经α-半乳糖酰基鞘氨醇体外扩增Vα24自然杀伤T细胞的生物学特性

目的建立α-半乳糖酰基鞘氨醇(α-GalCer)诱导Vα24自然杀伤T(NKT)细胞体外扩增方法,评价其生物学特性。方法将26份脐带血或外周血标本分为3组:A1组(n=5):脐带血单个核细胞(MNC)在负载α-GalCer的脐带血前体细胞源性树突状细胞(DC)刺激下诱导扩增Vα24NKT细胞;A2组(n=5):外周血MNC在负载α-GalCer的外周血单核细胞来源DC(Mo-DC)刺激下诱导扩增Vα24NKT细胞;B组(n=16):在外周血MNC中直接添加α-GalCer,诱导扩增其中的Vα24NKT细胞。采用MTT法检测NKT细胞增殖能力、肿瘤细胞杀伤活性和混合淋巴细胞反应抑制能力,ELISA法测定IL-4和干扰素(IFN)-γ生成。结果A1、A2和B组NKT细胞扩增倍数分别为128(95～207)、250.5(179.6～790.6)和326(101～2136)倍,B组扩增效果明显优于A1组(P=0.038)。NKT细胞在佛波酯刺激下,3d刺激指数为1.80±0.41;脐血或外周血NKT细胞24h分泌IL-4/IFN-γ比值为0.30±0.13和0.28±0.18;能杀伤HL60、KG1a和Raji细胞,对K562细胞无效;NKT细胞及其培养上清均能抑制混合淋巴细胞反应。结论α-GalCer能在短期内大量扩增Vα24NKT细胞。扩增细胞能大量分泌IL-4和IFN-γ,杀伤肿瘤细胞系,并抑制T细胞同种免疫应答。

晚期血吸虫病患者外周血Vα24自然杀伤T细胞的变化及其与肝纤维化程度的关系

目的探讨晚期血吸虫病患者外周血Vα24自然杀伤T细胞(NKT)数量变化及其与肝纤维化程度的关系。方法采集32例晚期血吸虫病患者和23位健康体检者(对照组)静脉血各3 ml,采用流式细胞术检测外周血Vα24 NKT细胞的比例,采用酶循环法检测肝功能相关指标,同时行腹部B超检查。分析Vα24 NKT细胞比例与肝功能指标和肝纤维化程度的相关性。结果流式细胞术检测结果显示,晚期血吸虫病患者外周血Vα24 NKT细胞比例为(0.23±0.09)%,较健康对照组[(1.44±0.62)%]明显降低(P<0.01)。肝功能检测结果显示,晚期血吸虫病患者丙氨酸转氨酶(ALT)、谷酰转肽酶(γ-GT)和总胆红素(Tbil)分别为(44.78±33.42)U/L、(68.75±57.95)U/L和(20.16±11.20)μmol/L,较健康对照组[(18.77±14.19)U/L、(20.20±13.82)U/L和(11.65±5.09)μmol/L]明显增高(P<0.01,P<0.01,P<0.05);相关性分析结果显示,晚期血吸虫病患者NKT细胞比例与γ-GT呈正相关(r=0.365,P<0.05),而与ALT、天冬氨酸转氨酶(AST)、直接胆红素、碱性磷酸酶、白蛋白和白球比值等无明显相关性(P>0.05)。B超结果显示,肝纤维化Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级的晚期血吸虫病患者分别有5、11和16例,各级的Vα24 NKT细胞比例分别为(0.37±0.02)%、(0.28±0.04)%和(0.15±0.03)%,且各级间差异均有统计学意义(P<0.01);相关性分析结果显示,NKT细胞比例与肝纤维化程度呈负相关性(r=-0.91,P<0.01)。结论晚期血吸虫病患者外周血Vα24 NKT细胞数量明显降低,并随肝纤维化程度加重而减少。

