微RNA-132-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡

目的 研究微RNA(miR)-132-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡中的作用及其作用机制。方法 该研究起止时间为2018年2月至2019年7月。定量聚合酶链反应(qPCR)检测正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19和葡萄膜黑色素瘤细胞SP6.5、M23中miR-132-3p表达。SP6.5细胞中转染miR-132-3p干扰质粒(anti-miR-132-3p)、第10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)过表达质粒(pcDNA3.1-PTEN)或共转染anti-miR-132-3p和PTEN干扰质粒(si-PTEN),MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法检测PTEN、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,生物信息学预测结合双萤光素酶报告实验分析miR-132-3p与PTEN的靶向关系。结果 与ARPE-19细胞相比,SP6.5、M23细胞中miR-132-3p表达量(0.26±0.02比0.94±0.09、0.81±0.08)明显升高(P<0.05)。与anti-miR-132-3p阴性对照(anti-miR-NC)组相比,anti-miR-132-3p组24 h、48 h、72 h的细胞活性(0.51±0.05比0.30±0.03、0.97±0.09比0.45±0.05、1.40±0.14比0.76±0.07)、cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量显著降低(P<0.05),细胞凋亡率[(8.03±0.68)%比(21.51±2.06)%]、P21、Bax水平明显提高(P<0.05),与过表达PTEN相同。miR-132-3p与PTEN之间有靶向调控关系。抑制PTEN能逆转抑制miR-132-3p对SP6.5细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用。结论 miR-132-3p通过直接靶向PTEN调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡。

光活化的金丝桃素对人前列腺癌细胞PC3M的生长抑制作用

目的 :探讨光活化的金丝桃素对人前列腺癌细胞 PC3M的抑癌作用。方法 :用生长抑制试验和流式细胞技术观察给予金丝桃素后 PC3M细胞的增殖、细胞周期和凋亡的变化。结果 :不同浓度的金丝桃素在体外可显著抑制 PC3M细胞增殖 (P<0 .0 5 ) ,药物浓度为 0 .5、 1 .0和 2 .0 m g· L- 1 时 ,抑制率分别为 2 1 %、 5 0 %和 91 % ;细胞周期出现 S期阻滞 ,由 S期进入 M2 期的比例为零 ,并诱导 PC3M细胞凋亡。结论

瘦素在结肠癌的表达及意义

目的观察血清瘦素(leptin)在结肠癌患者中的变化及其意义。方法研究分结肠癌组(40例)、溃疡性结肠炎组(30例)及正常对照组(40例),采用全自动生化分析仪检测各组血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)等生化指标并应用放射免疫分析法及ELISA法检测血清瘦素、癌胚抗原(CEA)及血管内皮生长因子(VEGF)。结果与正常对照组比,结肠癌组血清TC、TG、瘦素、CEA、VEGF含量升高(P<0.05),溃疡性结肠炎组血清TG、瘦素含量升高(P<0.05);与结肠癌组比,溃疡性结肠炎组血清瘦素、CEA、VEGF含量降低(P<0.05),TC、TG含量无明显改变。血清瘦素与TC、TG、VEGF呈正相关,而与CEA无相关性。结论血清瘦素可能通过VEGF发挥其对结肠癌的促进作用。

β-榄香烯对肺腺癌A549和H460细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨β-榄香烯对肺腺癌A549和H460细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用不同浓度的β-榄香烯干预A549和H460细胞后,台盼蓝拒染试验和MTT试验检测肿瘤细胞的增殖,流式细胞术检测A549细胞凋亡率,Western Blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果:不同浓度β-榄香烯能抑制肺腺癌A549和H460细胞的增殖,且呈剂量与时间依赖性,β-榄香烯干预后的A549细胞凋亡率明显升高,其相关抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl表达下调。结论:β-榄香烯可抑制肺腺癌A549和H460细胞的增殖及诱导其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2和Bcl-xl有关。

