均相酶免疫法测定尿激素类项目的性能验证
被引量:
1
4
作者
张晓红
郭拥军
刘向祎
机构
首都医科大学附属北京同仁医院检验科
出处
《标记免疫分析与临床》
CAS
2018年第10期1568-1573,共6页
基金
北京市卫生系统高层次卫生技术人才(编号:2015-3-014)
文摘
目的验证均相酶免疫法尿游离皮质醇(COR)、17-羟类固醇(17-OHCS)、17-酮类固醇(17-KS)和香草扁桃酸(VMA)试剂盒在全自动生化分析仪Beckman DXC800上的性能,并初步评价其临床应用价值。方法依据WS T420-2013文件(临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证)进行实验设计。精密度验证:采用各项目试剂盒配套的2水平质控品重复测定3次,连测5天,计算尿游离COR、17-OHCS、17-KS和VMA的重复精密度、期间精密度和实验室内变异系数(coefficient of variation,CV),并与厂家提供的数值进行比较,如果实验数值小于厂家数值,则验证通过。正确度验证:采用各项目试剂盒配套的定值校准品进行批内重复测定2次,验证4个项目各个水平定值校准品的均值与厂家提供的定值是否一致(相对偏移<1/2允许总误差),如果一致则表示正确度验证通过。同时,尿游离COR还采用20例随机住院患者的新鲜尿液标本,通过本试剂盒与Beckman化学发光法试剂盒检测进行比对。另外,尿游离COR和VMA还采用回收试验进行正确度验证。线性范围验证:选择配套定值校准品中的最高值,与最低值按比例进行混合稀释后,每个水平测2次,计算均值和偏移,并计算相关系数平方r2。生物参考区间验证:选取20例表观健康体检人员的新鲜尿液标本,验证尿游离COR、17-OHCS、17-KS和VMA的参考区间。结果测定各项目试剂盒配套的2水平质控品,尿游离COR、17-OHCS、17-KS和VMA低值质控品实验室内CV分别为:5. 01%、3. 75%、7. 52%和6. 11%,高值质控品实验室内CV分别为:5. 24%、6. 32%、6. 26%和4. 38%,4个项目实验室内CV均小于厂家提供的数值(均为10%),精密度验证通过。正确度验证时,4个项目各水平定值校准品均值的相对偏移均小于1/2允许总误差(25%)。尿游离COR本试剂盒与Beckman化学发光法试剂盒检测结果一致。尿游离COR回收率为109. 75%,尿VMA回收率为93. 67%。线性范围验证时,尿游离COR的线性范围为20. 0~1600. 0 ng/ml,尿17-OHCS的线性范围为0. 0~60. 0 mg/L,尿17-KS的线性范围为2. 0~130. 0mg/L,尿VMA的线性范围为2. 0~100. 0 mg/L,各项目相关系数平方r2均大于0. 995。生物参考区间验证,20例表观健康体检人员的新鲜尿液标本,4个项目检测结果均在厂家提供的参考区间范围之内。结论此均相酶免疫法尿游离COR、17-OHCS、17-KS和VMA试剂盒在全自动生化分析仪Beckman DXC800上具有良好的精密度、正确度和线性范围,性能指标符合质量标准,可满足临床测试要求。
关键词
皮质醇
17
-羟类固醇
17
-酮类固醇
香草扁桃酸
性能验证
Keywords
Cortisol
17
- hydroxy corticosteroids
17
-
ketosteroid
Vanillylmandelic acid
Performance verification
分类号
R446.6 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
紫红红球菌9α–羟化酶loop对酶活性的影响
被引量:
1
5
作者
刘扬
申雁冰
王九彬
王敏
机构
工业发酵微生物教育部重点实验室天津市工业微生物重点实验室天津科技大学生物工程学院
出处
《天津科技大学学报》
CAS
2018年第1期14-19,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(21276196
21406167)
文摘
3–甾酮–9α–羟化酶是转化雄甾–4–烯–3,17–二酮生成9α–羟基雄甾–4–烯–3,17–二酮的关键酶,其加氧酶组分在底物进入酶活性中心入口处,存在一个由16个氨基酸构成的柔性loop.为了明晰loop对酶活性的影响,利用定点突变技术对loop上结构变化较大的氨基酸进行研究,解析出了各氨基酸的作用,T224、N225、Y226与周围α5螺旋和β折叠存在一定相互作用,共同调节底物通道与底物运送能力;D227和D228起到支撑固定loop结构的作用,使T224–Y226能与其周围的氨基酸产生相互作用.这为进一步采用蛋白质工程改造9α–羟化酶提供了理论依据.
