慢性苯中毒患者外周血TCR Vδ亚家族T细胞分布和克隆性研究

目的：了解慢性苯中毒患者外周血T细胞的TCRVδ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法：利用RT-PCR方法扩增10例慢性苯中毒患者外周血单个核细胞中8个TCR Vδ基因的互补决定区3（CDR3）,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果：8例健康人平均表达（6.63±0.52）个Vδ亚家族,外周血中未检测到Vδ4和Vδ5亚家族,慢性苯中毒患者工人表达（1.10±0.57）个Vδ亚家族（1例重度苯中毒工人8个Vδ亚家族均未表达）,外周血中未检测到Vδ1、Vδ3、Vδ4和Vδ8亚家族,与健康人比较有显著性差异（P〈0.01）。6例慢性苯中毒患者存在1-2个Vδα亚家族T细胞出现克隆性增殖。结论：慢性苯中毒患者外周血出现TCR Vδ亚家族倾斜性分布和克隆性增殖T细胞,这可能是苯中毒后所引起的机体特异性免疫反应。

中国猕猴CD4^+CD25^+调节性T细胞对Vγ2Vδ2T细胞体外增殖的影响

目的:观察中国猕猴的CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对Vγ2Vδ2T细胞体外增殖的影响。方法:取3只正常的无潜伏感染的中国猕猴和6只3个月内人工感染过卡介苗的中国猕猴,分离9只动物外周血单个核细胞(PBMCs),免疫磁珠法分选纯化出Tregs。将去除Tregs的PBMCs标记CFSE后,再与Tregs混合,给予CD3/CD28抗体、HMBPP和(或)IL-2刺激,培养7d,流式细胞术检测Vγ2Vδ2T细胞的增殖情况。从3只正常中国猕猴分离PBMCs,经过IL-2联合HMBPP体外刺激5d后,标记上CFSE,再与当天新鲜分离的相同动物的Tregs混合,在IL-2刺激下继续培养4d后,流式细胞术检测Vγ2Vδ2T细胞的增殖情况。结果:Tregs不仅抑制Vγ2Vδ2T细胞的HMBPP抗原特异性扩增以及CD3/CD28抗体诱导的抗原非特异性扩增(t=2.571,10.430,P<0.05),而且以剂量依赖关系抑制IL-2联合HMBPP体外激活的Vγ2Vδ2T细胞(F=9.880,P<0.001)。IL-2联合HMBPP体外预激活的Vγ2Vδ2T细胞的扩增仍然能够受到Treg的显著抑制(FTregs=29.800,FIL-2=59.290,F交互=30.410,P均<0.001)。结论:中国猕猴的Tregs对Vγ2Vδ2T有直接的体外负调节作用。

Vδ2 γδ T细胞亚群在慢性HCV感染中的特征

目的:探讨γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞在慢性HCV感染中的作用。方法:采用流式细胞术检测人外周血γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞比例变化。结果:慢性HCV感染病人外周血中γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞比例与健康对照者相比无显著差异。相关性分析显示HCV感染患者Vδ2 T细胞数目与肝脏损伤成正相关而与病毒滴度不相关。慢性HCV感染病人Vδ2 T细胞处于活化状态,CD107a表达高于对照组。结论:Vδ2 T细胞亚群参与慢性HCV感染所致肝损伤。

