Lactobacillus plantarum J26 alleviates alcohol-induced oxidative liver injury by regulating the Nrf2 signaling pathway

Oxidative stress is one of the main ways to cause alcohol-induced liver injury,and alcoholic liver disease(ALD)has been a common health problem worldwide.Lactic acid bacteria(LAB)is also considered as a potential treatment to alleviate alcohol-induced liver injury.Lactobacillus plantarum J26 is a LAB isolated from Chinese traditional fermented dairy products with excellent probiotic effects.This study aimed to establish a mice model of alcoholic liver injury through acute-on-chronic alcohol feeding and to study the alleviating effect of pre-intake of L.plantarum J26 on alcohol-induced oxidative liver injury and focus on its potential mechanism of alleviating effect.The results showed that pre-intake of L.plantarum J26 could improve liver pathological changes,reduce lipid accumulation,increase mitochondrial ATP and mitochondrial(mtDNA)levels,and alleviate liver injury.In addition,pre-intake L.plantarum J26 can improve the level of short-chain fatty acids(SCFAs)in the intestines in mice,short chain fatty acids can be used as a signaling molecule activation of nuclear factor E2-related factor 2(Nrf2)signaling pathway to alleviate liver oxidative stress,and maintain mitochondrial homeostasis by regulating the expression of genes related to mitochondrial dynamics and autophagy,thereby reducing cell apoptosis to alleviate alcohol-induced oxidative liver injury.

橙皮素调控Nrf2/ARE通路改善载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的实验研究

目的:基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应原件(ARE)通路探讨橙皮素对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)的影响。方法:将48只ApoE^(-/-)小鼠用高脂饮食喂养12周后,采用左颈总动脉缩窄性套管法建立ApoE^(-/-)小鼠AS模型。模型制备成功后将ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、橙皮素低剂量组、橙皮素高剂量组、鸦胆子苦醇组,每组12只。另取12只雄性C57BL/6J小鼠作为对照组,给予普通饲料喂养。橙皮素低、高剂量组小鼠分别给予50 mg/kg、100 mg/kg橙皮素灌胃,每日1次;鸦胆子苦醇组小鼠灌胃100 mg/kg橙皮素,隔天腹腔注射Nrf2抑制剂鸦胆子苦醇2 mg/kg,连续给药12周;对照组和模型组给予等量0.5%羧甲基纤维素钠灌胃。检测各组血清血脂水平以及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;油红O染色观察主动脉斑块形成和主动脉窦脂质沉积情况,并计算损伤面积百分比;荧光探针测定主动脉中活性氧(ROS)的生成;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测主动脉中Nrf2/ARE通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠主动脉ROS增加,血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)、MDA、主动脉斑块损伤和主动脉窦脂质损伤面积百分比、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)的表达均明显升高,血清SOD、GSH-Px活性、主动脉Nrf2、还原型辅酶/醌氧化还原酶(NQO1)、血红素加氧酶1(HO-1)的表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,橙皮素低、高剂量组小鼠ROS降低,血清TC、TG、LDL-C、ox-LDL、MDA水平、主动脉斑块损伤和主动脉窦脂质损伤面积百分比、Keap1均明显下降,HDL-C、SOD、GSH-Px活性、Nrf2、NQO1、HO-1的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);鸦胆子苦醇可逆转高剂量橙皮素减轻ApoE^(-/-)小鼠AS病变的作用。结论:橙皮素可能通过激活Nrf2/ARE通路,维持内皮细胞中的氧化还原平衡,减轻ApoE^(-/-)小鼠AS病变,具有较好的抗AS作用。