晚期血吸虫病患者外周血中Vα24自然杀伤T细胞水平观察

目的:分析晚期血吸虫病患者外周血中Vα24自然杀伤T细胞水平。方法:选取笔者所在医院45例健康体检者设为对照组,45例晚期血吸虫病患者设为观察组。采用流式细胞术检测患者外周血细胞中的Vα24 NKT细胞在T淋巴细胞中的比例。检测两组肝功能指标,分析Vα24 NKT与肝功能的相关性。结果:观察组患者NKT细胞水平为(0.15±0.01)%,显著低于对照组的(0.84±0.21)%,差异有统计学意义(P<0.01)。两组各肝功能指标比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。相关性分析显示,NKT细胞在晚期血吸虫病患者外周血Vα24中与γ-GT呈正相关(r=0.371,P<0.05),而Vα24 NKT细胞与ALT、AST、ALP、TBIL、ALB、A/G无相关性(r=-0.001、-0.178、0.023、-0.101、0.026、0.031,P>0.05)。结论:晚期血吸虫患者外围血中Vα24 NKT细胞明显减少,Vα24 NKT细胞与γ-GT呈正相关,与ALT、AST、ALP、TBIL、ALB及A/G无相关性。

结外自然杀伤/T细胞淋巴瘤的治疗研究进展

结外自然杀伤/T细胞淋巴瘤(ENKTCL)是一种少见的与EB病毒感染相关的恶性肿瘤,具有较强的侵袭性。目前,对于晚期或复发/难治性ENKTCL,常规推荐使用含左旋门冬酰胺酶的非蒽环类药物联合其他药物进行化学治疗,但长期生存率仍较低。近年来,造血干细胞移植、免疫治疗和靶向治疗受到了广泛关注,为ENKTCL的治疗提供了新的选择。本文就造血干细胞移植、免疫治疗和靶向治疗在ENKTCL治疗中的应用进展进行综述。

CD3^(+)和CD4^(+)与CD8^(+)T细胞亚群及自然杀伤细胞的表达对治疗结核病的临床研究

目的探讨CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T细胞亚群及自然杀伤细胞(NK)的表达对治疗肺结核病的临床研究。方法选取2020年6—11月萍乡市第二人民医院收治的活动性肺结核患者(结核组)、结核潜伏感染者(结核潜伏感染组)、健康对照者(健康对照组)作为研究对象,每组30例。采用流式细胞术检查3组CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、NK细胞计数与百分比情况。结果结核组CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、NK细胞计数水平均低于结核潜伏感染组、健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);结核潜伏感染组CD3^(+)CD4^(+)、NK细胞计数水平均高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);健康对照组与结核潜伏感染组CD3^(+)、CD3^(+)CD8^(+)细胞计数水平比较差异无统计学意义。3组CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、NK细胞百分比情况比较差异无统计学意义;结核组CD3^(+)细胞百分比水平低于健康对照组、结核潜伏感染组,差异有统计学意义(P<0.05);结核潜伏感染组CD3^(+)百分比水平与健康对照组比较差异无统计学意义。结核组复诊时CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、NK细胞计数水平高于初诊时,差异有统计学意义(P<0.05);结核组复诊时CD3^(+)、NK细胞计数水平低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);结核组复诊时CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)与健康对照组比较差异无统计学意义;结核潜伏感染组复诊时CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、NK细胞计数水平低于初诊时,差异有统计学意义(P<0.05),CD3^(+)CD8^(+)与初诊时比较差异无统计学意义;健康对照组、结核潜伏感染组复诊时CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、NK细胞计数水平比较差异无统计学意义。结核组复诊时CD3^(+)细胞百分比水平低于初诊时,差异有统计学意义(P<0.05);其他组内组间各指标两两比较差异无统计学意义。结论肺结核、肺结核潜伏期患者存在T细胞亚群及NK细胞表达异常情况,可结合各指标变化情况进行治疗指导及预后评估。

表现为食管溃疡的结外自然杀伤/T细胞淋巴瘤1例并文献复习

本文回顾性分析1例表现为食管溃疡的结外自然杀伤/T细胞淋巴瘤患者的病例资料及诊治经过,并结合相关文献进行分析讨论,以期为此类患者的诊断治疗提供参考。该例患者入院后完善胃镜提示食管多发溃疡,黏膜活检病理结果确诊为结外自然杀伤/T细胞淋巴瘤,予以培门冬酶+吉西他滨+奥沙利铂方案治疗。患者经过5个化疗疗程后再次复查胃镜未见食管溃疡,黏膜活检未见异型细胞,提示完全缓解。