Vδ1 T细胞和TINs细胞表达情况与宫颈癌患者临床分期及预后的关系

目的探讨Vδ1 T细胞和肿瘤浸润性中性粒细胞(tumor infiltrating neutrophil,TINs)细胞表达情况及其与宫颈癌临床分期及预后关系。方法选取我院2012年1月至2017年1月期间经组织病理学确诊的60例宫颈癌患者为研究组,根据临床分期分为Ⅰ~Ⅳ期,患者数22例、18例、12例、8例,并选择同期100例良性病变者作为对照组。采用流式细胞术检测所有患者组织标本中Vδ1 T细胞表达水平,检测CD66b+TINs水平,IL^(-1)1、IL-8、IL^(-1)8炎性细胞因子,CCL2、CCL5、CXCL10趋化因子mRNA水平,并评价上述细胞因子表达水平与宫颈癌临床分期之间的相关性;采用ROC曲线评估Vδ1 T细胞和TINs细胞联合检测对宫颈癌患者预后预测价值。结果不同临床分期宫颈癌患者炎性细胞因子(IL^(-1)1、IL-8、IL^(-1)8)水平以及趋化因子(CCL2、CCL5、CXCL10)水平相比对照组均明显升高,且Ⅲ期和Ⅳ期患者高于Ⅰ期组患者(P<0.001);多元Logistic回归分析结果显示γδT细胞比例、CD66b+TINs百分比以及IL^(-1)1、IL-8、IL^(-1)8以及CCL2、CCL5均属于影响宫颈癌患者临床分期的危险因素(P<0.05);随访3年,生存率为68.33%(41/60),ROC曲线分析结果显示联合诊断曲线下面积为0.895(95%CI:0.795~0.965),灵敏度为84.2%,特异度73.2%,约登指数为0.574,具有最佳诊断效能。结论宫颈癌患者Vδ1 T细胞和TINs细胞随着临床分期进展而升高,联合检测对于宫颈癌患者预后具有一定的预测价值。

体外扩增的Vγ9Vδ2T细胞抗H1N1流感病毒效应的研究

目的探讨帕米磷酸钠（PAM）体外扩增培养的人外周血Vγ9Vδ2 T细胞对感染流感病毒H1N1的人肺上皮细胞A549的细胞毒效应。方法 PAM和IL-2联合刺激培养健康成人外周血单个核细胞（PBMC）10~14 d,免疫磁珠分选法纯化得到Vγ9Vδ2 T细胞,再将Vγ9Vδ2 T细胞与感染流感病毒的A549细胞按不同的效靶比（E∶T）接触共育或按E∶T=20∶1非接触共育6 h。流式细胞分析术检测A549的存活率及Vγ9Vδ2 T细胞穿孔素（perforin）的表达情况,收集培养上清检测流感病毒的滴度,提取培养上清及A549细胞的总RNA,实时荧光定量检测流感病毒基质蛋白M1基因的表达情况。结果 PAM在体外能有效活化并扩增Vγ9Vδ2 T细胞。Vγ9Vδ2 T细胞对感染流感病毒的A549细胞具有较强的杀伤作用,且随E∶T的升高而增大,在E∶T=20∶1时,Vγ9Vδ2 T细胞能杀伤60%的感染了流感病毒的A549细胞。接触共育组的A549细胞杀伤率明显高于非接触共育组（P〈0.05）。Vγ9Vδ2 T细胞经流感病毒感染后Perforin的表达明显上调。接触共育组的病毒复制也明显受到抑制（P〈0.05）。结论 PAM刺激扩增的Vγ9Vδ2 T细胞能有效杀伤感染流感病毒的人肺上皮细胞A549,其效应机制依赖于两者细胞间的接触。

缺血性糖尿病足部溃疡皮肤Vδ1T细胞胰岛素样生长因子1与诱生型一氧化氮合酶的表达

背景:皮肤Vδ1T细胞分泌的一系列细胞因子能促进伤口愈合,但与糖尿病足部皮肤组织溃疡难以愈合的关系尚未见报道。目的:观察缺血性糖尿病患者足部溃疡皮肤Vδ1T细胞中胰岛素样生长因子1与诱生型一氧化氮合酶的表达。方法:选取缺血性糖尿病足部溃疡患者及正常对照者足部全层皮肤,各10例。双酶标免疫荧光标记测量Vδ1T细胞及胰岛素样生长因子1、诱生型一氧化氮合酶蛋白表达。结果与结论:缺血性糖尿病足部溃疡患者Vδ1T细胞中胰岛素样生长因子1蛋白表达较对照者明显减少(P<0.01);诱生型一氧化氮合酶蛋白表达明显增加(P<0.01)。提示Vδ1T细胞中胰岛素样生长因子1减少可能与缺血性糖尿病足部溃疡难以愈合有关,而胰岛素样生长因子1减少与溃疡皮肤Vδ1T细胞诱生型一氧化氮合酶表达增加,产生氧化应激有关。