基于Nrf2/HO-1通路探讨金雀异黄酮对糖尿病肾病大鼠肾损伤的影响及机制

目的探讨金雀异黄酮对糖尿病肾病大鼠肾组织损伤的影响及其可能的分子机制。方法取雄性SD大鼠55只,随机选择10只作为正常组,其余大鼠采用一次性腹腔注射链脲佐菌素60 mg/kg的方法复制糖尿病肾病模型。将40只成模大鼠随机分为模型组、金雀异黄酮组、鸦胆子苦醇组和金雀异黄酮+鸦胆子苦醇组,每组10只。金雀异黄酮组给予30 mg/kg金雀异黄酮灌胃,鸦胆子苦醇组给予鸦胆子苦醇2 mg/kg灌胃,金雀异黄酮+鸦胆子苦醇组给予30 mg/kg金雀异黄酮和鸦胆子苦醇2 mg/kg灌胃,均1次/d,连续灌胃6周。检测各组大鼠空腹血糖(FPG)水平及肾功能指标[血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)和24 h尿微量白蛋白(24h U-mAlb)],计算肾脏指数,HE染色、PAS染色、Masson染色观察肾组织形态,透射电子显微镜观察肾细胞超微结构,分光光度法检测肾组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测肾组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)含量,Western blot法检测肾组织中E2相关因子2(Nrf2)、p-Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、总核因子κB(NF-κB)、胞核NF-κB蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠FPG、SCr、BUN、24hU-mAlb水平和肾脏指数均明显升高(P均<0.05);肾小球肥大、硬化,炎性浸润,胶原沉积,肾小球细胞可见足突肿胀或消失、基底膜弥漫性增厚、线粒体嵴断裂或消失;肾组织中T-SOD、CAT活性均明显降低(P均<0.05),MDA、TNF-α、IL-1β、IL-8含量均明显升高(P均<0.05);肾组织中p-Nrf2、HO-1、NQO1蛋白相对表达量及p-Nrf2/Nrf2比值均明显降低(P均<0.05),胞核NF-κB蛋白相对表达量及胞核NF-κB/总NF-κB比值均明显升高(P均<0.05)。与模型组比较,金雀异黄酮组和金雀异黄酮+鸦胆子苦醇组大鼠FPG、SCr、BUN、24hU-mAlb水平和肾脏指数均明显降低(P均<0.05);肾组织病理改变和肾小球细胞超微结构病变均明显减轻;肾组织中T-SOD、CAT活性均明显升高(P均<0.05),MDA、TNF-α、IL-1β、IL-8含量均明显降低(P均<0.05);肾组织中p-Nrf2、HO-1、NQO1蛋白相对表达量及p-Nrf2/Nrf2比值均明显升高(P均<0.05),胞核NF-κB蛋白相对表达量及胞核NF-κB/总NF-κB比值均明显降低(P均<0.05)。鸦胆子苦醇组上述指标变化趋势与模型组相同且更加严重,鸦胆子苦醇可明显逆转金雀异黄酮对上述指标的调控作用。结论金雀异黄酮能够抑制糖尿病肾病大鼠肾组织氧化应激和炎症反应,减轻肾组织病变和肾细胞超微结构病变,其机制可能与促进Nrf2/HO-1通路活化、抑制NF-κB核转位有关。

姜黄素诱导急性高脂血症大鼠动脉核因子E2相关因子2表达

目的观察姜黄素对急性高脂血症大鼠血脂、血管内皮功能及氧化应激状态的影响,探讨其抗氧化作用与核因子E2相关因子2(Nrf2)表达水平的关系。方法将雄性SD大鼠随机分为5组,即正常对照组、高脂组、姜黄素低剂量组[125 mg/(kg·d)]、姜黄素高剂量组[250 mg/(kg·d)]、阿托伐他汀组[(2.1 mg/(kg·d)]。正常对照组、高脂组用给药溶质玉米油预处理,其他组用相应药物预处理。预处理10天后采用腹腔注射蛋黄乳液的方法建立急性高脂血症大鼠模型,腹腔注射24 h后测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)活力,同时留取主动脉组织测定丙二醛(MDA)含量及行病理学检查。结果与正常对照组比较,高脂组TC、TG、LDLC、ox-LDL、MDA和Nrf2的表达升高,SOD活力、NO含量降低。与高脂组比较,高、低剂量姜黄素组及阿托伐他汀组TC、TG、ox-LDL、MDA降低,Nrf2、SOD活力、NO含量增加。高剂量姜黄素组上述作用优于低剂量姜黄素组。结论姜黄素通过降低血脂及诱导Nrf2的表达,提高主动脉的抗氧化能力,发挥内皮保护作用。

