伪狂犬病病毒Ea株Us9基因的克隆与序列分析

对含伪狂犬病病毒Ea株BamHI7片段的质粒pUC6.6进行亚克隆 ,构建了仅含Us9基因约 0 .6kb片段的重组质粒pSKMN0 .6。双脱氧末端终止法进行双链测序 ,结果表明 :Us9存在 2种可能的同C_末端的编码形式 ,分别编码 10 6或 98个氨基酸残基 ,Us9基因与其下游的Us2 (2 8K)基因之间存在约 2 0 0bp的非转录区。将Ea株Us9基因序列同国外Rice株进行同源比较 ,Ea株Us9基因存在多处点突变 ,但总的同源性达 96%。将推导的氨基酸序列与人单纯疱疹病毒I型 (HSV_1)Us9进行比较 ,发现二者在组成和结构上存在多处保守序列 ,尤其是潜在的酪氨酸磷酸化位点 ,C_端疏水性氨基酸以及由连续 6个带正电荷的精氨酸残基组成的核定位信号序列 。

伪狂犬病毒gE、gI和US9三基因缺失株的构建

伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)是一种疱疹病毒,在自然界具有极广泛的宿主类群,是中国养猪业发展主要威胁之一。为了研究病毒的神经传导机制,实验采用Lipofectamine3 000转染试剂,将PP63质粒与伪狂犬病毒Fa株基因组DNA共转染BHK-21细胞,空斑筛选得到gI/gE/US9重组缺失病毒,并命名为SA215-T。采用PCR、基因测序、Western Blot、电镜检查和生长曲线测定等方法检测重组病毒PRV-SA215-T。研究结果显示,Western Blot未发现gE基因的表达,SA215-T株的电镜形态与野毒株无明显差异,SA215-T株与亲本毒株Fa株在细胞中的生长曲线差异不明显且均达到了较高的病毒滴度。