嗜乳脂蛋白3A1(BTN3A1)促进结核杆菌耐热抗原诱导的人外周血Vγ9Vδ2 T细胞活化增殖

目的初步探讨嗜乳脂蛋白3A1(BTN3A1)在结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)诱导的人外周血Vγ9Vδ2 T细胞活化增殖中的作用。方法人外周血单个核细胞(PBMC)先加BTN3A1阻断性抗体作用3 h,再分别用MTB-HAg和磷酸类抗原(PAg)刺激培养24 h后收集细胞,用流式细胞术检测Vγ9Vδ2 T细胞中CD69表达;或刺激20 h后收集细胞,检测Vγ9Vδ2 T细胞中1型辅助性T(Th1)细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生细胞比例;或刺激后,在含白细胞介素2(IL-2)培养液中培养10 d后,收集细胞检测Vγ9Vδ2 T细胞扩增比例及增殖活性。结果MTB-HAg刺激后,Vγ9Vδ2 T细胞中CD69平均荧光强度和阳性细胞比例在BTN3A1阻断组均明显下降(为刺激组的13.84%和43.00%);而PAg阻断组的CD69平均荧光强度和阳性细胞比例显著被抑制(为刺激组的3.10%,4.47%和9.53%,10.91%)。MTB-HAg刺激后Vγ9Vδ2 T细胞中IFN-γ和TNF-α产生细胞比例在BTN3A1阻断组显著减少,Vγ9Vδ2 T细胞扩增数量和细胞增殖活性在BTN3A1阻断组也显著减少或降低。与PAg阻断组明显被抑制的结果相似。结论BTN3A1促进MTB-HAg诱导的外周血Vγ9Vδ2 T细胞活化增殖。

慢性心力衰竭患者外周血Vδ1T细胞数量及功能变化

目的观察慢性心力衰竭(CHF)患者外周血Vδ1 T细胞数量和功能的改变,探讨Vδ1 T细胞在CHF发病中的作用。方法选取2012年3月至2013年12月在该院入住的CHF患者50例及同期入院进行健康体检者50例,抽取CHF患者及健康对照(HC)者外周静脉血10 ml。采用流式细胞术测定其外周血Vδ1 T细胞比例及Vδ1 T细胞表面Foxp3表达情况。采用CFSE染色方法检测Vδ1 T细胞对CD4 T细胞增殖能力的影响。采用流式细胞术测定Vδ1 T细胞与CD4 T细胞共孵育后对CD4 T细胞分泌IFN-γ及TNF-α能力的影响。结果 CHF患者外周血Vδ1 T细胞数量〔(1.59±0.77)%〕与HC〔(1.41±0.344)%〕相比无统计学差异(P>0.05)。与HC外周血Vδ1 T细胞表面Foxp3表达水平〔(19.82±2.46)%〕相比,CHF组Foxp3表达水平〔(1.23±0.86)%〕显著降低(P<0.05)。HC外周血Vδ1 T细胞可显著抑制CD4 T细胞增殖和IFN-γ及TNF-α分泌能力,而CHF患者外周血Vδ1 T细胞不具有此功能。结论 CHF患者外周血Vδ1 T细胞功能丧失,致使外周血CD4 T细胞增殖和分泌IFN-γ及TNF-α能力增强,CHF患者免疫功能的这种改变可能与CHF的发生相关。