D-GalN/LPS诱导大鼠急性肝衰竭中髓过氧化物酶和 Nrf2/HO-1信号通路的变化

目的 探讨D-氨基半乳糖(D-GalN)/脂多糖(LPS)诱导急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)大鼠中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路的变化及ALF的发生机制。方法 SD大鼠随机分为对照组和ALF组。ALF组:将D-GalN 800 mg/kg和LPS 8μg/只同时腹腔注射,于注射后6、12和24 h检测血清总胆红素(TBiL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量。ELISA法检测血清MPO、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,比色法测定MPO活性,RT-PCR检测肝组织Nrf2和HO-1的mRNA水平,Western blot法检测肝组织MPO、Nrf2和HO-1蛋白水平。结果 与对照组比较,ALF组血清MPO水平于造模后6 h升高,12 h为最高,24 h开始下降(23.33±2.06 vs.33.00±3.16,65.75±7.02,53.92±5.63,P<0.05);血清TNF-α(11.30±3.26 vs.102.17±14.80,83.33±11.22,64.25±9.29,P<0.01)和IL-6(10.83±2.92 vs.89.25±10.86,77.33±8.02,65.58±7.31,P<0.01)于造模后6 h升高最明显,12 h后逐渐下降,差异均有统计学意义。ALF组6、12、24 h肝组织MPO活性高于对照组,差异均有统计学意义(15.5±1.51,28.08±4.65,22.92±1.93 vs.12.17±1.27,P<0.05);ALF组肝组织6、12、24 h Nrf2 mRNA(1.59±0.13,3.65±0.11,2.35±0.11 vs.1.04±1.01,P<0.01)和HO-1 mRNA(2.44±0.19,4.77±0.18,3.82±0.17 vs.1.12±0.06,P<0.01)水平高于对照组,差异均有统计学意义。ALF组肝组织MPO(4.10±0.70,9.77±1.15,7.23±0.40 vs.2.07±0.42,P<0.01)、Nrf2(4.03±0.80,9.03±0.50,6.07±0.47 vs.2.63±0.38,P<0.01)和HO-1(1.73±0.21,5.17±0.51,3.03±0.32 vs.0.97±0.21,P<0.01)蛋白表达于12 h达最高值,ALF组各时间点与对照组比较均差异有统计学意义。结论 MPO可能通过氧化应激和炎症反应影响Nrf2/HO-1信号通路,在ALF中发挥重要作用。

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨脑清通颗粒对脑缺血再灌注大鼠的保护作用及机制

目的:探讨脑清通颗粒对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法:90只大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、尼莫地平6.25 mg/kg组、脑清通颗粒1.3、2.6、5.2 g/kg组,每组15只。除假手术对照组外,其余各组采用高脂饲料喂养、复合应激刺激和线栓法制备脑缺血再灌注大鼠模型。从第6 w起,假手术对照组和模型对照组用等体积生理盐水灌胃,其余各给药组用相应药物灌胃,1次/d,连续给药7 d。观察大鼠体征表现;采用神经功能评分、TTC染色及脑梗死体积测定评价脑缺血再灌注模型;尼氏染色观察神经细胞变化;ELISA法检测SOD活力和MDA含量;免疫组化法和Western blot法检测Keap1、Nrf2和HO-1的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠体征表现符合临床肝热痰瘀证基本特征,神经功能评分、脑梗死体积显著增加,大鼠血清SOD活力显著降低,MDA含量明显升高,脑组织Keap1、Nrf2、HO-1的蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,脑清通颗粒1.3、2.6、5.2 g/kg组可改善大鼠体征表现,明显降低神经功能评分和脑梗死体积(P<0.01或P<0.05),显著升高血清SOD活力,降低MDA含量,下调脑组织Keap1的蛋白表达,上调Nrf2和HO-1的蛋白表达(P<0.01)。结论:脑清通颗粒可能是通过激活Nrf2/HO-1信号通路达到对脑缺血再灌注损伤的脑保护作用。