原发性乳腺癌HER2过表达与钼靶影像学及临床特征相关性研究

目的:研究人类表皮生长因子受体HER2过表达在乳腺癌诊断中的价值及其与钼靶影像学特征及临床病理特征的关系。方法:收集乳腺癌患者500例,其中HER2过表达(HER-2^+)型78例,HER2无过表达(HER-2^-)型422例,比较两组患者的钼靶影像学表现和临床病理特征。结果:HER-2^+乳腺癌组与HER-2^-组比较,具有较高的病理组织学分级(P<0.001)。HER-2^+乳腺癌组更多表现为淋巴结阳性(P<0.001);钼靶X线检查两组差异具有统计学意义(P<0.001),其中单纯钙化肿物特征HER-2^+乳腺癌组(46.2%)与HER-2^-组(11.9%)比较差异具有统计学意义(P<0.001);HER-2^+乳腺癌组(42.5%)多表现为分叶状肿物,与HER-2^-组(13.4%)具有统计学意义(P<0.001);HER-2^-组(30.5%)多发现为椭圆形肿物,较HER-2^+乳腺癌组(17.5%)具有统计学意义(P<0.05);HER-2^+乳腺癌组与HER-2^-组肿物边缘组间比较具有统计学差异(P<0.001),HER-2^+乳腺癌组(57.5%)较多变现为毛刺,较HER-2^-组(37.3%)具有统计学差异(P<0.05);HER-2^-组(19.1%)较HER-2^+乳腺癌组光滑程度具有统计学差异(P<0.05),钙化形态HER-2^+乳腺癌组(89.8%)更多表现为恶性钙化,较HER-2^-组(68.5%)具有统计学差异。结论:不同类型的乳腺癌有不同的生物学特征,其钼靶影像学表现也不尽相同,了解HER-2^+乳腺癌组乳腺癌的钼影像学特征,可预测乳腺癌这亚型及相关类型和患者的预后,以及评估患者对各种治疗方法的敏感性。

NDRG4通过Wnt/β-catenin信号转导通路抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力

目的探讨N-myc downstream regulated gene 4(NDRG4)对卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力的影响及其分子机制。方法应用脂质体转染法将NDRG4过表达载体pcDNA3.1-NDRG4质粒(pcDNA3.1-NDRG4质粒组)和空白pcDNA3.1质粒(空白质粒组)转染至SKOV3细胞中。采用实时荧光定量PCR和Western blot法验证NDRG4过表达效果,应用transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力的变化,Western blot法检测卵巢癌细胞中上皮间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)以及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白(β-catenin和c-myc)的表达水平。结果转染48 h后,与空白质粒组比较,pcDNA3.1-NDRG4质粒组细胞迁移和侵袭能力均下降(P=0.006,P=0.023)。转染72 h后,与空白质粒组比较,pcDNA3.1-NDRG4质粒组E-cadherin表达水平上升(P=0.023),N-cadherin和Vimentin的表达水平均下降(P=0.013,P=0.021)。转染72 h后,与空白质粒组比较,pcDNA3.1-NDRG4质粒组β-catenin和c-myc的表达水平均下降(P=0.035,P=0.006)。结论NDRG4蛋白抑制卵巢癌细胞迁移和侵袭能力,并抑制上皮间质转化过程。该作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin细胞信号通路实现。

凝血功能与非小细胞肺癌相关机制研究进展

近来研究越来越多地发现凝血功能紊乱通常是恶性肿瘤的首发迹象。现在已经证实,肿瘤导致血栓形成的风险增加,而凝血功能的过度激活也极大地影响肿瘤的进展。在肺癌患者中,存在着持续的凝血刺激。癌细胞通过组织因子(tissuefactor,TF)的表达激活凝血功能;通过凝血酶的表达和促凝血微粒的释放等影响凝血功能。凝血功能也通过介导血小板释放其颗粒内容物、抑制自然杀伤细胞和募集巨噬细胞而促进肿瘤的进展。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占肺癌的80%-85%,本文就凝血系统各个组分在NSCLC发生发展中的病理生理学机制的最新研究进展进行综述。

从眼科病理学角度深入认识眼内肿瘤

眼科病理学是组织病理学的重要分支，对于深入认识和揭示眼部疾病发挥着重要作用。眼科临床上常见的、严重影响人生存质量的原发性眼内恶性肿瘤是视网膜母细胞瘤（RB）和葡萄膜黑色素瘤（UM），其中RB是婴幼儿常见的原发性眼内恶性肿瘤，而UM是成年人常见的原发性眼内恶性肿瘤。研究表明，RB患者中，大约2／3是由散发的体细胞Rbl基因突变引起的，另外约1／3的RB是由生殖细胞Rbl基因突变引起的，而RB的生物学研究提示，后者发生年龄早，通常为双眼发病，有遗传性。RB高危病理因素主要包括筛板后视神经受侵和／或大范围脉络膜受累，治疗过程中也是术后辅助化学疗法的重要指征。UM缺乏有效的全身治疗措施，最终约有一半患者死于肿瘤的远处转移，多数为肝脏转移。UM预后不良与肿瘤大小、睫状体受累、上皮样细胞型、眼外扩散等有关，单体型染色体3和2类基因表达谱是目前最准确和客观的UM预后指标。