Vδ2 T细胞在2型糖尿病中的功能及临床研究

目的探讨Vδ2 T细胞在2型糖尿病中的功能并与临床指标进行相关性分析。方法收集2018年6月至2019年6月在该院诊治的40例2型糖尿病患者(2型糖尿病组)和35例体检健康者(健康对照组),采用流式细胞术检测2型糖尿病组和健康对照组Vδ2 T细胞的比例;采用CD4磁珠阴性分选法和流式细胞术分选法分选2型糖尿病组和健康对照组Vδ2 T细胞,体外刺激后采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞因子白细胞介素(IL)-17和干扰素-γ(IFN-γ)水平;统计分析Vδ2 T细胞的比例与空腹血糖、糖化血红蛋白和空腹C肽的相关性。结果2型糖尿病组空腹血糖和糖化血红蛋白水平高于健康对照组,提示血糖控制不佳。流式细胞术结果显示,Vδ2 T细胞的数量在2型糖尿病组中降低;ELISA结果显示,在2型糖尿病组Vδ2 T细胞释放的IL-17和IFN-γ减少。相关性分析发现,Vδ2 T细胞的比例与空腹血糖和糖化血红蛋白水平呈负相关(r=-0.411,-0.324;P<0.05),与空腹C肽无相关性(P>0.05)。结论在2型糖尿病中Vδ2 T细胞的数量和细胞因子释放的功能均降低,且Vδ2 T细胞的数量与空腹血糖和糖化血红蛋白水平呈负相关,提示Vδ2 T细胞可能与糖尿病患者血糖控制情况存在相关性。

缺血性糖尿病足部溃疡皮肤VδT1细胞中IGF-1表达的研究

目的探讨缺血性糖尿病足部溃疡皮肤Vδ1T细胞中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达及其临床意义。方法 2008年9月￣2010年8月年10月在南方医院住院和门诊的20例患者自愿捐献的标本,分为两组,每组10人,缺血性糖尿病足部溃疡(IDF)组:男4例,女6例;正常对照(NC)组:男5例,女5例;双酶标免疫荧光标记Vδ1T细胞及IGF-1蛋白的表达,以Olympus FluoView FV10i激光共聚焦显微镜观察和摄像,并用IMAGE-PROPLUS6.0分析IGF-1的表达。结果 IDF组及NC组中Vδ1阳性细胞的数量无明显差异(P>0.05),IDF组Vδ1T细胞中IGF-1的表达较NC组减少,差异有统计学意义(P<0.001)。结论缺血性糖尿病足部溃疡皮肤Vδ1T细胞中IGF-1的表达减少,提示Vδ1T细胞中IGF-1的减少可能与缺血性糖尿病足部溃疡难以愈合有关。

急性淋巴细胞白血病IgH和Vδ_2Dδ_3基因重排检测在微小残留病监测中的意义

目的 :探讨急性淋巴细胞白血病 (ALL)IgH和Vδ2 Dδ3基因重排分布频率及定量检测在微小残留病(MRD)监测中的意义。方法 :对初诊ALL患者及ALL完全缓解期 (CR)后不同时期的骨髓标本及脑脊液标本进行IgH和Vδ2 Dδ3基因重排检测及定量计算MRD值。结果 :1 0 2例初诊ALL患者骨髓标本IgH和Vδ2 Dδ3基因重排阳性率分别为 49.0 %和 36 .3 %。诱导缓解期与完全缓解期脑脊液IgH基因重排分别有 7例和 3例 ,Vδ2 Dδ3基因重排分别为 5例和 2例。MRD值 >0 .1 %者 3例 ,复发率为 66 .7%。MRD为 0 .0 0 2 %～ 0 .1 %者 6例 ,复发率为 1 7.0 % ;MRD <0 .0 0 2 %者 9例 ,无复发。复发组MRD明显高于未复发组 (P <0 .0 5)。结论 :动态PCR检测ALL患者脑脊液IgH和Vδ2 Dδ3基因重排比细胞学检测更灵敏。IgH和Vδ2 Dδ3基因重排MRD值增高 ,复发危险率增高。MRD定期定性定量监测对指导化疗药物的选择、疗效观察及判断预后有指导意义。

HSP70刺激人Vγ9Vδ2 T细胞CCL5／RANTES的分泌

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)体外诱导人外周血单个核细胞(PBMCs)后CC型趋化因子CCL5/RANTES在Vγ9Vδ2 T细胞表达。方法人PBMCs在体外用重组HSP70诱导活化,在第1、4、7、10、14天分别收集细胞,流式细胞术胞内细胞因子分析技术检测表达CCL5/RANTES的Vγ9Vδ2 T细胞百分率,并设结核杆菌低相对分子质量抗原(Mtb-Ag)刺激组作为对照。结果HSP70诱导组分泌CCL5/RANTES的Vγ9Vδ2 T细胞百分率在第1、4、7、10、14天分别为5.9±1.7、16.2±2.5、22.8±3.7、32.4±3.6与57.8±7.2;Mtb-Ag诱导组分别为3.7±2.5、10.5±1.8、11.1±2.3、26.3±3.9与47±4.7;HSP诱导Vγ9Vδ2T分泌CCL5/RANTES的能力比Mtb-Ag强。结论HSP70特异性诱导Vγ9Vδ2 T细胞增殖并分泌CCL5/RANTES,表明二者协同作用,共同参与免疫应答并可能介导某些炎症反应。