基于p53/Nrf2信号通路探讨新加苁蓉菟丝子汤对早发性卵巢功能不全大鼠颗粒细胞铁死亡的影响

目的:探究新加苁蓉菟丝子汤(中药)对早发性卵巢功能不全(POI)模型大鼠卵巢功能的影响及调控肿瘤抑制蛋白p53(p53)/核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)通路减轻颗粒细胞铁死亡的潜在机制。方法:将48只SPF级雌性SD大鼠随机分为6组:正常组、模型组、辅酶Q_(10)组(0.002 7 g·kg^(-1))和中药低、中、高剂量组(1.1、2.2、4.4 g·kg^(-1)),每组8只。以灌胃雷公藤甲素混悬液建立POI模型大鼠,造模成功后,各组予相应药物干预14 d。称量大鼠体质量、卵巢湿重并计算卵巢指数,苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢组织形态学并计算生长卵泡及闭锁卵泡比例,酶联免疫吸附测定法检测血清卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E_(2))和抗缪勒管激素(AMH)水平,DCFH-DA荧光探针检测颗粒细胞活性氧(ROS)含量,比色法检测细胞亚铁离子(Fe^(2+))、脂质过氧化物(LPO)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物岐化酶(SOD)水平,免疫组化法和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤抑制蛋白p53、Nrf2、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠卵巢湿重、体质量及卵巢指数降低(P<0.01),卵巢组织体积缩小、生长卵泡占比减少(P<0.01),闭锁卵泡占比增多(P<0.01),血清AMH和E_(2)水平降低(P<0.01),FSH水平升高(P<0.01),颗粒细胞内Fe^(2+)、ROS、LPO及MDA含量显著增加(P<0.01),GSH和SOD含量显著降低(P<0.01),免疫组化和Western blot检测结果提示卵巢组织内p53蛋白表达增多(P<0.01),Nrf2、SLC7A11及GPX4蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,中药各剂量组大鼠体质量、卵巢湿重及卵巢指数显著升高(P<0.01),卵巢组织形态均不同程度改善,生长卵泡占比增加(P<0.01),闭锁卵泡占比减少(P<0.01),颗粒细胞内ROS含量明显降低(P<0.05,P<0.01);中药中、高剂量组血清FSH水平降低(P<0.01),E_(2)、AMH水平升高(P<0.01),颗粒细胞内Fe^(2+)含量下降(P<0.01),GSH含量上升(P<0.01);中药高剂量组颗粒细胞内LPO和MDA含量显著降低(P<0.01),SOD含量显著升高(P<0.01),免疫组化和Western blot检测结果提示卵巢组织内p53蛋白表达减少(P<0.05),Nrf2、SLC7A11及GPX4蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01)。结论:新加苁蓉菟丝子汤能保护POI模型大鼠卵巢功能,其作用机制可能与调控p53/Nrf2信号通路减轻卵巢颗粒细胞的铁死亡有关。

川芎嗪激活核因子相关因子-2 (Nrf-2)抑制高脂饮食喂养的Apo-E基因敲除小鼠的动脉粥样硬化

目的观察川芎嗪能否通过激活核因子相关因子-2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf-2)从而减轻氧化应激所致的动脉粥样硬化损伤。方法 40只雄性载脂蛋白E(apolipoprotein-E,Apo-E)基因敲除小鼠随机分为4组,分别给予普通饮食+生理盐水腹腔注射(n=10)、高脂饮食+生理盐水腹腔注射(n=10)、高脂饮食+川芎嗪每天100mg/kg体重腹腔注射(n=10)、普通饮食+川芎嗪每天100mg/kg体重腹腔注射(n=10)。每天1次,持续8周,HE染色法观察主动脉粥样硬化改变,ELISA法检测血清和主动脉组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase,GST)水平,Western blot法检测主动脉组织Nrf-2的蛋白表达,real-time PCR检测主动脉组织Nrf-2的mRNA表达。结果川芎嗪可显著降低高脂饮食喂养的Apo-E基因敲除小鼠主动脉斑块面积、内膜/中膜厚度比,增加血清和主动脉组织SOD和GST含量,增加主动脉组织中的总Nrf-2蛋白和核Nrf-2蛋白含量,增加Nrf-2mRNA相对表达量。结论川芎嗪通过促进Nrf-2mRNA的表达和核内转位,提高主动脉组织Nrf-2的因子浓度,进而促进下游各种抗氧化蛋白的表达,从而减轻氧化应激所致的动脉粥样硬化。

黄芪甲苷Ⅳ通过激活Nrf-2/HO-1信号通路抑制氧化应激介导的人SY5Y细胞凋亡

目的探讨黄芪甲苷Ⅳ(AST4)对H_(2)O_(2)诱导的人SY5Y细胞氧化应激损伤以及细胞凋亡的保护作用及机制。方法体外培养SY5Y细胞,用H_(2)O_(2)诱导建立氧化应激模型,分为PBS组、H_(2)O_(2)模型组和ASTⅣ组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞活力,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡。取各组细胞的上清液,比色法测定丙二醛(MAD)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的含量。免疫荧光细胞化学染色法检测裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)和核因子E2相关因子(Nrf-2)的表达和分布。Western blot法检测细胞凋亡蛋白B淋巴细胞瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)和ccaspase,以及氧化应激信号通路Nrf-2在胞质内和细胞核内的表达及下游蛋白血红素加氧酶1(HO-1)的蛋白水平。结果AST4对处于氧化应激损伤状态下的SY5Y细胞具有保护作用,能够减少MAD含量,增加GSH和SOD的含量。AST4增加Bcl2表达,减少BAX表达,Bc12/BAX的比值与H_(2)O_(2)模型组相比显著升高,同时抑制c-caspase的表达。AST4促进Nrf-2核转位,增加下游抗氧化蛋白HO-1的表达。结论AST4可通过激活Nrf-2/HO-1信号通路,促进Nrf-2核转位,增加HO-1的表达,调节氧化/抗氧化平衡,提高机体抗氧化水平,保护细胞免受氧化损伤和减少细胞凋亡。