晚期血吸虫病患者外周血中Vα24自然杀伤T细胞水平观察

目的探讨晚期血吸虫病患者外周血中Vα24自然杀伤T细胞(NKT)水平及其与肝纤维化的关系。方法采用流式细胞术,检测41例晚期血吸虫病患者和48例健康体检者(对照组)外周血中的Vα24 NKT细胞占T淋巴细胞的比例;同时对晚期血吸虫病患者进行腹部超声检查,根据超声检查结果进行肝纤维化分级,比较各级间NKT细胞水平。结果 41例晚期血吸虫病患者的NKT细胞平均水平为(0.25±0.10)%,较健康对照组[(1.32±0.56)%]明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。晚期血吸虫病患者肝纤维化越严重,NKT细胞减少越明显,1级、2级、3级患者NKT细胞水平分别为(0.38±0.03)%、(0.29±0.04)%、(0.16±0.03)%,各级患者比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论晚期血吸虫病患者外周血中Vα24 NKT细胞水平明显下降,并随肝纤维化程度加重而减少,晚期血吸虫病患者发生及肝纤维化进展可能与Vα24 NKT细胞水平低下和/或功能缺陷有关。

不同的细胞保存液对自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞短期保存的影响

目的:探讨4℃运输保存条件下,自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)和自然杀伤T细胞(natural killer T,NKT细胞)在不同的保存液中保存0、6、12、24 h后其生物学性质的变化,为开展免疫细胞保存运输提供可靠的实验依据。方法:采集4份40 ml血液标本,将同一外周血来源的细胞分别按照NK细胞、NKT细胞培养方案分成2份培养。将已经培养好的8份NK细胞、NKT细胞分别收集并应用生理盐水(保存液A)、生理盐水+5%人血白蛋白(保存液B)、生理盐水+5%人血白蛋白+1%低分子右旋糖苷(保存液C) 3种保存液分别保存。于0、6、12、24 h分别进行细胞活率及结团率、流式细胞术检测及细胞杀伤实验检测。结果:存放12 h时,A组的细胞活率已低于85%,与其他2组比较差异有统计学意义(P<0.05);存放24 h时,各组细胞活率均低于85%,但A组保存液中的细胞活率明显低于B、C组(P<0.05)。存放12、24 h时,B组和C组保存液中细胞结团率均低于A组,且存放24 h时,C组的结团率低于B组(P<0.05)。直至24 h,各处理组中流式细胞术检测结果均未出现明显变化。存放12 h时NK细胞和NKT细胞的A组细胞与C组比较,杀伤作用明显减弱(P<0.05);随着保存时间的延长,至24 h各组细胞的杀伤力均出现显著下降,A组、B组细胞的杀伤力与C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:4℃条件下,NK细胞和NKT细胞保存时间最好不超过24 h,且以生理盐水+5%人血白蛋白+1%低分子右旋糖苷保存效果最佳。

膀胱癌细胞高表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)通过上调CD24抑制NK细胞的杀伤

目的 探讨膀胱癌细胞过表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)后是否影响自然杀伤(NK)细胞的活化及杀伤并探讨其具体机制。方法 利用慢病毒载体构建E2F3a稳定过表达的人及小鼠膀胱癌细胞株并将其与NK细胞共孵育,乳酸脱氢酶释放实验及流式细胞术检测NK细胞活化及杀伤能力的变化。转录组测序分析膀胱癌细胞E2F3a过表达组与对照组之间的基因表达差异,免疫组织化学染色法检测膀胱癌组织中E2F3a与差异基因在蛋白水平上表达的相关性。进一步利用染色质免疫沉淀(ChIP)、实时定量PCR、 Western blot法及小干扰RNA(siRNA)等方法探索膀胱癌细胞过表达E2F3a后对NK细胞活化及杀伤影响的具体机制。结果 在膀胱癌细胞中过表达E2F3a能显著抑制NK细胞的活化及杀伤。膀胱癌细胞过表达E2F3a可显著上调CD24基因的表达,膀胱癌组织中E2F3a和CD24蛋白的表达呈显著正相关。CHIP结果显示,E2F3a能够结合CD24的启动子区并促进CD24基因的转录。干涉E2F3a过表达膀胱癌细胞中的CD24表达后,发现膀胱癌细胞E2F3a过表达所介导的NK细胞活化及杀伤抑制被显著缓解。结论 在膀胱癌细胞中E2F3a可结合CD24的启动子区促进CD24基因的转录及CD24蛋白的表达。膀胱癌细胞E2F3a通过上调CD24表达来抑制NK细胞的活化及杀伤。