波形蛋白在肾细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究波形蛋白(v im entin)在肾细胞癌组织中的表达,从细胞骨架蛋白角度阐述肾细胞癌侵袭转移的可能机制。方法:应用W estern印迹法检测52例肾细胞癌组织及26例癌旁正常肾组织中v im entin的表达差异情况,并分析其与肾细胞癌分级、分期之间的关系。结果:肾细胞癌组织中v im entin的表达阳性率显著高于癌旁正常肾组织。对v im entin蛋白条带的灰度值分析显示,v im entin的相对表达水平与肾细胞癌的分级与分期均显著相关,随着肾细胞癌分级、分期水平的增高,其相对表达量也逐渐增多。结论:v im entin可能在肾细胞癌的进展和转移过程中发挥重要作用,并可能为早期监测肾细胞癌发生及判断预后提供依据。

miR-421靶向抑制caspase-3表达调控BGC-823胃癌细胞的迁移与凋亡

目的探讨miR-421调控BGC-823胃癌细胞迁移及凋亡的分子机制。方法生物信息学方法分析miR-421的靶基因,Western blot分析miR-421靶标caspase-3蛋白在BGC-823细胞中的表达。Negative miRNA、miR-421 mimics及miR-421 inhibitors分别转染BGC-823细胞后模拟或抑制miR-421的表达,另设空白对照组。流式细胞仪检测BGC-823细胞经siRNA转染后的细胞凋亡情况,Transwell小室检测细胞转染后的迁移能力。结果miRNA靶基因预测软件获得7个重要的miR-421靶基因。Caspase-3蛋白在miR-421 inhibitors转染细胞中表达增强(P<0.05),miR-421 inhibitors转染的BGC-823细胞凋亡明显增多并且迁移能力受到明显抑制(均P<0.05)。结论 miR-421通过靶向作用于caspase-3基因影响caspase-3的信号通路,促进BGC-823胃癌细胞的迁移并抑制其凋亡。

热疗联合5-氟尿嘧啶对胃癌MKN45细胞抑制作用机制研究

目的:探讨5-氟尿嘧啶(5-Fu)温热化疗对人低分化胃癌细胞(MKN45细胞)抑制的分子作用机制。方法:以MTT法测定MKN45细胞48h的IC50作为实验工作浓度,实验分对照组(C)、热疗组(H)、化疗组(D)、热化疗组(HD),检测细胞抑制率;应用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)观察表皮生长因子受体EGFR与原癌基因RAS mRNA的表达变化。结果:热、化疗均可抑制MKN45细胞系(P<0.05),热化疗抑制作用更明显(P<0.05);RT-PCR分析显示,热化疗组EGFRmRNA与RASmRNA表达下调最明显(P<0.05)。EGFR mRNA与RAS mRNA的表达呈明显的正相关性(r=0.870,P<0.05),细胞抑制率与EGFRmRNA表达水平间存在负相关关系(r=-0.956,P<0.05),细胞抑制率与RASmRNA表达水平间存在负相关关系(r=-0.923,P<0.05)。结论:化疗联合热疗能显著增加对MKN45细胞的体外抑制作用,其机制可能与下调EGFR与RAS的表达及二者相互作用有关。

长链非编码RNA RP11-770J1.3和跨膜蛋白25对紫杉醇耐药人乳腺癌细胞株耐药性的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)RP11-770J1.3和跨膜蛋白25(TMEM25)对紫杉醇耐药人乳腺癌细胞株耐药性的影响。方法:利用实时定量PCR检测lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25在人乳腺癌细胞MCF-7和紫杉醇耐药细胞株(MCF-7/PR)中的表达。在MCF-7/PR中转染lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25的干扰片段,磺酰罗丹明B法检测MCF-7/PR对紫杉醇药物敏感性的变化,并运用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测多药耐药相关蛋白(MRP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、多药耐药基因1(MDR1)及其编码产物P-gp mRNA和蛋白水平的改变。结果:lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25在MCF-7/PR中表达上调(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组和紫杉醇阴性对照组比较,干扰lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25的表达可以提高MCF-7/PR对紫杉醇的药物敏感性,并下调耐药相关基因MRP、BCRP、MDR1及其编码产物P-gp的表达(均P<0.05);与单独干扰lncRNA RP11-770J1.3或TMEM25比较,同时干扰lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25的作用更加明显(P<0.05)。结论:MCF-7/PR中lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25的表达上调,联合干扰lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25的表达可以提高MCF-7/PR对紫杉醇的敏感性。