阴道壁组织中TGF-β1、MMP-9、Nrf 2表达在盆底功能障碍患者中的临床意义

目的 探究阴道壁组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、核因子E-2相关因子2(Nrf 2)表达在女性盆底功能障碍(PFD)患者中的临床意义。方法 以2019年3月至2021年7月于涿州市医院就诊的92例PFD患者为研究对象,根据疾病类型将其分为盆腔器官脱垂(POP)组(35例)、压力性尿失禁(SUI)组(31例)及POP合并SUI组(26例),并以47例健康妇科检查者为对照组,比较四组TGF-β1、MMP-9、Nrf 2表达量,分析其对POP、SUI的鉴别价值;比较不同严重程度POP、SUI患者的TGF-β1、MMP-9、Nrf 2表达量,分析其与病情严重程度的相关性。结果 POP合并SUI组的TGF-β1表达量低于POP组、SUI组,MMP-9、Nrf2表达量高于POP组、SUI组,差异有统计学意义(t=7.027、4.806;11.347、8.239;7.164、4.647,P均<0.05);POP组、SUI组、POP合并SUI组的TGF-β1表达量低于对照组,MMP-9、Nrf2表达量高于对照组,差异有统计学意义(t=6.105、6.819、10.009;22.425、27.123、35.601;18.029、18.521、22.992,P均<0.05);TGF-β1、MMP-9、Nrf2表达单独检测及联合检测鉴别POP及SUI的AUC分别为0.629、0.637、0.653、0.665;TGF-β1表达随POP、SUI病情的加重而降低,MMP-9、Nrf 2表达随POP、SUI病情的加重而增高,差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β1表达与POP、SUI严重程度呈负相关(r=-0.253、-0.198,P<0.05),MMP-9、Nrf 2表达与POP、SUI严重程度呈正相关(r=0.319、0.317、0.346、0.261,P<0.05)。结论 PFD患者存在TGF-β1、MMP-9、Nrf 2异常表达现象,且各指标与病情严重程度相关,不同类型患者TGF-β1、MMP-9、Nrf 2表达水平不同,但其对PFD患者类型鉴别价值较低。

PLOD1、NFE2L3在结直肠癌组织中的表达及意义

目的:探讨前胶原赖氨酸2-氧代戊二酸5-双加氧酶1(PLOD1)、核因子E2相关因子3(NFE2L3)在结直肠癌组织中的表达及其意义。方法:前瞻性选取我院2020年9月至2021年6月收治的90例结直肠癌患者进行研究,取患者癌组织及癌旁组织,检测PLOD1、NFE2L3表达水平。随访2年,根据随访结果将患者分为2个亚组,即转移组(20例)和非转移组(70例),比较2组患者一般临床特征及PLOD1、NFE2L3表达水平,并应用Logistic回归分析PLOD1、NFE2L3对结直肠癌转移的预测价值。结果:结直肠癌组织PLOD1、NFE2L3阳性表达率及相对表达量均高于癌旁组织(P<0.05)。转移组与非转移组患者性别、年龄、身体质量指数(BMI)、肿瘤位置、肿瘤直径比较无明显差异(P>0.05),转移组与非转移组患者临床分期、组织分化程度、PLOD1及NFE2L3阳性率比较差异显著(P<0.05);对单因素分析具有统计学差异的指标进行赋值,最终Logistic回归分析结果显示,临床分期、组织分化程度、PLOD1阳性及NFE2L3阳性表达为结直肠癌转移的独立影响因素(P<0.05)。结论:结直肠癌患者癌组织中PLOD1、NFE2L3表达水平明显上调,其表达与结直肠癌的转移密切相关,可考虑将PLOD1、NFE2L3作为结直肠癌转移的分子标记物。