肝癌患者与健康人外周血Vγ9Vδ2T细胞扩增前后比例及分化亚型对比

目的探讨肝细胞癌（HCC）患者外周血的Vγ9Vδ2T细胞比例,成熟分化亚型与健康人的差别,经体外扩增后上述指标的变化。方法选取健康捐献者（n=10）和HCC患者（n=20）的外周血共10 mL,采用不连续密度梯度离心法分离单核细胞层,借助流式细胞术检测Vγ9Vδ2T细胞占总T细胞比例,成熟分化亚型,并在体外加入唑来膦酸和IL-2进行扩增培养,12~14 d后收集细胞再次检测上述指标。结果培养前HCC组患者外周血中Vγ9Vδ2T细胞占总T细胞比例的平均值比健康人低（P〈0.05,P=0.009）,在经过体外扩增培养后其比例明显升高（P〈0.0001）,而在体外扩增后患者与健康人的Vγ9Vδ2T细胞比例差异无统计学意义（P〉0.05,P=0.3408）。患者Vγ9Vδ2T细胞的分化与成熟亚型作体外培养的前后对比发现,培养后Tn、Tcm、Temra的比例较培养前有明显下降（P〈0.05,P=0.0045,P=0.0236,P=0.0162）,患者和健康人Tem比值均较培养前明显升高（P〈0.0001）。而在扩增前、扩增后患者和健康人的Vγ9Vδ2T细胞的成熟分化比例差异均无统计学意义。结论肝癌患者外周血Vγ9Vδ2T细胞比例虽然低于健康人,但其分化成熟亚型的分布比例与健康人相似,且经过体外扩增培养后Vγ9Vδ2T细胞和总效应细胞比例,均与健康人无差异。其增殖功能得到恢复,肝癌患者和健康人中应用这种体外扩增方法外周血Vγ9Vδ2T细胞的效果相似。

极限稀释法对急性淋巴细胞白血病IgH和Vδ2Dδ3基因重排的定量检测及其意义

目的 探讨急性淋巴细胞白血病 (ALL)IgH和Vδ2Dδ3基因重排微小残留病 (MRD)值在判断预后的意义。方法 运用极限稀释法对ALL完全缓解期 (CR)后不同时期的骨髓标本进行IgH和Vδ2Dδ3基因重排的定量检测。结果 2 4例初诊时存在IgH或Vδ2Dδ3基因重排的ALL患者CR后不同时期 5 1份骨髓标本中 ,MRD >0 .1%者 3例 ,其中 2例复发 ,1例失访 ,复发率为 75 %。MRD为 0 .0 0 2 %～ 0 .1%者 6例 ,1例复发 ,复发率为 17%。MRD <0 .0 0 2 %者 15例 ,无复发。复发组 3例MRD均值为 0 .2 39% ,未复发组 2 0例MRD均值为 0 .0 0 4%。复发组MRD明显高于未复发组 ,P<0 .0 5。结论 ALL时IgH和Vδ2Dδ3基因重排的定量检测的MRD增高 ,则病人的复发危险率随之增高。加强化疗后化疗药物对白血病细胞的杀伤效应使MRD减少 ,CR后MRD定期监测对指导化疗药物的选择、观察疗效。