早期潜伏梅毒病人外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞的变化及意义

目的探讨早期潜伏梅毒病人外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞(NK)的变化及意义。方法选取2015年3月至2021年3月河北北方学院附属第一医院诊治的早期潜伏梅毒病人135例为观察组,另选取同期健康体检者103例为对照组,均采用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))、NK细胞水平并进行对比。另根据快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)初始滴度将观察组病人分为RPR初始滴度≤1∶8组与>1∶8组,对比RPR初始滴度≤1∶8组与>1∶8组外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞检测结果,并采用Spearman秩相关性分析法分析外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞与RPR初始滴度的相关性。结果观察组外周血CD3^(+)、CD8^(+)绝对计数及所占比例[(67.79±10.76)%比(64.85±12.95)%、(29.51±5.92)%比(28.09±5.61)%]与对照组比较均差异无统计学意义(P>0.05),外周血CD4^(+)绝对计数及所占比例[(37.36±7.26)%比(29.73±5.84)%]、CD4^(+)/CD8^(+)所占比例(1.27±0.25比1.06±0.21)均高于对照组(P<0.05),NK细胞绝对计数及所占比例[(16.59±3.29)%比(17.46±3.34)%]低于对照组(P<0.05);RPR初始滴度≤1∶8组外周血 CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)绝对计数及所占比例均低于 RPR初始 滴度>1∶8组(P<0.05),且 CD4^(+)/CD8^(+)所占比例低于 RPR初始滴度>1∶8组(P<0.05),NK细胞绝对计数及所占比例均高于 RPR初 始滴度>1∶8组(P<0.05);经 Spearman秩相关性分析显示,早期潜伏梅毒病人外周血 CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)绝对计数与百分比均与 RPR初始滴度呈正相关(P<0.05),CD4^(+)/CD8^(+)比值与 RPR初始滴度呈正相关(P<0.05),NK细胞绝对计数、百分比均所占比例均 与 RPR初始滴度呈负相关(P<0.05)。结论 早期潜伏梅毒病人外周血 CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平较健康人群均呈现一定程度的上 升,NK细胞水平降低,而 CD3^(+)、CD8^(+)细胞水平无明显改变,且外周血 CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、NK细胞水平均与早期潜伏 梅毒病人 RPR初始滴度存在一定的相关性,外周血 T淋巴细胞亚群、NK细胞的变化可能参与了早期潜伏梅毒的发病过程。

α-半乳糖基神经酰胺静脉注射对小鼠肝脏恒定性自然杀伤T细胞及亚群的影响

目的通过采用静脉注射α-半乳糖基神经酰胺(α-GalCer),观察其对小鼠肝脏恒定性自然杀伤T细胞(iNKT)频率及亚群的影响。方法研究时间2021年11月至2022年2月,选取C57BL/6J健康小鼠,采用随机数字表法分为观察组和对照组,观察组静脉注射α-GalCer,对照组静脉注射生理盐水,在注射后的第2、4、6、8、10天取小鼠肝脏,采用流式细胞术检测小鼠肝脏的iNKT细胞及亚群变化情况;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测外周血血清中白细胞介素-4(IL-4),干扰素-γ(IFN-γ),白细胞介素-17A(IL-17A)的表达水平。结果与对照组相比,静脉注射α-GalCer可引起肝脏iNKT细胞频率及亚群频率变化,且差异有统计学意义(P<0.05)。观察组肝脏iNKT细胞频率明显升高,但随时间呈逐渐降低趋势,自第6天恢复至与正常水平相当[观察组第2、4、6、8、10天分别为(20.87±2.15)%、(5.61±0.51)%、(2.65±0.26)%、(2.62±0.64)%、(2.51±0.11)%,对照组分别为(2.72±0.19)%、(2.72±0.19)%、(2.93±0.24)%、(3.06±0.45)%、(3.14±0.35)%];注射α-GalCer后,iNKT1亚群频率低于对照组,于第10天恢复至正常水平[观察组第2、4、6、8、10天分别为(1.04±0.37)%、(0.48±0.12)%、(1.99±1.04)%、(0.60±0.11)%、(3.25±0.53)%,对照组分别为(3.68±1.02)%、(2.74±0.21)%、(2.81±0.33)%、(2.93±0.29)%、(3.12±0.11)%];iNKT2亚群频率高于对照组,后逐渐降低[观察组第2、4、6、8、10天分别为(75.13±3.48)%、(33.83±9.08)%、(17.20±5.37)%、(12.00±1.99)%、(6.26±1.28)%,对照组分别为(38.03±1.70)%、(40.13±3.20)%、(40.16±3.15)%、(38.03±1.70)%、(36.37±1.18)%];iNKT1亚群频率总体上低于iNKT2亚群;iNKT17亚群频率低于对照组,第4天亚群频率最高,后又降至正常水平以下;与对照组相比,血清中IL-4水平在注射第2天无明显变化(P>0.05),注射后第6天,IL-4水平明显降低(P<0.05);IFN-γ水平自注射α-GalCer后明显升高,第6天又降低(P<0.05),IL-17A水平均低于正常水平(P<0.05)。结论静脉注射α-GalCer可诱导小鼠肝脏iNKT细胞的增殖,影响其亚群的分化。