依达拉奉可经核因子相关因子2/抗氧化反应元件通路对帕金森病小鼠多巴胺能神经元起保护作用

目的：探讨导致多巴胺（DA）能神经元变性失活的可能机制,以及依达拉奉对核因子相关因子-2/抗氧化反应元件（Nrf2/ARE）通路的影响和对DA能神经元的保护作用.方法：采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）制备帕金森病（PD）小鼠模型,将小鼠随机分为MPTP组、依达拉奉组和对照组.对各组动物进行行为学观察,采用免疫组织化学、免疫荧光和免疫印迹,观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶（TH）、Nrf2、醌氧化还原酶1（NQO1）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的变化;并观察给予依达拉奉对上述变化的影响.结果：与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现典型PD症状.在MPTP最后一次注射后48 h黑质区TH明显减少,Nrf2、NQO1和GFAP阳性细胞明显增加,在MPTP注射后1周,黑质区TH阳性神经元丢失约75％,经依达拉奉处理后,小鼠PD症状减轻,与模型组比较,依达拉奉组在MPTP最后一次注射后48 h,黑质区Nrf2、NQO1和GFAP阳性细胞进一步增加,在MPTP注射后7d,TH阳性细胞数较对照组仅下降40％.结论：Nrf2/ARE通路在急性PD模型DA能神经元内可被激活,可能通过上调NQO1的表达对黑质DA能神经元起到保护作用;依达拉奉可活化Nrf2/ARE通路对小鼠DA能神经元起到一定保护作用.

MTA2、HIF-1α和E-cadherin在喉鳞状细胞癌组织及转染MTA2siRNA喉癌细胞中的表达观察

目的观察转移相关蛋白2(MTA2)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)和上皮钙黏蛋白(E-cadherin)在喉鳞状细胞癌(简称喉癌)组织及转染MTA2siRNA喉癌细胞中的表达变化,并探讨其临床意义。方法分别采用免疫组织化学S-P法及Western blotting法检测喉癌组织及癌旁正常喉组织中MTA2、HIF-1α、E-cadherin,分析MTA2、HIF-1α、E-cadherin与患者临床病理特征的关系及三者之间的相关性;使用脂质体Lipofectamine 2000将MTA2siRNA导入喉癌细胞系Hep-2中,观察HIF-1α、E-cadherin的表达变化。结果喉癌及癌旁正常喉组织中MTA2蛋白阳性细胞率分别为69.1%、14.3%,HIF-1α蛋白阳性细胞率分别为74.5%、11.4%,E-cadherin蛋白阳性细胞率分别为38.2%、91.4%,两种组织中MTA2、HIF-1α、E-cadherin蛋白阳性细胞率比较,P均<0.05。喉癌及癌旁正常喉组织中MTA2蛋白相对表达量分别为0.95±0.10、0.73±0.07,HIF-1α分别为1.11±0.11、0.56±0.08,E-cadherin分别为0.98±0.12、1.31±0.09,两种组织中MTA2、HIF-1α、E-cadherin蛋白相对表达量比较,P均<0.05。喉癌组织中MTA2和HIF-1α表达均与喉癌组织学分级、临床分期和淋巴结转移相关(P均<0.05);E-cadherin表达与喉癌临床分期和淋巴结转移相关(P均<0.05)。喉癌组织中,MTA2与HIF-1α蛋白表达呈正相关(r=0.512,P=0.000),与Ecadherin蛋白表达呈负相关(r=-0.608,P=0.000)。喉癌细胞系Hep-2中干扰MTA2蛋白的表达后,HIF-1α蛋白表达下调,E-cadherin蛋白表达上调。结论喉癌组织中MTA2和HIF-1α高表达,E-cadherin低表达;转染MTA2siRNA喉癌细胞中HIF-1α蛋白表达下调,E-cadherin蛋白表达上调;MTA2、HIF-1α、E-cadherin蛋白可能与喉癌的发生及转移有关,且MTA2和E-cadherin蛋白之间具有协同作用,MTA2与HIF-1α蛋白之间具有拮抗作用。

胃癌组织中NrF-2和Ho-1的表达及临床意义

目的研究胃癌组织中核因子E-2相关因子2（nuclear factor E-2 related factor,Nr F-2）和血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1,Ho-1）的表达并探讨其临床意义。方法选取从2016年2月-2016年6月,杭州市肿瘤医院病理科存档的人胃组织蜡块176例,其中胃癌78例,正常组织78例。分别采用免疫组织化学法检测2组人胃组织中Nr F-2和Ho-1的表达情况并进行分析。结果胃癌组Nr F-2和Ho-1水平分别为（0.752±0.098）、（0.862±0.081）,均显著高于正常组的（0.381±0.068）、（0.412±0.083）;Nr F-2、Ho-1阳性表达率在胃壁侵犯程度为T3＋T4、伴有淋巴结转移、NTM分期为Ⅲ、Ⅳ期胃癌组织中显著增高,上述差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论 Nr F-2和Ho-1在胃癌的发生发展中具有重要作用,且Nr F-2、Ho-1在胃癌组织中的阳性表达率与胃壁侵犯程度、有无淋巴结转移、NTM分期存在密切相关。提示了临床诊断中若联合检测Nr F-2和Ho-1,有利于对胃癌的早期诊断以及预后。