缺血性糖尿病足部溃疡皮肤周边组织Vδ1T细胞IGF-1表达与MDA和SOD生成的研究

目的:探讨缺血性糖尿病足部溃疡皮肤Vδ1T细胞中胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor,IGF-1)的表达及其临床意义及溃疡皮肤周边组织丙二醛(malonal dehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxi de di smut ase,SOD)生成的研究。方法:双酶标免疫荧光标记Vδ1T细胞及IGF-1蛋白的表达,以Olympus Fluo View FV10i激光共聚焦显微镜观察和摄像,并用IMAGE-PRO PLUS 6.0分析IGF-1的表达。硫代巴比妥酸法测定MDA,黄嘌呤氧化酶法测定。实验分组:2008年10月～2010年年11月在湖南省郴州市第一人民医院住院和门诊的20例患者自愿捐献的标本,分为两组,每组10人,缺血性糖尿病足部溃疡组:男5例,女5例;正常足部皮肤对照组:正常对照组:男6例,女4例。结果:缺血性糖尿病足部溃疡组Vδ1T细胞IGF-1的表达较正常对照组减少,差异有统计学意义(P<0.001),溃疡周边皮肤组织MDA生成较正常对照组增加(P<0.001),而SOD较正常组减少(P<0.001)。结论:缺血性糖尿病足部溃疡皮肤Vδ1T细胞中IGF-1的表达减少,溃疡周边组织MDA生成增多,SOD生成减少,提示Vδ1T细胞中IGF-1的减少可能与缺血性糖尿病足部溃疡难以愈合有关,并且IGF-1减少与溃疡周边组织氧化应激有关。

MICA反应性Vδ1γδT细胞对上皮肿瘤细胞的细胞毒作用

目的研究人类MHCⅠ类链相关基因A(MICA)是否可以在体外诱导Vδ1γδT细胞的扩增,并且对MICA反应性Vδ1γδT细胞的细胞毒作用进行初步研究。方法采用分子克隆技术原核表达并纯化MICA蛋白,使用重组MICA蛋白在体外诱导肿瘤组织中的Vδ1γδ肿瘤浸润T淋巴细胞(TILs),3-(4,5-二甲基噻唑-乙-YL)-2,5-二甲基-四唑溴盐(MTT)法检测MICA反应性Vδ1γδTILs的细胞毒活性。结果原核表达系统pET30表达并纯化了MICA;固相化的MICA蛋白可以诱导肿瘤组织中的Vδ1γδTILs在体外扩增,同时Vδ1γδTILs对MICA+的肿瘤细胞具有明显杀伤活性。结论MICA反应性Vδ1γδT细胞可能是肿瘤过继免疫治疗的新的候选效应细胞。

人外周血中HMBPP特异性Vδ2T细胞细胞因子的产生和表型特征分析

目的研究人外周血单个核细胞中HMBPP特异性Vδ2 T细胞细胞因子的产生和表型特征。方法分离人外周血单个核细胞(PBMCs)和Vδ2 T细胞,用不同剂量的HMBPP和抗人CD28联合刺激培养不同的时间。用酶联免疫吸附法和酶联免疫斑点法检测IFN-γ、TNF-α和IL-2的产生,利用流式细胞术检测Vδ2 T细胞中IFN-γ、TNF-α和IL-2的百分比及表型特征。结果 HMBPP以剂量依赖和时间依赖的方式刺激PBMCs产生IFN-γ。流式细胞术从单个细胞水平证实PBMCs中有(2.27±0.50)%CD3+T细胞表达Vδ2,HMBPP特异性刺激Vδ2 T细胞表达IFN-γ[(38.84±2.62)%]和TNF-α[(26.65±2.05)%],其中(19.43±2.10)%Vδ2 T细胞共表达IFN-γ和TNF-α。表型分析显示,HMBPP特异性Vδ2 T细胞主要为效应型和中央型记忆细胞的表型特征,即CD45RO+CCR7+/-CD62L-。HMBPP刺激纯化的γδT细胞获得相同的结果。结论 HMBPP特异性诱导人PBMCs中Vδ2 T细胞产生细胞因子IFN-γ和TNF-α,表现为记忆细胞的表型特征,本研究为探究感染和炎症性疾病中Vδ2 T细胞的功能和免疫学特征提供了依据。