乳腺浸润性导管癌血管内皮生长因子和雌激素、孕激素受体的表达及意义

目的 :探讨在乳腺浸润性导管癌组织中血管内皮生长因子 ( VEGF)和雌、孕激素受体 ( ER、PR)的表达及临床意义。方法 :应用免疫组化法检测 5 0例乳腺浸润性导管癌和2 6例良性乳腺肿瘤组织中 VEGF、ER、PR的表达水平 ,并分析它们的临床生物学意义。结果 :乳腺癌 VEGF阳性表达率为 66% ,与对照组比较差异有统计学意义 ;VEGF表达与组织分化程度有密切关系。在 ER、PR阴性组中 ,VEGF阳性表达率较高。结论 :VEGF在乳腺浸润性导管癌组织中的高表达 ,与乳腺癌的生长和转移有密切关系 ,可以作为反映乳腺癌生物学行为和判断预后的有效指标。

活血化瘀中药抗肿瘤血行转移的思路探讨

分析活血化瘀方药对恶性肿瘤血行转移的具体作用及其可能机制。活血化瘀方药可以改善肿瘤患者血液高粘状态，防止肿瘤栓子的形成，对脱离原发瘤并移行进入血液循环的肿瘤细胞有直接或间接的抑杀作用，能够防治恶性肿瘤的血行转移。肿瘤转移异常复杂，涉及到许多因素，但按中医辨证论治的原则，具体分析肿瘤发展不同阶段血瘀证候证型的变化特点，正确选用活血化瘀方药，可以获得满意的疗效，取得一致的研究结论。

RNA干扰沉默DJ-1基因对Hep-2细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的：观察沉默DJ-1基因对人喉癌Hep-2细胞株裸鼠移植瘤的作用及其机制。方法：建立人喉癌Hep-2裸鼠移植瘤模型，24只裸鼠随机分为三组（每组8只）：对照组（5％葡萄糖溶液）、小剂量组（20μg 的DJ-1基因特异性小干扰RNA）、大剂量组（40μg的DJ-1基因特异性小干扰RNA）。各组瘤体内分别注射相应液体50μL，2次／周，共6次，每次测量瘤体质量及大小。停药后48 h脱颈椎法处死裸鼠，剥离瘤体，测瘤体质量，计算抑瘤率。采用免疫组织化学法分别检测剥离瘤体组织Caspase-3、Ki-67的表达情况；实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测各组移植瘤 DJ-1、PTEN、survivin 基因和蛋白的表达。结果：小剂量组[（0．66±0．15） g]和大剂量组[（0．48±0．11） g]的瘤体质量均小于对照组[（0．83±0．16）g，均P ＜0．05]，且抑瘤率分别为（20．48±0．18）％和（42．16±0．13）％。小剂量组和大剂量组Caspase-3表达增高， Ki-67表达减少，与对照组差异均有统计学意义（均P ＜0．05）；与对照组比较，小剂量组和大剂量组DJ-1、survivin的mRNA和蛋白表达均减少（均P＜0．05），而PTEN的mRNA和蛋白表达均增加（均P＜0．05）。结论：大剂量的DJ-1小干扰RNA可能通过下调DJ-1和促进PTEN的表达，从而阻断PI3 K-PKB／Akt信号通路并调节survivin表达来促进肿瘤细胞凋亡，抑制人喉癌Hep-2裸鼠移植瘤的生长。