姜黄素激活Nrf2/ARE信号通路对产后抑郁症大鼠氧化应激损伤的影响

目的探究姜黄素(CUR)对产后抑郁症(PPD)大鼠氧化应激损伤的影响及作用机制。方法将50只SD大鼠随机分为假手术组、PPD组、CUR低剂量(20 mg/kg)组、CUR高剂量(40 mg/kg)组、盐酸氟西汀(10 mg/kg)组,根据激素撤停法构建PPD大鼠模型,造模成功后分别给予不同药物处理。通过蔗糖偏好实验、强迫游泳测试、旷场实验评价大鼠抑郁程度;苏木精-伊红(H-E)染色观察海马组织病理学变化;试剂盒检测大鼠海马组织活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)水平;Westernblot检测核因子E-2-相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路蛋白表达。结果与假手术组相比,PPD组大鼠海马组织结构受损,细胞排列松散,部分核固缩,蔗糖偏好度降低,游泳不动时间明显增加,旷场实验得分减少,ROS和MDA水平明显升高,SOD和GSH水平明显降低,Nrf2、HO-1蛋白水平显著降低,Keap1水平升高(均P<0.05);CUR低、高剂量组和盐酸氟西汀治疗后的PPD大鼠海马组织结构明显改善,细胞状态改善,蔗糖偏好度增加,游泳不动时间明显减少,旷场实验得分增加,氧化应激指标ROS和MDA水平明显降低,SOD和GSH水平升高,Nrf2、HO-1蛋白水平显著升高,Keap1水平下降(均P<0.05)。结论CUR可能通过激活Nrf2/ARE信号通路改善PPD大鼠氧化应激损伤,减轻PPD症状。

核因子红细胞2相关因子2在毒死蜱毒性机制中的作用

毒死蜱(chlorpyrifos,CPF)是一种广泛使用的有机磷农药,其对人类健康和生态系统的潜在风险已引起广泛关注。CPF主要通过抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)发挥杀虫作用,但越来越多的研究表明,CPF的毒性作用远不止于此,也与氧化应激、炎症反应、细胞死亡等多种生物学过程密切相关,因而可能导致神经退行性疾病、生殖发育障碍以及其他慢性健康问题。核因子红细胞2相关因子2(Nrf 2)作为一种关键的抗氧化应激调节因子,具有显著的保护作用。本文旨在综述Nrf 2在调节CPF诱导的氧化应激、神经毒性、细胞死亡和炎症反应中的作用机制,探讨其作为潜在治疗靶点的前景,以为开发新的CPF中毒治疗策略提供理论基础。

磷酸锰铁锂通过Keap1/Nrf 2信号通路影响雄性小鼠生殖系统

目的探讨磷酸锰铁锂(LiMnFePO_(4))可否通过Keap1/Nrf 2信号通路影响雄性小鼠的生殖系统。方法将18只8周龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组和低、高剂量(5、50 mg/kg)LiMnFePO_(4)组,每组6只,灌胃染毒6周处死。取出睾丸,称取小鼠体质量并计算睾丸和附睾脏器系数、精子计数和精子畸形率,检测小鼠睾丸组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性水平,观察睾丸组织形态,测定小鼠睾丸组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)和核因子红细胞2相关因子2(Nrf 2)、血红素氧合酶1(HO-1)的蛋白和mRNA表达水平。结果LiMnFePO_(4)暴露对小鼠体质量、睾丸和附睾脏器系数影响差异无统计学意义;LiMnFePO_(4)染毒小鼠睾丸组织SOD活性水平降低,MDA水平升高;小鼠睾丸组织Keap1的蛋白和mRNA表达水平升高,HO-1的蛋白和mRNA表达水平降低,Nrf 2的蛋白表达水平降低、mRNA表达水平升高;高剂量LiMnFePO_(4)染毒小鼠睾丸组织精子计数减少,精子畸形率上升,睾丸曲细精管皱缩,管内精细胞减少、排列混乱,睾丸间质细胞增生。结论LiMnFePO_(4)可能通过Keap1/Nrf 2信号通路影响小鼠睾丸组织氧化应激状况,导致雄性小鼠生殖毒性。