关键词
3–甾酮–9α–羟化酶
雄甾–4–烯–3
17
–二酮
9α–羟基雄甾–4–烯–3
17
–二酮
LOOP
定点突变
Keywords
3-
ketosteroid
-9α-hydroxylase
androst-4-ene-3,
17
-dione
9α-hydroxyandrost-4-ene-3,
17
-dione
loop
site-directed mutagenesis
分类号
Q71 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
表达3-甾酮-△^(1)-脱氢酶降解植物甾醇合成雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮
被引量:
7
6
作者
张乐乐
张显
邵明龙
陈榕榕
饶志明
李会
许正宏
机构
江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室
江南大学药学院
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第11期1589-1600,共12页
基金
国家重点基础研究发展计划(973计划)(No.2012CB725202)
国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2011AA02A211)
+2 种基金
国家自然科学基金(No.21276110)
中央高校基本科研业务费专项资金(No.JUSRP51306A)
江苏高校优势学科建设工程项目资助~~
文摘
构建分枝杆菌表达载体pMTac并在分枝杆菌Mycobacterium neoaurum JC-12中加强表达甾醇降解过程中的关键酶3-甾酮-△1-脱氢酶(KSDD)以提高雄甾-1,4-二烯-3,17-二铜(ADD)的产量。将p MF41的启动子pACE替换成tac启动子构建载体pMTac,在分枝杆菌中分别表达报告基因绿色荧光蛋白(GFP)和关键酶KSDD,通过GFP亮度和KSDD酶活验证tac启动子在M.neoaurum JC-12中的效果,并发酵验证加强表达KSDD对产物ADD的影响。荧光显微照片表明两个载体均能在M.neoaurum JC-12表达GFP,但tac启动子的效果比pACE强。酶活测定结果为重组菌M.neoaurum JC-12/pMTac-ksdd破碎细胞上清液中KSDD酶活比原始菌提高了6.53倍,比M.neoaurum JC-12/pMF41-ksdd提高了4.36倍。摇瓶发酵显示重组菌M.neoaurum JC-12/pMTac-ksdd ADD的产量比原始菌提高了22.2%,由4.86 g/L提高到5.94 g/L,而AD的产量由0.92 g/L减少到0.17 g/L,降低了81.5%;与M.neoaurum JC-12/p MF41-ksdd比,ADD产量提高了12.7%,AD降低了71.2%。以20 g/L植物甾醇为底物,5 L发酵罐中重组菌M.neoaurum JC-12/pMTac-ksdd的ADD产量达到10.28 g/L。结果表明,构建的新型表达载体pMTac适用于在M.neoaurum JC-12中加强表达关键酶KSDD,而且在M.neoaurum JC-12中过量表达KSDD有助于ADD产量的提高,为目前报道的发酵法利用新金色分枝杆菌降解植物甾醇合成ADD的最高水平。
关键词
MYCOBACTERIUM
neoaurum
JC-12
3-甾酮-△^(1)-脱氢酶
tac启动子
雄甾-4-烯-3
17
-二酮
雄甾-1
4-二烯-3
Keywords
Mycobacterium neoaurum JC-12
3-
ketosteroid
-△^(1)-dehydrogenase
tac promoter
4-androstene-3
17
-dione
androst-1
4-diene-3
17
-dione
分类号
TQ929 [轻工技术与工程—发酵工程]
原文传递
题名
3-甾酮-9α-羟基化酶基因在分枝杆菌中的异源表达与9α-羟基雄烯二酮的制备
被引量:
9
7
作者
袁家代
陈贵英
程世君
葛方兰
王琼
李维
李江
机构
四川师范大学生命科学学院
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第4期523-533,共11页
基金
国家自然科学基金(No.31271332)
四川省科技厅项目(Nos.2009JY0067
+2 种基金
2012SZ0074)
四川省教育厅项目(No.13ZA0145)
四川师范大学校级重点科研基金(No.2013-12)资助~~
文摘