腹腔注射α-半乳糖苷神经酰胺对小鼠肺恒定自然杀伤T细胞及亚群的影响

目的探讨腹腔注射α-半乳糖苷神经酰胺(α-GalCer)对小鼠肺恒定自然杀伤T细胞(iNKT)、细胞亚群及外周血细胞因子的影响,从而为治疗相关肺部疾病提供基础研究数据。方法60只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠,采用随机数字表法分为α-GalCer干预组和正常对照组,每组30只,选择不同时间点观察干预组与对照组小鼠肺iNKT细胞、亚群及外周血细胞因子的变化。结果组间比较发现,与对照组(3.49±0.25)%相比,腹腔注射α-GalCer可引起肺脏iNKT细胞频率及亚群的变化,差异有统计学意义(P<0.05)。α-GalCer干预组肺iNKT细胞频率前2 d(6.56±0.05)%明显升高而后[d6(2.56±0.08)%、d8(2.64±0.14)%、d10(2.37±0.24)%]降低(P<0.05)。iNKT 1细胞频率低于对照组且呈降低的趋势(P<0.05)。iNKT 2细胞频率高于对照组在第4天肺部iNKT2细胞频率达到峰值,随后降低(P<0.05)。iNKT 17细胞频率略高于对照组,差异无统计学意义(P>0.05),与第2天相比,第4、6、8、10天iNKT17细胞频率均显著升高(P<0.05)。组间比较发现,干预组与对照组外周血血清IFN-γ、IL-4、IL-17A浓度比较,差异有统计学意义,α-GalCer干预组在不同时间点IFN-γ、IL-4、IL-17A浓度比较,差异有统计学意义,与第2天相比,IFN-γ、IL-4水平于第6天、第8天均降低(P<0.05);IL-17A水平于第6天降低(P<0.05)。α-GalCer干预组的IFN-γ水平与对照组相比均有明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);除第8天外,α-GalCer干预组的IL-4水平与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);第2天、第8天α-GalCer干预组的IL-17A水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论腹腔注射α-GalCer对小鼠肺组织iNKT细胞和亚群有不同的激活效应;iNKT细胞激活后,会由脉管系统迁入间质;腹腔注射α-GalCer可诱导血清细胞因子的变化,提示α-GalCer注射可影响机体免疫功能。

自然杀伤细胞辅助射频消融术治疗肝癌患者的效果及对T细胞亚群及生存质量的影响

目的:探讨自然杀伤细胞(NK细胞)辅助射频消融术治疗肝癌患者的效果及对肿瘤标志物、T细胞亚群、γ干扰素(IFN-γ)和生存率的影响。方法:选取2018年1月至2020年6月首都医科大学附属北京朝阳医院怀柔医院收治的肝癌患者82例为研究对象,采用随机数字表法分为观察组和对照组,每组41例。对照组予以腹腔镜下射频消融术治疗,观察组予以NK细胞辅助腹腔镜下射频消融术治疗。比较两组临床疗效、生存情况及消融术前、后血清肿瘤标志物〔细胞角蛋白19(CK19)、甲胎蛋白(AFP)、父系表达基因10(PEG10)〕、免疫指标〔CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)、总B淋巴细胞、NK细胞〕、NK细胞相关免疫因子〔白细胞介素-12(IL-12)、白细胞介素-10(IL-10)、γ-干扰素(IFN-γ)〕及癌症患者生命质量测定量表(FACT-G)评分。结果:观察组术后1个月总有效率(70.73%)与对照组(58.54%)相比无明显差异(P>0.05)。观察组术后1个月血清CK19、AFP、PEG10、IL-10水平均低于对照组,CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)、总B淋巴细胞、NK细胞及血清IL-12、IFN-γ水平均高于对照组(P<0.05)。观察组术后6个月FACT-G各维度评分高于对照组(P<0.05)。观察组中位总生存时间(OS)、中位无生存进展期(PFS)分别为16个月、12个月,对照组中位OS、中位PFS分别为12个月、8个月(均P<0.001)。结论:NK细胞辅助射频消融术治疗肝癌具有一定的临床效果,可纠正T淋巴亚群紊乱状态,增强机体免疫功能,调节NK细胞相关免疫因子水平,改善患者预后及生存质量。