半球形与扁平形葡萄膜转移瘤MRI征象对比研究

目的 对比分析半球形与扁平形葡萄膜转移癌的MRI征象,探讨MRI对不同形态葡萄膜转移癌的诊断价值。方法 回顾性收集北京同仁医院2005~2015年经手术病理或临床综合诊断确诊的眼葡萄膜转移癌49例,平均年龄(52.5±12.3)岁,其中男性19例,女性30例,左眼26例,右眼21例,双眼2例,根据病变形态分为扁平形组(36例)和半球形组(13例)。比较两组临床表现及MRI征象,包括患者年龄、性别、肿块侧别、部位、形态、边缘、是否伴发视网膜脱离、T1WI和T2WI信号(与脑灰质相比)、T1WI和T2WI信号均匀度、强化程度、强化均匀度、强化指数、肿块高度、基底径、基底径与高度比值,计数资料采用Pearson卡方检验,计量资料采用独立样本秩和检验。结果 肿块T1WI信号均匀度、增强程度、强化指数在两组间均有显著差异﹙x^2=4.491、5.026、5.914,P=0.034、0.025、0.015),患者性别、侧别、肿块部位、形态、边缘、是否伴发视网膜脱离、T1WI和T2WI信号(与脑灰质相比)、T2WI信号均匀度均无显著性差异(P>0.05),基底径与高度比值在扁平形组(0.8~11.3mm,中位数2.9mm)和半球形组(1.0~6.0mm,中位数2.0mm)两组间均有显著差异(Z=-1.998,P=0.046),患者年龄、肿块高度、基底径均无显著性差异(P>0.05)。结论 半球形与扁平形葡萄膜转移癌的MRI征象存在一定差异,半球形葡萄膜转移癌仍具备多数葡萄膜转移癌T1WI、T2WI多呈等信号的特点,MRI对葡萄膜转移癌具有重要价值。

原发性肝癌凝血功能变化的临床价值

目的 :探讨原发性肝癌患者凝血功能变化情况及其临床价值。方法 :对原发性肝癌 6 0例进行凝血酶原时间 (PT)、活化部分凝血酶原时间 (APTT)、纤维蛋白原 (FIB)、凝血酶时间 (TT) 4项凝血指标进行检测和对比分析。结果 :原发性肝癌组与对照组相比 ,PT、APTT、TT均显著延长 P<0 .0 1,FIB明显降低 P<0 .0 5 ,肝癌并发症组与无并发症组相比 ,PT、APTT均显著延长 P<0 .0 1,P<0 .0 5 ,FIB显著降低 P<0 .0 1;原发性肝癌转移组与无转移组相比 ,PT、APTT明显延长 P<0 .0 5 ,FIB显著降低 P<0 .0 5。不同肝功能分级检测结果显示 PT、APTT和 FIB有显著差别。结论 :原发性肝癌患者可出现凝血功能障碍 ,而凝血功能变化情况对评估肝癌肝损害的程度、监测病情变化 ,指导临床治疗及其预后具有一定的应用价值。

siRNA表达载体对hTERT基因的效应评价

目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA干扰表达载体,探讨其对人乳腺癌MCF-7细胞生长及其hTERT基因表达的影响。方法:设计针对hTERT基因的干扰靶序列并构建重组siRNA表达载体pGenesil-hTERT。酶切测序鉴定后,脂质体转染MCF-7细胞,应用RT-PCR和Weston Blot法检测hTERT基因的表达情况,应用流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:酶切电泳测序分析表明插入序列正确,重组质粒构建成功,且转染MCF-7细胞后,hTERT mRNA和蛋白质表达水平显著抑制,细胞凋亡率较对照组明显升高(P<0.01)。结论:以DNA质粒为载体的siRNA能有效抑制hTERT基因的表达,进而抑制乳腺癌MCF-7细胞生长、促进细胞凋亡。

恶性血液病患者81例血清EPO、TPO的联合测定及意义

目的探讨恶性血液病患者血清红细胞生成素(EPO)、血小板生成素(TPO)水平与血红蛋白,红细胞数及血小板数的关系及其意义。方法采用夹心酶联免疫法测定81例恶性血液病患者及28例健康人血清EPO、TPO,同时检测其红细胞数、血红蛋白、血小板数。结果恶性血液病病人血清EPO水平较正常组显著增高,各组病人血清EPO水平均与Hb、RBC呈负相关。急性白血病、慢性白血病、淋巴瘤血清TPO水平高于正常组,多发性骨髓瘤血清TPO水平低于对照组;急性白血病、淋巴瘤TPO水平与PLT呈负相关,慢性白血病、多发性骨髓瘤TPO水平与PLT数不相关。结论恶性血液病血清EPO、TPO水平较正常明显增高,且与Hb,PLT呈负相关。对于某些恶性血液病病人的贫血、血小板减少,使用rhEPO、rhTPO治疗可能有效。