9α-羟基雄烯二酮(9-OH-AD)是制备甾体类药物的重要中间产物。3-甾酮-9α-羟基化酶(KSH)能够转化雄烯二酮(AD)产生9α-羟基雄烯二酮(9-OH-AD),该酶由Ksh A和Ksh B两个亚基构成。为获得高效积累9-OH-AD的重组菌株,本研究选择耻垢分枝杆菌Mycobacterium smegmatis mc2155和戈登氏菌Gordonia neofelifaecis NRRL B-59395,对其在胆固醇为唯一碳源条件下表达明显上调的ksh A和ksh B候选基因进行克隆,插入到分枝杆菌表达载体p NIT中,构建共表达质粒,并将它们导入分枝杆菌Mycobacterium sp.NRRL B-3805中,获得重组菌株。利用重组菌株分别对植物甾醇、胆固醇和谷甾醇进行生物转化,分离纯化转化产物,采用光谱学方法鉴定其化学结构,确定该转化产物为9α-羟基雄烯二酮,说明分枝杆菌Mycobacterium sp.NRRL B-3805由积累雄烯二酮变为积累9α-羟基雄烯二酮(9-OH-AD),进而证明导入的候选基因ksh A和ksh B确实为有功能的基因。生物转化实验表明,与胆固醇、谷甾醇相比,植物甾醇作为底物更易于转化;而用来源于耻垢分枝杆菌的ksh A、ksh B构建的重组菌转化率更高,可达90%,具有较高的应用价值。本研究通过对KSH编码基因的异源表达,成功地进行了分枝杆菌生物转化特性的改造,为探索各种甾体药物中间体的工业生产奠定了基础。
关键词
分枝杆菌NRRL
B-3805
9α-羟基雄烯二酮
3-甾酮-9α-羟基化酶
异源表达
生物转化
Keywords
Mycobacterium sp.NRRL B-3805
9α-hydroxy-4-androstene-3
17
-dione
3-
ketosteroid
-9α-hydroxylase
heterologous expression
biotransfor
分类号
TQ920.1 [轻工技术与工程—发酵工程]
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
先天性肾上腺皮质增生症31例疗效观察
被引量:
2
8
作者
肖凤云
石大维
刘玉凤
王静微
牟继红
机构
哈尔滨医科大学附属第一医院
出处
《中国实用妇科与产科杂志》
CAS
CSCD
1995年第1期25-26,共2页
文摘
本文对31例先天性肾上腺皮质增生症(CAH)采用强的松及外生殖器畸形矫正手术。外生殖器异常按 Prader 的分型,其中Ⅰ型5例,Ⅱ型9例,Ⅲ型17例。除1例无闭经外,其余均为原发性闭经。所有病例乳房均未发育,呈男性乳头,治疗前先作地塞米松抑制试验,试验后17—KS 值均明显下降,根据试验前17—KS 值选择强的松用量。全部患者第二性征得到改善,月经来潮。其中已婚11例,6例妊娠,4例足月妊娠,母婴健康。观察中发现部分病人停药后仍能维持月经周期。本文就此对 CAH 病人是否需终生服药问题进行了讨论。
关键词
肾上腺皮质增生
羟化酶
尿
17
酮
药物疗法
疗效
Keywords
Adrenocortical hyperplasia
21-hydroxylase deficiency
Urinary
17
-
ketosteroid
分类号
R586 [医药卫生—内分泌]
R711.1 [医药卫生—妇产科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
海绵分离富集尿内17-酮类固醇和17-羟皮质类固醇的测定
荆照政
施晓红
傅兴平
《湖南医科大学学报》
CSCD
1998
1
下载PDF
职称材料
2
全自动生化分析仪检测尿17-酮类固醇的性能评价
程勇
刘辰庚
张丽春
赵萍萍
王红彦
王培昌
《中国医学装备》
2019
0
下载PDF
职称材料
3
尿-17酮类固醇在评定男运动员负荷能力及机体疲劳程度方面的初步研究
刘坚
刘华
《云南师范大学学报(自然科学版)》
1999
0
下载PDF
职称材料
4
均相酶免疫法测定尿激素类项目的性能验证
张晓红
郭拥军
刘向祎
《标记免疫分析与临床》
CAS
2018
1
下载PDF
职称材料
5
紫红红球菌9α–羟化酶loop对酶活性的影响
刘扬
申雁冰
王九彬
王敏
《天津科技大学学报》
CAS
2018
1
下载PDF
职称材料
6
表达3-甾酮-△^(1)-脱氢酶降解植物甾醇合成雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮
张乐乐
张显
邵明龙
陈榕榕
饶志明
李会
许正宏
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
7
原文传递
7
3-甾酮-9α-羟基化酶基因在分枝杆菌中的异源表达与9α-羟基雄烯二酮的制备
袁家代
陈贵英
程世君
葛方兰
王琼
李维
李江
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
9
原文传递
8
先天性肾上腺皮质增生症31例疗效观察
肖凤云
石大维
刘玉凤
王静微
牟继红
《中国实用妇科与产科杂志》
CAS
CSCD
1995
2
原文传递
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