外周血T淋巴细胞亚群联合自然杀伤细胞在梅毒血清固定中的预测价值

目的分析外周血T淋巴细胞亚群联合自然杀伤细胞(NK细胞)在梅毒血清固定中的预测价值。方法选取2017年4月至2019年4月河北北方学院附属第一医院收治的202例梅毒患者作为研究对象,经正规治疗且临床症状、体征消退(临床治愈)后,一期梅毒随访12个月、二期梅毒随访24个月、三期梅毒随访36个月,将连续3个月以上快速血浆反应素环状卡片试验及甲苯胺红不加热血清试验非梅毒螺旋体抗体滴度维持在一定水平的患者作为血清固定组,余非梅毒螺旋体抗体滴度转阴患者作为非血清固定组。比较两组患者外周血T淋巴细胞与NK细胞水平,分析外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞与梅毒血清固定的相关性及其在梅毒血清固定中的预测价值。结果202例梅毒患者经正规治疗且临床治愈后随访1~3年,失访8例,余194例患者中有56例患者出现血清固定,138例患者非梅毒螺旋体抗体滴度转阴。两组患者梅毒分期分布比较差异有统计学意义(P<0.05),两组性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。临床治愈后,血清固定组患者辅助性CD4^(+)、辅助性CD4^(+)/抑制性CD8^(+)、NK细胞水平明显低于非血清固定组[(33.80±4.65)%比(40.79±4.68)%、1.24±0.26比1.67±0.29、(12.50±3.72)%比(14.68±3.94)%](P<0.01),抑制性CD8^(+)细胞水平明显高于非血清固定组[(30.86±4.40)%比(25.69±4.39)%](P<0.01)。Pearson相关性分析结果显示,辅助性CD4^(+)、辅助性CD4^(+)/抑制性CD8^(+)、NK细胞水平与血清固定呈显著负相关(r=-0.563,P<0.001;r=-0.575,P<0.001;r=-0.248,P<0.001),抑制性CD8^(+)细胞水平与血清固定呈显著正相关(r=0.472,P<0.001);受试者工作特征曲线分析结果显示,外周血T淋巴细胞联合NK细胞水平预测梅毒血清固定的灵敏度为84.8%、特异度为76.9%。结论外周血T淋巴细胞联合NK细胞水平预测血清固定的灵敏度、特异度较高,能够为血清固定的临床防治提供参考。

Graves’病样自然杀伤T细胞缺如小鼠血清TSH受体抗体的水平

目的 探讨自然杀伤T细胞 (naturalkillerTcell,NKT)在Graves’病发病中的作用。方法 用表达有人TSH受体的细胞免疫NKT细胞缺如小鼠和野生型BLAB/c小鼠 ,每两周一次 ,共 6次。在最后一次免疫结束后两周处死小鼠 ,检测血清甲状腺素水平 ,TSH受体抗体。结果 免疫后的NKT细胞缺如小鼠 ,血清TT4和TRAb水平轻度升高 ,并且与对照组比较 ,有显著性差异。但是 ,在经免疫的NKT细胞缺如小鼠和野生型小鼠之间 ,血清平均TT4水平和TRAb水平相似 ,且TSAb与TSBAb水平变化两组之间无显著性差异。

