抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)的体外抗宫颈癌作用机制。方法:体外培养SiHa细胞,PDTC处理后采用WST-8方法检测SiHa细胞的增殖活性;Hoechst 33258染色、Annexin Ⅴ-FITC/PI双标法细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡;凝胶迁移变动分析(EMSA)检测SiHa细胞核内核转录因子-κB(NF-κB)活性。结果:PDTC能有效抑制SiHa细胞增殖和诱导SiHa细胞凋亡;染色可见典型的凋亡细胞形态;各组间早期凋亡率比较差异有显著性(P<0.01),100μmol/LPDTC晚期凋亡率较其他组明显升高(P<0.01);PDTC可抑制SiHa细胞核内NF-κB活性,其抑制强度与作用24h细胞生长抑制率呈直线正相关(r=0.931,P=0.035),与作用48h早期凋亡率呈曲线正相关(r=1.000,P=0.011)。结论:PDTC抑制SiHa细胞增殖与其诱导细胞凋亡作用有关,而致凋亡作用可能与其抑制NF-κB信号转导通路,启动凋亡程序有关。

酪氨酸激酶受体B和脑源性神经营养因子在宫颈癌及癌旁组织中的表达差异

目的研究酪氨酸激酶受体B（TrkB）和脑源性神经营养因子（BDNF）在宫颈癌组织、癌旁组织和正常宫颈组织中的表达情况，分析其与宫颈癌临床病理特征的关系，探讨癌周组织细胞凋亡信号通路的激活与肿瘤恶性程度的关系。方法选择宫颈浸润癌患者72例，以同期因良性病变行子宫切除的正常宫颈组织72例为对照。构建包括宫颈癌组织、癌旁组织、正常宫颈组织在内的组织芯片，采用免疫组化法检测TrkB、BDNF表达情况，比较上述指标在不同组织中的表达差异。结果共构建组织芯片6张。TrkB和BDNF在宫颈癌原发灶中的表达率分别为70．80％和91．70％，明显高于癌旁组织的25．00％和48．60％，正常宫颈组织几乎不表达（阳性率分别为4．20％和1．40％）。TrkB在宫颈癌组织中的阳性率与有无脉管侵犯及淋巴结转移有关（x2=12．50和12．36，P〈0．01），与临床分期、病理分级、肿瘤直径、浸润深度的关系不明显（P均〉0．05），而BDNF总体阳性率高，其表达与上述所有因素的相关性均不明显（P均〉0．05）。癌旁组织中TrkB、BDNF表达与肿瘤直径、是否存在脉管浸润及淋巴转移有关（P〈0．01或P〈0．05）。结论癌旁组织中存在一定量的TrkB、BDNF表达，其表达强度与肿瘤直径、有无脉管浸润及淋巴转移显著相关，且比肿瘤组织更能反映其恶性程度。癌周组织TrkB、BDNF表达也许可作为新的评价宫颈癌患者预后的生物学指标。

抗氧化剂PDTC对卡铂诱导宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)联合卡铂对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响。方法:体外培养HeLa细胞,药物作用分为空白组、PDTC组、卡铂组和PDTC+卡铂联合组。各组药物处理后,MTT法检测细胞生长抑制率,FCM法检测细胞凋亡率和细胞周期分布情况,免疫细胞化学方法观察核转录因子κB(nuclearfactor-kappa B,NF-κB)p65在细胞质和细胞核中表达水平的变化。结果:MTT法检测结果显示,PDTC能够有效地抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,呈时间和剂量依赖关系;小剂量(12.5μmol/L)PDTC和卡铂联合应用较单用卡铂,能明显提高细胞生长抑制率(P<0.01)。FCM法检测结果显示,各用药组较对照组以及PDTC+卡铂联用组与单用卡铂组比较,宫颈癌HeLa细胞的凋亡率差异有统计学意义(P<0.01)。HeLa细胞经PDTC作用后,G0/G1期细胞比例较对照组明显增加(P<0.01),S期细胞比例降低(P<0.01);卡铂单用组使细胞周期阻滞于G2/M期;联合用药组使细胞周期进一步阻滞于G2/M期,且与对照组比较,降低了S期细胞比例(P<0.01)。免疫细胞化学法检测结果显示,NF-κBp65在宫颈癌HeLa细胞中主要表达于细胞质,卡铂诱导24 h后细胞质中NF-κBp65转移至细胞核,其活性增强,而PDTC能够抑制此作用。结论:卡铂能够诱导NF-κBp65的活化。小剂量(12.5μmol/L)PDTC和卡铂联合应用较单用卡铂,能明显增加对宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率和细胞凋亡率。PDTC可能提高宫颈癌HeLa细胞对卡铂的敏感性。