Nrf2和HO_1在肾癌组织中的表达及意义

目的:探讨肾癌组织Nrf2和HO_1表达水平变化及其临床意义。方法:选择经手术切除肾癌组织标本42例及正常肾组织42例作为研究对象,42例患者均未接受化疗或者放疗,采取免疫组织化SABC法测定Nrf2和HO_1表达水平,并进行统计学分析。结果:Nrf2及HO_1于肾癌组织及正常肾组织均有不同程度表达,且主要表达于肿瘤细胞胞浆,肾癌组中Nrf2阳性35例(83.3%),显著高于正常肾组织14例(33.3%),差异具有统计学意义,P<0.05。肾癌组HO_1表达阳性31例(73.8),显著高于正常肾组织组15例(35.7),差异具有统计学意义,P<0.05。肾癌组织Nrf2和HO_1表达水平成正相关,r=0.536。结论:肾癌组织Nrf2和HO_1表达水平较正常组织更高,且两者之间呈正相关,表明Nrf2和HO_1在肾癌进展中起着重要作用。

白花丹素调控Nrf-2/Keap1信号通路诱导膀胱癌细胞铁死亡

目的:探讨白花丹素作为一种新型的铁死亡诱导剂在膀胱癌抑制中的作用机制。方法:本研究中使用了膀胱癌细胞T24。采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测白花丹素(0.1、1、2、3、6、12、24、48μmol·L^(-1))对T24细胞活力的影响。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V FITC/PI)凋亡试剂盒检测白花丹素(1.5、3、6μmol·L^(-1))对T24细胞凋亡的影响。采用不同的抑制剂(铁死亡抑制剂Fer-1,凋亡抑制剂VAD,坏死性凋亡抑制剂Nec-1)与白花丹素(6μmol·L^(-1))联合使用。采用活性氧荧光探针(DCFH-DA),丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)试剂盒分别检测不同浓度的白花丹素(1.5、3、6μmol·L^(-1))对T24细胞内活性氧水平,MDA和GSH的含量,脂质过氧化荧光探针(C11-BODIPY)荧光探针检测白花丹素(1.5、3、6μmol·L^(-1))对T24细胞中过氧化物水平的影响。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测白花丹素(1.5、3、6μmol·L^(-1))细胞中溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化酶(GPX4)、核因子E2相关因子-2(Nrf-2)和Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)的蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,白花丹素组T24细胞的活性明显降低(P<0.05),IC50为3.52μmol·L^(-1)。与空白组比较,白花丹素组(1.5、3、6μmol·L^(-1))T24细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与单独使用6μmol·L^(-1)的白花丹素组比较,铁死亡抑制剂和凋亡抑制剂组能够逆转6μmol·L^(-1)的白花丹素对T24细胞增殖抑制作用(P<0.05)。与空白组比较,白花丹素组(1.5、3、6μmol·L^(-1)),T24细胞ROS、MDA及脂质过氧化物的含量明显升高,GSH水平明显降低,铁死亡相关蛋白SLC7A11、GPX4以及Nrf-2/Keap1明显降低(P<0.05)。结论:白花丹素能诱导细胞铁死亡,其机制与Nrf-2/Keap1信号通路有关。

三七总皂苷对冠心病大鼠心肌的保护作用

目的 观察三七总皂苷(PNS)对冠心病(CHD)大鼠心肌损伤的保护作用,探究其作用机制。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、PNS组、PNS+ML-385(Nrf-2抑制剂)组和ML-385组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠用高脂饲料喂养联合垂体后叶注射液腹腔注射建立CHD模型。连续给药治疗4周后,观察心肌组织损伤,检测血脂水平、心肌损伤指标、炎性因子及氧化应激因子的水平,RT-qPCR检测心肌半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA水平,Western blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf-2)和血红素加氧酶-1(HO-1)表达情况的改变。结果 与对照组比较,模型组大鼠心肌损伤明显,血脂水平异常,血清心肌损伤指标及炎性因子水平显著升高,氧化应激反应加重,心肌组织Caspase-3和Bax mRNA表达增加,Bcl-2 mRNA表达降低,Nrf2和HO-1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与模型组比较,PNS可减轻CHD大鼠心肌损伤,调整血脂水平,减轻炎症和氧化应激反应,心肌组织Caspase-3和Bax mRNA表达降低,Bcl-2 mRNA表达增加,Nrf2和HO-1蛋白表达水平增加,而Nrf-2抑制剂ML-385可显著减弱PNS对CHD的治疗作用,抑制Nrf-2/HO-1信号通路的激活(P<0.05)。结论 PNS能够改善CHD大鼠心肌损伤,其机制可能与调控Nrf-2/HO-1信号通路的激活有关。