胃癌患者外周血Vδ2^+γδT细胞及其细胞因子的水平变化

目的研究胃癌患者外周血Vδ2+γδT细胞及其细胞因子的变化情况,并探讨其临床意义。方法分离胃癌患者及正常人外周血单个核细胞(PBMC),采用多种荧光标记抗体标记细胞表面分子,流式细胞术分析Vδ2+γδT型细胞及其干扰素γ(IFN-γ)、白介素17A(IL-17A)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达情况。结果胃癌患者外周血的Vδ2+γδT细胞比例与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Vδ2+γδT细胞中分泌IL-17A的细胞比例为(5.26±2.50)%,明显高于对照组(3.48±1.76)%(P<0.05)。胃癌组外周血IFN-γ+Vδ2+γδT细胞与TNF-α+Vδ2+γδT细胞比例分别为(46.24±20.01)%、(43.78±19.85)%,与对照组(60.10±20.75)%、(54.67±19.02)%比较显著降低(P<0.05)。结论胃癌患者外周血中分泌IFN-γ和TNF-α的Vδ2+γδT细胞比例显著减少,而分泌IL-17A的Vδ2+γδT细胞显著增加。提示上述三种细胞因子的分泌异常可能与胃癌的发生、发展有关。

CML患者外周血TCR Vδ亚家族T细胞的谱系变化研究

目的了解慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者慢性期(chronic phase,CP)和缓解期(complete remission,CR)外周血T细胞受体(T cell receptor,TCR)Vδ亚家族T细胞的分布和克隆性情况。方法利用RT-PCR扩增8例CML-CP和8例CML-CR患者外周血T细胞中8个Vδ亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解TCR Vδ亚家族T细胞的分布和利用情况;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性。10例健康人外周血作为对照。结果8例CML-CP患者外周血T细胞平均表达(3.25±0.89)个Vδ亚家族,主要以Vδ1、Vδ2和Vδ3的表达为主,而8例CR期患者则平均表达(3.50±0.76)个Vδ亚家族,主要集中在Vδ1、Vδ2、Vδ3和Vδ8中表达;两组与健康对照组(3.50±0.52)比较无统计学意义。此外,Vδ8表达频率在CML-CR患者(5/8)中略高于健康人(3/10)和CML-CP患者(2/8)。基因扫描绝大多数患者和健康人外周血TCR Vδ亚家族T细胞均存在克隆性增殖现象,主要以Vδ1-Vδ3为主,但在CML-CR患者中,表达Vδ7亚家族的两例样本均呈克隆性增殖,这在10例健康人中均未检测到。结论3组样本的外周血T细胞中TCR Vδ谱系和克隆性增殖类似,提示CML患者T细胞免疫抑制可能并不主要累及TCR Vδ谱系变化,并在CML-CR期所出现了一些不同的Vδ表达和克隆模式。

寻常型银屑病和汗孔角化症患者外周血Vγ9Vδ2 T细胞的表型分析

目的比较斑块状寻常型银屑病(psoriasis vulgaris,PV)和汗孔角化症(porokeratosis,PK)患者的外周血Vγ9Vδ2 T细胞比例和表型的变化。方法采用流式细胞术来检测PV组(n=33)、PK组(n=19)及正常对照(normal control,NC)组(n=33)的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中CD3、Vγ9、Vδ2、CLA、CD27、CD45RA的表达。结果与NC组相比较,Vγ9Vδ2 T细胞占总T细胞的比例和CLA+Vγ9Vδ2 T细胞占总Vγ9Vδ2 T细胞的比例分别在PV组(t=-2.349,P=0.0224;t=-3.277,P=0.0017)和PK组(t=-2.226,P=0.0306;t=-2.901,P=0.0055)出现显著减少;Vγ9Vδ2 T细胞分化成TCM的比例在PV组和PK组分别出现明显下降(t=-4.932,P<0.0001;t=-2.572,P=0.0131);同时,TEMRA的比例在PV组和PK组均出现明显升高(t=3.849,P=0.0003;t=2.236,P=0.0353);TEM比例的下降仅在PV组具有统计学意义(t=-3.303,P=0.0018)。结论PV和PK患者的外周血Vγ9Vδ2 T细胞的比例和表型具有相似性,该细胞可能迁移至皮肤,参与皮肤的自身炎症应答。