人外周血Vα24 NKT细胞抗肿瘤免疫机制的初步研究

目的进一步认识Vα24 NKT细胞在抗肿瘤免疫中的作用。方法从正常人外周血中扩增并纯化得到Vα24 NKT细胞,通过流式细胞术检测其表型、活化后的细胞因子、细胞坏死相关因子的表达情况,采用DIOC18染色及流式细胞术测定Vα24 NKT细胞对肿瘤细胞的杀伤率,并利用不同的阻断剂进行阻断实验。结果Vα24 NKT细胞分泌高水平的IFN-γ和IL-4,并表达TNF-α、穿孔素(perforin)、FasL、TRAIL等细胞坏死相关因子。Vα24 NKT细胞对表面表达CD1d分子的肿瘤细胞株的杀伤率高于不表达CD1d分子的肿瘤细胞株,同时在α-GalCer存在时,Vα24 NKT细胞的杀伤活性增强。对Perforin、FasL、TNF-α、TRAIL进行阻断后,ConA对Vα24 NKT细胞的杀伤作用的阻断效果最为明显。结论Vα24 NKT对肿瘤的杀伤作用是CD1d分子限制性和抗原特异性的。Vα24 NKT通过穿孔素途径和TNF家族成员发挥其细胞毒作用,而穿孔素途径是其肿瘤杀伤的最主要途径。

慢性HBV感染者外周血Vα24 NKT细胞数量变化及其与肝脏损害程度的关系

目的:探讨慢性HBV感染者外周血Vα24自然杀伤T细胞(NKT)数量变化及其与肝脏损伤程度的关系.方法:观察对象为慢性乙型肝炎(CHB)患者26例、乙型肝炎后肝硬化患者(LC)9例、慢加急性肝衰竭患者(ACLF)8例和7名正常对照组(NC),入院后次日清晨取静脉全血2mL,裂解红细胞后,采用流式细胞仪检测外周血Vα24 NKT细胞数量占外周血T淋巴细胞的比例,同时检测肝功能、凝血功能判断肝脏损害程度.结果:CHB,ACLF组患者外周血Vα24 NKT细胞数量分别为0.8012%±0.2979%、0.4638%±0.2244%,明显低于正常对照组(1.1114%±0.3546%,P<0.05);CHB中度及重度患者NKT数(0.7344%±0.2441%,0.6925%±0.3612%)明显低于正常对照组.NKT数与凝血酶原活动度(PTA)呈显著正相关,与血清总胆红素(TB)呈显著负相关.结论:慢性HBV感染者外周血Vα24 NKT细胞数明显降低,并随肝损害程度加重而减少,提示Vα24NKT细胞可能参与CHB患者肝细胞损伤.

自然杀伤细胞及CD8^(+)T细胞缺失对泡球蚴感染小鼠肝功能的影响

目的观察自然杀伤(NK)细胞、CD8^(+)T细胞的缺失对泡球蚴感染小鼠肝功能的影响。方法选取6~8周龄,体重为18~20 g的SPF级雌性C57BL/6小鼠共30只,按随机数字表法将其分为对照组、泡球蚴感染组、NK细胞清除组、NK细胞清除对照组、CD8^(+)T细胞清除组、CD8^(+)T细胞清除对照组,每组5只。泡球蚴感染组、NK细胞清除组、NK细胞清除对照组、CD8^(+)T细胞清除组、CD8^(+)T细胞清除对照组均经门静脉注射多房棘球绦虫头节(10个头节/μl,200μl),对照组经门静脉注射等量生理盐水。实验第4周,NK细胞清除组腹腔注射NK细胞清除抗体,100μg/次,1次/周,同时NK细胞清除对照组腹腔注射等量IgG2a同型对照抗体;CD8^(+)T细胞清除组腹腔注射CD8^(+)T细胞清除抗体200μg/次,1次/周,同时CD8^(+)T细胞清除对照组腹腔注射等量IgG2b同型对照抗体。实验第12周采集六组外周血分离血浆并检测小鼠肝肾功能指标总蛋白(TP)、碱性磷酸酶、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、血清白蛋白(ALB)、乳酸脱氢酶、尿酸、尿素、肌酐。结果泡球蚴感染组外周血GPT、GOT高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。NK细胞清除组外周血GPT、GOT高于NK细胞清除对照组,TP、ALB低于NK细胞清除对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。CD8^(+)T细胞清除组外周血TP低于CD8^(+)T细胞清除对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论泡球蚴感染会导致一定程度的肝功能损伤,尤其在NK细胞耗竭状态下肝功能损伤会进一步加重。

非酒精性脂肪性肝病患者外周血恒定自然杀伤T细胞和CD4^(+)/CD8^(+)T细胞活化差异研究

目的分析不同非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者外周血恒定自然杀伤T细胞(iNKT)、CD4^(+)和CD8^(+)T细胞活化标记物(CD69、CD25、HLA-DR和NKG2D)的表达差异.方法2020年1月~2022年7月我院诊治的NAFLD患者64例和同期健康体检者50例,对NAFLD患者行肝穿刺活检,使用流式细胞仪检测外周血iNKT、CD4^(+)和CD8^(+)T细胞CD69、CD25、HLA-DR和NKG2D表达.结果在64例NAFLD患者中,经组织病理学检查,诊断NAFL 37例和NASH 27例;健康对照者、NAFL和NASH患者健康对照者、NAFL和NASH患者外周血CD69^(+)iNKT细胞百分比分别为(10.1±1.7)%、(6.1±1.3)%和(26.7±3.6)%(P<0.05),CD25^(+)iNKT细胞百分比分别为(83.0±5.9)%、(94.1±8.0)%和(90.8±7.5)%(P<0.05),HLA-DR^(+)iNKT细胞百分比分别为(15.3±1.7)%、(15.8±2.0)%和(22.3±2.0)%(P>0.05),NKG2D^(+)iNKT细胞百分比分别为(44.5±3.5)%、(59.7±4.0)%和(71.3±6.0)%(P<0.05);外周血CD69^(+)CD4^(+)T细胞百分比分别为(0.7±0.2)%、(0.4±0.1)%和(0.5±0.1)%(P>0.05),CD25^(+)CD4^(+)T细胞百分比分别为(1.4±0.6)%、(3.0±1.3)%和(1.5±0.7)%(P>0.05),HLA-DR^(+)CD4^(+)T细胞百分比分别为(2.7±0.7)%、(4.1±1.0)%和(3.9±1.0)%(P<0.05),NKG2D^(+)CD4^(+)T细胞百分比分别为(1.6±0.5)%、(0.6±0.2)%和(0.9±0.2)%(P<0.05);外周血CD69^(+)CD8^(+)T细胞百分比分别为(2.0±0.4)%、(1.6±0.3)%和(2.1±0.6)%(P>0.05),CD25^(+)CD8^(+)T细胞百分比分别为(1.3±0.3)%、(1.1±0.2)%和(1.0±0.2)%(P>0.05),HLA-DR^(+)CD8^(+)T细胞百分比分别为(5.0±0.7)%、(6.5±1.0)%和(9.6±1.4)%(P<0.05),NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞百分比分别为(0.6±0.1)%、(0.5±0.1)%和(0.9±0.2)%(P<0.05).结论本研究发现NAFL与NASH患者可能存在外周血iNKT细胞、CD4^(+)和CD8^(+)T细胞活化的免疫表型差异,显示NASH患者CD69^(+)iNK T细胞百分比增高,可能对诊断有帮助,值得进一步研究.

自然杀伤细胞和神经元特异性烯醇化酶及T淋巴细胞亚群在新生儿化脓性脑膜炎外周血中的表达及临床意义

目的探讨自然杀伤细胞(NK)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))在新生儿化脓性脑膜炎外周血中的表达及临床意义。方法选取2021年10月至2022年12月赣州市妇幼保健院收治的30例化脓性脑膜炎患儿作为观察组,另选取30名同期出生的健康新生儿作为对照组。两组于入组后次日清晨采集空腹静脉血,观察组治疗后10 d再次采集空腹静脉血。比较两组外周血NK、NSE与T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))水平。结果治疗前,观察组NK、CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)水平及CD4^(+)/CD8^(+)均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组NK、CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)水平及CD4^(+)/CD8^(+)均高于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),但与对照组比较差异无统计学意义。治疗前,观察组NSE水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组NSE水平低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),但与对照组比较差异无统计学意义。ROC曲线分析结果显示,NK诊断价值最高,其次为CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、NSE、CD4^(+)和CD8^(+)。结论新生儿一旦罹患化脓性脑膜炎,会导致外周血中T淋巴细胞紊乱失调,T淋巴细胞免疫功能长时间处于抑制状态,促使脑神经受到不同程度损伤,而通过观察NK细胞、NSE及CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)在外周血中的表达,可为临床诊疗提供有力的参考依据,从而改善其免疫功能,有效控制病情,促进患儿病情康复。